Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẶC ĐIỀM DI TRUYỀN LAI CỦA LOÀI LAN HÀI LAI Tự NHIÊN (Paphỉopedỉlum d[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẶC ĐIỀM DI TRUYỀN LAI CỦA LOÀI LAN HÀI LAI Tự NHIÊN (Paphỉopedỉlum dalatense) ĐẶC HỮU VIỆT NAM Sinh viên thực : Trần Thành Phú Chuyên ngành TP.HCM, tháng năm 2018 : Công nghệ sinh học Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN LAI CỦA LOÀI LAN HÀI LAI Tự NHIÊN (Paphỉopedỉlum dalatense) ĐẶC HỮU VIỆT NAM Sinh viên thực : Trần Thành Phú Mã số sinh viên :1411534696 Lớp : 14DSH01 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dẫn : ThS.Vũ Thị Huyền Trang ThS.Huỳnh Văn Hiếu TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Nguyền Tất Thành tạo điều kiện giúp đờ em suốt trình học tập trường Tơi xin cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa tồn thể cán nhân viên thầy cô Khoa Công nghệ sinh học Môi trường tận tâm giảng dạy, truyền đạt kiến thức quý giá ln tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn tới ThS Vũ Thị Huyền Trang ThS Huỳnh Văn Hiếu Người dành thời gian, công sức, tận tâm dạy bảo, nhiệt tình hướng dần, giúp đỡ góp ý cho tơi lời khun bo ích kiến thức chun mơn suốt q trình nghiên cứu, để có the hồn thành tốt khóa luận Tiếp theo, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới ba mẹ Người sinh con, nuôi dưỡng, dạy dồ nên người, tạo điều kiện vật chất lần tinh thần, điếm tựa vừng cho suốt trình học tập nghiên cứu đe hồn thành tốt khóa luận Cuối cùng, gửi lời cảm ơn tới anh chị phịng thí nghiệm, bạn bè thân u ngồi lớp ln động viên, chia sẻ, khích lệ, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thành khóa luận Trần Thành Phú Khoa Cơng nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành 11 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix DANH MỤC CÁC BẢNG X ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Lan Hài Đà Lạt Paphiopedilum daỉatense 1.1.1 VỊ trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.2.1 Paphỉopedilum dalatense 1.1.2.2 Paphiopedilum callosum 1.1.2.3 Paphỉopedilum villosum 1.1.3 Đặc điểm sinh học lan Hài Paphiopedilum 1.1.4 Khái niệm di truyền lai 1.2 Di truyền nhân di truyền nhân 1.2.1 Di truyền nhân (Nhiễm sắc thể) 1.2.2 Di truyền nhân 1.2.3 Biến dị di truyền 1.3 Một số vùng trình tự thường sử dụng nhận diện đặc điểm di truyền 1.3.1 Vùng ITS 1.3.2 Gen maíK iii 1.3.3 Intron írnL 1.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.4.2 Các nghiên cứu nước 11 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 12 2.1 Nơi thực 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 12 2.3 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 12 2.4 Phương pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Thu thập xử lý mẫu 14 2.4.2 Tách chiết thu nhập DNA tổng số 14 2.4.3 Kiếm tra chất lượng DNA kì thuật điện di 16 2.4.4 Khuếch đại vùng trình tự PCR 17 2.4.5 Giải trình tự hiệu chỉnh trình tự DNA 19 2.4.6 Phương pháp phân tích tính đa hình trình tự 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Thu thập mẫu, xử lí mẫu tách chiết DNA loài Paphiopedilum dalatense, Paphiopedihưn callosum Paphiopedilum villosum Việt Nam 21 3.2 Khuếch đại, giải hiệu chỉnh trình tự vùng trình tự ITS, /Mứ/K /777 L 24 3.2.1 Trình tự vùng ITS 24 3.2.2 Trình tự gene mưrK 27 3.2.3 Trình tự Intron t/7?L 29 IV 3.3 Thu thập trình tự lồi Paphiopedỉlum villosum, Paphiopedilum callosum, Paphiopediỉum dalatense từ ngân hàng GenBank Xác định so sánh tính đa hình trình tự mầu Việt Nam trình tự giới 31 3.4 So sánh xác định đặc điểm di truyền lai Paphiopedilum dalatense hai loài bô mẹ Paphỉopedilum callosum Paphiopedilum villosum dựa vào vùng trình tự 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 46 V TÓM TẢT Lan Hài Paphiopedilum daỉatense giống lan lai tự nhiên đặc hừu Việt Nam có giá trị cao thị trường hoa cảnh Đe tài: “Đặc điểm di truyền