Các hợp chất flavonoid glycoside phân lập từ hoa cây trà hoa vàng camellia chrysantha

Tạp chí Hóa học, 2018, 56(3), 335-340 Bài nghiên cứu DOI: 10.15625/vjc.2018-0029 Các hợp chất flavonoid glycoside phân lập từ hoa Trà hoa vàng Camellia chrysantha Nguyễn Thị Hồng Vân1,2*, Cầm Thị Ính1, Phạm Cao Bách1, Trần Thị Tuyến1, Nguyễn Thị Thanh1,3, Nguyễn Hương Quỳnh1,4, Phạm Quốc Long1,2 Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Học viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Lớp CNHH12, Khóa 12, khoa Hóa-Lý kỹ thuật, Học Viện Kỹ thuật quân Trường Đại học Khoa học Công nghệ Hà Nội, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Đến Tòa soạn 16-5-2018; Chấp nhận đăng 30-5-2018 Abstract Camellia chrysantha (the golden camellia, golden tea) is a species of evergreen shrub or small tree belonging to the family Theaceae The flowers and the leaves of this plant are used as tea and drank for its health benefits The aim of this study was to investigate the chemical constituents of the flowers of Camellia chrysantha Five flavonoid glycosides were isolated from the ethyl acetate and the water-soluble fractions of the flowers of Camellia chrysantha, including vitexin (1), quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside (2), quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside (3), quercetin-3'-O-β-Dglucopyranoside (4) and quercetin-3-O-rutinose (5) Their chemical structures were elucidated by spectroscopic data analysis and by comparison with those reported in the literature Among five compounds, compounds 2, and were isolated for the first time from this species Keywords Camellia chrysantha, Theaceae, vitexin, quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside, quercetin-7-O-β-Dglucopyranoside, quercetin-3'-O-β-D-glucopyranoside, quercetin-3-O-rutinose ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Trà hoa vàng (Camellia chrysantha) thuộc họ Chè (Theaceae), loại gỗ nhỏ hay bụi, sinh sống khu rừng ẩm có độ cao 500 m Cây phân bố Trung Quốc Việt Nam.[1] Ở nước ta, lồi tìm thấy Ba Chẽ (Quảng Ninh) Trà hoa vàng loại dược liệu quý Theo nghiên cứu Trung Quốc, Trà hoa vàng có chứa nhiều nguyên tố vi lượng germanium, selenium, mangan, molypden, kẽm, vanadium; hoạt chất hoa Trà hoa vàng có tác dụng hạ huyết áp, giảm tiểu đường, hạ cholesterol, hạ mỡ máu, chống u bướu, tăng cường hệ miễn dịch kéo dài tuổi thọ Mặc dù loại dược liệu quý có nhiều công dụng, nay, nghiên cứu Trà hoa vàng có ít, nghiên cứu chủ yếu tập trung vào đặc tính thực vật làm cảnh Trà hoa vàng Trong báo này, chúng tơi trình bày việc phân lập xác định cấu trúc hóa học năm hợp chất flavonoid glycoside vitexin (1), quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside (2), quercetin-7335 Wiley Online Library O-β-D-glucopyranoside (3), quercetin-3'-O-β-Dglucopyranoside (4) quercetin-3-O-rutinose (5) từ hoa Trà hoa vàng THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu Mẫu hoa Trà hoa vàng Camellia chrysantha thu hái Ba Chẽ, Quảng Ninh vào tháng 12 năm 2016 Tên khoa học xác định nhà thực vật học TS Nguyễn Quốc Bình, Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Tiêu mẫu lưu giữ Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam (số tiêu mẫu THV01/BC-QN) 2.2 Hóa chất thiết bị Phổ khối lượng (ESI-MS): đo máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap spectrometer Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): đo © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim Tạp chí Hóa học máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, sử dụng chất nội chuẩn TMS Sắc ký cột (CC): sử dụng chất nhồi silica gel pha thường cỡ hạt 0,040-0,063 mm (60-230 mesh) 0,063-0,200 mm (230-400 mesh), silica gel pha đảo YMC RP-18 (30-50 μm) Merck Sắc ký lớp mỏng (TLC): thực mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck) Phát vệt chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 368 nm kết hợp dùng thuốc thử dung dịch H2SO4 10 %, sấy khơ hơ nóng từ từ bếp điện đến màu 2.3 Chiết tách phân lập chất Mẫu hoa Trà hoa vàng sau thu hái sấy khô nhiệt độ 50 oC sau nghiền thành bột Bột mẫu dược liệu (1 kg) ngâm chiết với dung môi etanol kết hợp siêu âm gia nhiệt 50 o C (3 lần × lần) Dịch chiết etanol sau cất loại dung mơi áp suất giảm thu cao chiết tổng etanol Cao ethanol bổ sung thêm nước chiết phân bố lại với dung môi n-hexan, cloroform etyl axetat; sau cô quay áp suất giảm để thu hồi dung môi thu phần cặn chiết n-hexan (cặn A), cloroform (cặn B) etyl axetat (cặn C), tương ứng Phần dịch nước lại sắc ký cột diaion rửa giải với H2O, sau với metanol; phần rửa giải methanol cô quay áp suất giảm để thu hồi dung môi thu cặn D Cặn C (35 g) tẩm khô với silica gel (Merck, 0,063-0,200 mm) tiến hành sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường (Merck, 0,063-0,200 mm), rửa giải hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH (100 % CH2Cl2, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5 100 % MeOH), thu phân đoạn (ký hiệu từ THV/C-1 đến THV/C-7) Phân đoạn THV/C-5 (1,5 g) tiến hành sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường (Merck, 0,04-0,06 mm) rửa giải hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH (8:1, v/v), thu phân đoạn nhỏ (ký hiệu từ THV/C5/1 đến THV/C5/8) Phân đoạn THV/C5/4 tiếp tục sắc ký cột silica gel pha thường (Merck, 0,040,06 mm) với hệ dung môi rửa giải CH2Cl2:CH3OH (10:1, v:v), sau tinh chế cột silica gel pha đảo (YMC RP-18) với hệ dung môi rửa giải CH3OH:H2O (2:1, v:v) thu hợp chất (chất rắn màu vàng nhạt, mg) Phân đoạn THV/C5/5 tiếp tục sắc ký cột silica gel pha thường (Merck, 0,04-0,06 mm) với hệ dung môi rửa giải CH2Cl2:CH3OH:H2O (8:1:0,08, v:v:v), sau tinh chế cột silica gel pha đảo (YMC RP-18) với hệ dung môi rửa giải CH3OH:H2O (1:1,5, v:v) thu hợp chất (chất rắn màu vàng nhạt, 10 mg) Nguyễn Thị Hồng Vân cộng Phân đoạn THV/C-6 (1,5 g) tiến hành sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường (Merck, 0,04-0,06 mm) rửa giải hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH (7:1, 5:1, 