lai ciía lồi lan Hài lai tự nhiên (Paphiopedilum dalatense) đặc hữu Việt Nam.” thực từ tháng 2/2018 đến 8/2018 Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường trường Đại học Nguyễn Tất Thành Mục tiêu phân tích đặc điểm di truyền lai cùa loài lan Hài Paphiopedilum dalatense đặc hữu Việt Nam Đe tài có nội dung: Thu thập mẫu, xử lí mẫu, tách chiết DNA, khuếch đại, giải hiệu chỉnh trình tự, xác định so sánh tính đa hình trình tự xác định đặc điểm di truyên lai loài Paphỉopedilum dalatense, Paphỉopedilum callosum Paphiopedilum villosum Việt Nam Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Thu thập thành công, xử lý tách chiết DNA tong số Xây dựng thành cơng, giải trình tự hiệu chỉnh trình tự loài Paphiopedilum Việt Nam So sánh chuỗi Papìũopedilum dalatense, Paphiopediỉum callosum Paphiopedilum vỉllosum Việt Nam với GenBank Xác định thành cơng tính đa hình đặc điểm di truyền giống Paphiopedỉlum dalatense lai so với bô mẹ Paphiopedilum callosum Paphiopediỉum villosum VI SUMMARY Paphiopedilum dalatense is an endemic Paphiopedilum species of Vietnam and has hish value in the orchid market We have carried out the project: “Genetic characteristics of the natural hybrid endemic species Paphiopedilum dalatense of Vietnam” From February 2018 to August, 2018 at the Faculty of Biotechnology and Environment at Nguyen Tat Thanh University The objectives are to analysis of hybrid genomes of endemic paphiopedilum dalatense Vietnam Contents of topic include: sample collection, DNA extraction, amplification, sequence editing, identification and comparison of sequence polymorphism and genetic characterization of Paphiopedilum dalatense species , Paphiopedilum callosum and Paphiopedilum villosum in Vietnam Results after months: Sucessfully collecting, pretreating and extracting of total DNA Sucessfully amplifying, solrig and editing sequence of species Paphiopedilum in Viet Nam Comparing the sequence of Paphiopedilum dalatense, Paphiopedilum callosum and Paphiopedilum villosum in Viet Nam with the GenBank Sucessfully determined the polymorphics and genetic characteristics of hybrid Paphiopedilum dalatense in comparison with parents Paphiopedilum callosum and Paphiopedilum villosum vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DNA Deoxyribonucleic acid bp Base pair ITS Internal transcribed spacer matK maturase K trnL tRNA-Leu PCR Polymerase Chain Reaction NCBI The National Centre for Biotechnology Information IUCN International Union for Conservation of Nature and Natural Resources RNA ARN vận chuyên-ribonucleic acid rARN Ribosom ribonucleic acid tARN ARN ribosom-Transfer ribonucleic acid kb kilobyte RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA V111 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Paphiopedilum dalatense (Nguồn: (Averyanov ctv, 2004)) Hình 3.1 DNA tổng số 17 mầu thu Hình 3.2 Ket điện di khuếch đại vùng ITS loài Paphiopedilum dalatense, Paphiopedilum callosum Paphỉopedilum villosum Hình 3.3 Trình tự DNA vùng ITS sử dụng hiệu chỉnh Hình 3.4 Trình tự DNA vùng ITS lồi Cal 142 Hình 3.5 Kết điện di khuếch đại gene morK Hình 3.6 Trình tự DNA gene /nK sử dụng hiệu chỉnh Hình 3.7 Ket điện di khuếch đại Intron ír/ĩL Hình 3.8 Trình tự DNA Intron trnL, sử dụng hiệu chỉnh IX ... dạng lan Hài Vì lý chúng tơi chọn đề tài: ? ?Đặc điểm di truyền lai loài lan Hài lai tự nhiên (Paphiopedilum dalatense) đặc hữu Việt Nam? ?? Mục tiêu: ‘Phân tích đặc điểm di truyền lai loài lan Hài. .. TẢT Lan Hài Paphiopedilum daỉatense giống lan lai tự nhiên đặc hừu Việt Nam có giá trị cao thị trường hoa cảnh Đe tài: ? ?Đặc điểm di truyền lai ciía lồi lan Hài lai tự nhiên (Paphiopedilum dalatense). .. Trong số Paphiopediỉum dalatense loài lan Hài lai tự nhiên đặc hữu Việt Nam từ hai loài lan Hài Paphiopediỉum callosum Paphiopedilum villosum Tuy nhiên, Paphiopedilum dalatense loài lai nên thường