3:1, v:v), thu phân đoạn nhỏ (ký hiệu từ THV/C6/1 đến THV/C6/5) Phân đoạn nhỏ THV/C6/3 sau tiếp tục sắc ký cột silica gel pha đảo (YMC RP-18) với hệ dung môi rửa giải CH3OH:H2O (1:2, v:v) thu hợp chất (chất rắn màu vàng nhạt, mg) Cặn D (17 g) tẩm khô với silica gel (Merck, 0,063-0,200 mm) tiến hành sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường (Merck, 0,063-0,200 mm), rửa giải hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH:H2O (5:1:0,1, v:v:v) thu phân đoạn (ký hiệu từ THV/D/1 đến THV/D/5) Phân đoạn THV/D/4 sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH (7:1, v:v), sau tinh chế cột silica gel pha đảo (YMC RP-18) với hệ dung môi rửa giải MeOH:H2O (1:1,5, v:v) thu hợp chất (chất rắn màu vàng nhạt, mg) Phân đoạn THV/D/4 tinh chế cột silica gel pha đảo (YMC RP-18) rửa giải hệ dung môi MeOH:H2O (1:2, v:v), thu hợp chất (chất rắn màu vàng nhạt, mg) Hợp chất 1: vitexin Chất rắn màu vàng; ESI-MS: m/z 433 [M+H]+, C21H20O10; H-NMR (500 MHz, DMSO)  (ppm): 6,28 (s, H-3), 6,78 (s, H-6), 8,03 (d, J = 8,5 Hz, H-2′, H-6′), 6,90 (d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 4,70 (d, J = 10,0 Hz, H-1′′), 3,85 (br t, J = 9,5 Hz, H-2′′), 3,28 (H-3′′), 3,40 (br s, H-4′′), 3,24 (H-5′′), 3,54 (br m, Ha-6′′), 3,77 (br d, J = 11,5 Hz, Hb-6′′), 13,17 (5-OH); 13 C-NMR (125 MHz, DMSO)  (ppm): 163,98 (C-2), 102,47 (C-3), 182,11 (C-4), 156,02 (C-5), 98,17 (C-6), 162,57 (C-7), 104,63 (C-8), 161,15 (C-9), 104,08 (C-10), 121,64 (C-1′), 128,98 (C-2′, C-6′), 115,84 (C-3′, C-5′), 160,42 (C-4′), 78,69 (C-1′′), 73,41 (C-2′′), 70,87 (C-3′′), 70,58 (C-4′′), 81,85 (C-5′′), 61,32 (C-6′′) Hợp chất 2: quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside Chất rắn màu vàng nhạt; ESI-MS: m/z 463 [M-H]-, C21H20O12 H-NMR (500 MHz, CD3OD)  (ppm): 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 7,73 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,89 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,60 (1H, dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz, H6'), 5,26 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1"), 3,45 (1H, m, H2"), 3,49 (1H, m, H-3"), 3,35 (1H, m, H-4"), 3,23 (1H, m, H-5"), 3,59 (dd, J = 5,0 Hz, 12 Hz, H-6a"), 3,73 (dd, J = 2,5 Hz, 12 Hz, H-6b") 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD)  (ppm): 159,06 © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGa A, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 336 Bài nghiên cứu (C-2), 135,64 (C-3), 179,52 (C-4), 163,07 (C-5), 99,91 (C-6), 166,06 (C-7), 94,73 (C-8), 158,50 (C9), 105,71 (C-10), 123,10 (C-1'), 117,58 (C-2'), 145,93 (C-3'), 149,86 (C-4'), 116,02 (C-5'), 123,20 (C-6'), 104,33 (C-1"), 75,74 (C-2"), 78,13 (C-3"), 71,25 (C-4"), 78,40 (C-5"), 62,58 (C-6") Hợp chất 3: quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside Chất rắn màu vàng nhạt ESI-MS: m/z 463 [M-H]-, C21H20O12 H-NMR (500 MHz, CD3OD)  (ppm): 6,48 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,77 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 7,78 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,91 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,68 (1H, dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz, H6'), 5,07 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1"), 3,57 (1H, m, H2"), 3,55 (1H, m, H-3"), 3,52 (1H, m, H-4"), 3,42 (1H, m, H-5"), 3,73 (dd, J = 5,0 Hz, 12 Hz, H-6a"), 3,95 (dd, J = 2,5 Hz, 12 Hz, H-6b") 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD)  (ppm): 148,8 (C-2), 137,62 (C-3), 177,51 (C-4), 162,17 (C-5), 100,22 (C-6), 164,49 (C-7), 95,60 (C-8), 157,74 (C9), 106,29 (C-10), 123,96 (C-1'), 116,16 (C-2'), 146,26 (C-3'), 149,01 (C-4'), 116,27 (C-5'), 121,91 (C-6'), 101,71 (C-1"), 74,76 (C-2"), 77,89 (C-3"), 71,31 (C-4"), 78,39 (C-5"), 62,49 (C-6") Hợp chất 4: quercetin-3'-O-β-D-glucopyranoside Chất rắn màu vàng nhạt; ESI-MS: m/z 463 [M-H]-, C21H20O12 H-NMR (500 MHz, CD3OD)  (ppm): 6,19 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,45 (1H, d, J = 2,0 Hz, H8), 8,15 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 6,98 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5'), 7,88 (1H, dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz, H6'), 4,89 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-1"), 3,57 (1H, m, H2"), 3,53 (1H, m, H-3"), 3,51 (1H, m, H-4"), 3,49 (1H, m, H-5"), 3,98 (d, J = 12 Hz, H-6a"), 3,82 (dd, J = 3,5 Hz, 12 Hz, H-6b") 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD)  (ppm): 147,34 (C-2), 137,42 (C-3), 177,36 (C-4), 162,46 (C-5), 99,42 (C-6), 165,88 (C-7), 94,67 (C-8), 158,26 (C9), 104,50 (C-10), 125,08 (C-1'), 117,17 (C-2'), 146,70 (C-3'), 150,41 (C-4'), 118,13 (C-5'), 124,35 (C-6'), 104,36 (C-1"), 75,85 (C-2"), 77,63 (C-3"), 71,24 (C-4"), 78,40 (C-5"), 62,43 (C-6") Hợp chất 5: quercetin-3-O-rutinose Tinh thể hình kim mảnh, màu vàng; Mp.: 190192 oC ESI-MS: m/z 609 [M-H]-, C27H30O16 H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ (ppm): 1,14 (3H-CH3, d, J = 6,0 Hz, H-6'''), 3,32 (1H, m, H-5'''), 3,28 (1H, m, H-4'''), 3,56 (1H, dd, J = 9,5 Hz, 3,5 Hz, H-3'''), 3,65 (1H, dd, J = 3,5 Hz, 1,5 Hz, H-2'''), 4,54 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1'''), 3,83 (1H, dd, J = 10,5 Hz, 1,0 Hz, Hb-6''), 3,49 (1H, d, J = 1,0 Hz, Ha- Các hợp chất flavonoid glycoside 6''), 3,25-3,47 (4H, m, H-2'', H-3'', H-4'', H-5''), 5,12 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 7,65 (1H, dd, J = 2,5 Hz, 8,0 Hz, H-6'), 6,89 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), 7,69 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-2'), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,29 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) 13 C-NMR (CD3OD, 125 MHz)  (ppm): 17,8 (C6'''), 69,1 (C-5'''), 73,9 (C-4'''), 72,1 (C-3'''), 72,2 (C2'''), 102,4 (C-1'''), 68,5 (C-6''), 77,2 (C-5''), 71,4 (C4''), 78,1 (C-3''), 75,7 (C-2''), 104,6 (C-1''), 123,5 (C6'), 116,1 (C-5'), 149,8 (C-4'), 145,8 (C-3'), 117,7 (C-2'), 123,1 (C-1'), 105,6 (C-10), 159,3 (C-9), 94,9 (C-8), 166 (C-7), 99,9 (C-6), 162,9 (C-5), 179,4 (C4), 135,6 (C-3), 158,1 (C-2) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Từ phần cặn chiết ethyl acetate phần cặn nước hoa Trà hoa vàng, phương pháp chiết tách sắc ký cột, phân lập năm hợp chất ký hiệu 1, 2, 3, Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt, nóng chảy 273-275 oC Các phổ NMR có dạng phổ hợp chất flavone glucoside với hai tín hiệu singlet (do đo DMSO-d6) H 6,78 ppm 6,28 ppm, tín hiệu singlet rộng khác cộng hưởng vùng trường thấp (H 13,17) gợi ý có mặt nhóm hydroxyl C-5 khung flavone tạo thành liên kết hydro proton với nhóm cacbonyl C-4 Ngồi ra, có mặt vịng B para xác định hai tín hiệu doublet H 8,03 (2H) 6,90 (2H) với số tương tác J = 8,5 Hz Các proton cấu tử đường phát vùng tín hiệu H 3,24-4,70 ppm Đặc biệt, giá trị số tương tác J proton gắn vào carbon anome có giá trị cao (J = 10,0 Hz) so với giá trị tương ứng trường hợp đường nối qua liên kết O-glycoside Điều gợi ý có mặt cấu tử đường nối C-C vào aglycon.[2] Phổ 13CNMR xuất tín hiệu tương ứng 21 cacbon có 15 cacbon thuộc vào khung flavone cacbon thuộc vào cấu tử đường Nhóm cacbonyl xác định tín hiệu C 182,11; vòng B para xác định tín hiệu C 128,98 (CH) 115,84 (CH) mà chúng có cường độ píc cao gấp đơi tín hiệu CH khác Các giá trị C cấu tử đường (C 73,41, 70,87, 78,69, 70,58, 81,85, 61,32) hồn tồn phù hợp với tín hiệu tương ứng đường glucopyranoside có liên kết C-C.[2] Các giá trị  so sánh với giá trị tương ứng hợp chất vitexin (8-C-D-glucopyranosyl-apigenin)[3] cho kết phù hợp Ngoài ra, việc ghi phổ HSQC © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGa A, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 337 Tạp chí Hóa học HMBC thực để gán cách xác giá trị độ dịch chuyển hố học vị trí tương ứng Tương tác HMBC H1′′glc với C-2′′, C-3′′, C-5′′, C-7, C-8, C-9 khẳng định thêm giá trị  C-2′′, C-3′′, C-5′′ mà cịn khẳng định có mặt liên kết C-C vị trí liên kết C-8 Tương tác HMBC H-6 (H 6,28) với C-8, C-10, tương tác H-3 (H 6,78) với C-10, C-1′ khẳng định có mặt hai nhóm hydroxyl C-5 C-7, nối đơi C-2/C-3 Thêm vào đó, tương tác HMBC rõ proton 5-OH (H 13,17) với C-5 (C 160,42) tương tác H-1′′glc với C-9 (C 156,02) khẳng định giá trị C C-9 156,02 C-5 phải 160,42 Các kết phân tích nêu cho thấy công thức dự kiến C21H20O10 Kết khẳng định thêm xuất pic ion giả phân tử m/z 433 [M+H]+ phổ khối lượng ESI-MS Từ kết nêu trên, kết hợp với tài liệu tham khảo,[3] hợp chất xác định vitexin Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt, có nhiệt độ nóng chảy 183-183 oC Các tín hiệu nhận phổ NMR gợi ý cho thấy flavone glucoside Cụ thể, phổ 1HNMR, ba tín hiệu đặc trưng cho ba proton vịng thơm tương tác kiểu ABX H 7,73 (d, J = 2,0 Hz), 6,89 (d, J = 8,5 Hz) 7,60 (dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz) thể có mặt vòng thơm B bị ba vị trí 1, 4; hai tín hiệu doublet H 6,23 (d, J = 2,0 Hz) 6,42 (d, J = 2,0 Hz) thể có mặt hai proton vị trí metha với vịng A bị vị trí Về phía trường cao xuất tín hiệu cộng hưởng cấu tử đường β-Dglucopyranoside, bao gồm tín hiệu doublet H 5,26 đặc trưng cho proton anome, giá trị số tương tác J 7,5 Hz cho thấy cấu tử đường nối qua liên kết O-glycoside vào khung aglycon; hai tín hiệu doublet doublet H 3,73 (dd, J = 2,5 Hz, 12 Hz) 3,59 (dd, J = 5,0 Hz, 12 Hz) đặc trưng cho hai proton nhóm metylen, với bốn tín hiệu khác nằm vùng H 3,23-3,49 bốn nhóm oxi methin cịn lại Tương ứng, phổ 13C-NMR phổ DEPT xuất tín hiệu cộng hưởng 21 nguyên tử cacbon, có 15 cacbon thuộc khung flavone cacbon thuộc cấu tử đường, bao gồm: 01 nhóm CH2, 10 nhóm CH 10 cacbon bậc bốn Tín hiệu C 179,52 ppm đặc trưng cho cacbon nhóm cacbonyl C-4 Phổ HSQC cho phép xác định proton gắn với cacbon tương ứng, nhóm methylen cấu tử đường Nguyễn Thị Hồng Vân cộng xác định H 3,73 3,59 ppm/C 62,58 ppm Trên phổ HMBC, tương tác proton anome H 5,26 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1") với cacbon C-3 H 135,64 ppm chứng tỏ cấu tử đường gắn vào vị trí C-3 khung flavone Tổng hợp liệu phổ thu hợp chất 2, kết hợp đối chiếu với liệu phổ tài liệu tham khảo,[4] hợp chất xác định quercetin3-O-β-D-glucopyranoside Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt Tương tự hợp chất 2, tín hiệu phổ NMR cho thấy flavone glucoside Cụ thể, phổ 1H-NMR, ba tín hiệu đặc trưng cho ba proton thơm tương tác kiểu ABX vịng B bị ba vị trí 1, H 7,78 (d, J = 2,0 Hz), 6,91 (d, J = 8,5 Hz) 7,68 (dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz); hai tín hiệu doublet H 6,48 (d, J = 2,0 Hz) 6,77 (d, J = 2,0 Hz) thể có mặt hai proton vị trí metha với vịng A bị vị trí Về phía trường cao thấy xuất tín hiệu cộng hưởng cấu tử đường β-D-glucopyranoside, có tín hiệu doublet H 5,07 ppm với số tương tác J 7,5 Hz đặc trưng cho proton anome Trên phổ 13 C-NMR phổ DEPT hợp chất xuất tín hiệu cộng hưởng 21 nguyên tử cacbon, có 15 cacbon thuộc khung flavone cacbon thuộc cấu tử đường Tuy nhiên, khác với hợp chất 2, phổ HMBC hợp chất có mối tương tác proton anome H 5,07 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1") với cacbon C-7 H 164,49 ppm, chứng tỏ cấu tử đường gắn vào vị trí C-7 khung flavone Tổng hợp liệu phổ thu hợp chất 3, kết hợp đối chiếu với liệu phổ tài liệu tham khảo,[5] hợp chất xác định quercetin7-O-β-D-glucopyranoside Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt Tương tự hợp chất 3, tín hiệu phổ NMR cho thấy flavone glucoside: ba tín hiệu đặc trưng cho ba proton vòng thơm tương tác kiểu ABX H 8,15 (d, J = 2,0 Hz), 6,98 (d, J = 8,5 Hz) 7,89 (dd, J = 2,0 Hz, 8,5 Hz) thể có mặt vịng thơm B bị ba vị trí 1, 4; hai tín hiệu doublet H 6,19 (d, J = 2,0 Hz) 6,45 (d, J = 2,0 Hz) thể có mặt hai proton vị trí metha với vịng A bị vị trí Về phía trường cao thấy xuất tín hiệu cộng hưởng cấu tử đường β-D-glucopyranoside, có tín hiệu doublet H 4,89 ppm với số tương tác J 7,0 Hz đặc trưng cho proton anome Tương ứng, phổ 13C-NMR phổ DEPT © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGa A, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 338 Bài nghiên cứu hợp chất thấy xuất tín hiệu cộng hưởng 21 nguyên tử cacbon, bao gồm 15 cacbon thuộc khung flavone cacbon thuộc cấu tử đường Tuy nhiên, khác với hợp chất 3, phổ HMBC hợp chất có mối tương tác proton anome H 4,89 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-1") với cacbon C-3' H 146,70 ppm, chứng tỏ cấu tử đường gắn vào vị trí C-3' khung flavone Tổng hợp liệu phổ thu hợp chất 4, kết hợp đối chiếu với liệu phổ tài liệu tham khảo,[6] hợp chất xác định quercetin-3'-O-β-Dglucopyranoside Hợp chất thu dạng tinh thể hình kim mảnh màu vàng, điểm nóng chảy 190-192 oC Tương tự hợp chất 2, 4, phổ NMR hợp chất có dạng phổ hợp chất flavone glycoside phần đường phức tạp hơn, bao gồm hai cấu tử đường: rhamnopyranosyl glucopyranosyl Trên phổ 1H-NMR có xuất hai tín hiệu doublet proton cặp meta vòng A δH 6,29 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,42 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) ba tín hiệu doublet khác δH 7,69 (1H, d, Jmeta = 2,5 Hz, H-2′), 6,89 (1H, d, Jocto = 8,0 Hz, H-5′) 7,65 (dd, Jocto meta = 8,0/2,5 Hz, H-6′) vòng B 1, 3, 4, chứng tỏ cấu trúc phần aglycon hợp chất quercetin Điều thấy rõ ràng phổ 13C-NMR xuất tín hiệu 15 nguyên tử cacbon khung flavonoid, bao gồm cacbon nhóm CH vùng thơm (δC nằm vùng từ 94,9 đến 123,5 ppm), cacbon nhóm cacbonyl (δC 179,4 ppm) cacbon bậc Tín hiệu cộng hưởng nhóm CH nằm vùng δH 3,25-3,85 ppm phổ 1HNMR δC 68,5 - 78,1 ppm phổ 13C-NMR với xuất tín hiệu doublet proton anome δH 4,54 (1H, d, J = 1,5 Hz) 5,12 (1H, d, J = 7,5 Hz) tín hiệu nhóm methyl methylen δC 17,87 68,5 ppm phổ HSQC cho thấy cấu trúc có chứa hai gốc đường α-L-rhamnopyranosyl β-D-glucopyranosyl Trên phổ HMBC nhận thấy có tương tác proton anome cấu tử đường glucopyranosyl (δH 5,12 ppm) carbon C-3 khung flavonoid (δC 135,6 ppm), điều cho thấy gốc đường glucopyranosyl gắn vào vị trí C-3 phần khung aglycon Trên phổ HMBC cho thấy tương tác proton anome cấu tử đường rhamnopyranosyl δH 4,54 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1''') với cacbon C-6'' (δC 68,5 ppm) cấu tử đường glucopyranosyl, tương tác cacbon C-1''' cấu tử đường rhamnopyranosyl (δC 102,4 ppm) với proton H-6'' cấu tử đường glucopyranosyl δH 3,83 (1H, dd, J = 10,5/1,0 Hz, Hb-6''), cho thấy cấu tử đường Các hợp chất flavonoid glycoside nối với qua liên kết C-1 với C-6 Các liệu phổ NMR tương ứng với công thức phân tử C27H30O16 Kết hợp với tài liệu,[7] hợp chất xác định quercetin-3-O-rutinoside OH 6'' HO OH 5'' 3'' O HO OH 2' 1'' HO O 4' 1' 5' 6' 10 OH O OR3 OH OH R 2O 2' O 1' 5' 6' 10 OH OR1 O 2: R1=β-D-glucopyranoside, R2=R3=H 3: R2=β-D-glucopyranoside, R1=R3=H 4: R3=β-D-glucopyranoside, R1=R2=H 5: R1=α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-Dglucopyranoside, R2=R3=H KẾT LUẬN Từ cặn chiết etyl axetat phần cặn nước hoa Trà hoa vàng (Camellia chrysantha) phân lập xác định cấu trúc hóa học năm hợp chất flavonoid glycoside vitexin (1), quercetin-3-O-βD-glucopyranoside (2), quercetin-7-O-β-Dglucopyranoside (3), quercetin-3'-O-β-Dglucopyranoside (4) quercetin-3-O-rutinose (5) Các hợp chất 2, lần phân lập từ Trà hoa vàng Camellia chrysantha Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Đề tài Hóa Dược thuộc Chương trình Hóa Dược (Bộ Công thương), mã số đề tài CNHD.ĐT.072/16-18 Tác giả xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Quốc Bình tiến hành thu hái giám định mẫu thực vật TÀI LIỆU THAM KHẢO The IUCN Red List of Threatened Species Camellia chrysantha,http://dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.1998 RLTS.T32315A9695863.en Agrawal P K Carbon 13C-NMR of flavonoids, Elsevier Science Publishers B V., 1989 Yin F., Hu L., Pan R Novel dammarane-type glycoside from Gynostemma pentaphyllum, Chem Pharm Bull., 2004, 52, 1440-1444 © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGa A, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 339 Tạp chí Hóa học Syed Mustafa Ghanadiana, Abdul Majid Ayatollahi, Suleiman Afsharypour, Sumaira Hareemd, Omer Mohamed Abdallad, Jean Jules Kezetas Bankeue Flavonol glycosides from Euphorbia microsciadia Bioss with their immunomodulatory activities, Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 2012, 11(3), 925-930 Jean Legault, Tommy Perron, Vakhtang Mshvildadze, Karl Girard-Lalancette, Ste´phanie Perron, Catherine Laprise, Pascal Sirois, Andre Pichette Antioxidant and anti-inflammatory activities of quercetin-7-O-β-Dglucopyranoside from the leaves of Brasenia Nguyễn Thị Hồng Vân cộng schreberi, J Med Food, 2011, 14(10), 1127-1134 You-Lin Xue, Tomoyuki Ahiko, Takuya Miyakawa, Hisako Amino, Fangyu Hu, Kazuo Furihata, Kiyoshi Kita, Takuji Shirasawa, Yoriko Sawano, Masaru Tanokura Isolation and Caenorhabditis elegans lifespan assay of flavonoids from Onion, J Agric Food Chem., 2011, 59, 5927-5934 Abdallah H M., Almowallad F M., Esmat A., Shehata I A., Abdel-Sattar E A Investigation of phenolic constituents of Carduncellus eriocephalus Boiss var albiflora Gauba and their biological activities, Phytochemistry Letters, 2015, 13, 74-80 Liên hệ: Nguyễn Thị Hồng Vân Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Số 18, Hoàng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, Hà Nội, Việt Nam E-mail: nguyenthihongvan.inpc.vast@gmail.com; Điện thoại: +84- 96885681 © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGa A, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 340 ... VÀ THẢO LUẬN Từ phần cặn chiết ethyl acetate phần cặn nước hoa Trà hoa vàng, phương pháp chiết tách sắc ký cột, phân lập năm hợp chất ký hiệu 1, 2, 3, Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt,... R1=α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-Dglucopyranoside, R2=R3=H KẾT LUẬN Từ cặn chiết etyl axetat phần cặn nước hoa Trà hoa vàng (Camellia chrysantha) phân lập xác định cấu trúc hóa học năm hợp chất flavonoid glycoside vitexin (1), quercetin-3-O-βD-glucopyranoside... Tổng hợp liệu phổ thu hợp chất 3, kết hợp đối chiếu với liệu phổ tài liệu tham khảo,[5] hợp chất xác định quercetin7-O-β-D-glucopyranoside Hợp chất thu dạng chất rắn màu vàng nhạt Tương tự hợp chất