Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc trên dòng tế bào ung thư gan Hepg2 của ca N-Hexane từ lá thiết đinh cà ná (Markhamia stipulata Var. canaense V.S. Dang.pdf

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HỐ HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY Độc TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THU GAN HEPG2 CỦA CAO /V-HEXANE TƯ LÁ THIẾT ĐINH CÀ NÁ (MARKHAMIA STIPULATA VAR CANAENSE v.s DANG) Sinh viên thực : Nguyền Khánh Linh Chuyên ngành TP.HCM, tháng năm 2018 : Công nghệ sinh học Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG cĩÊĨIbo KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẢN HỐ HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY Độc TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THU GAN HEPG2 CỦA CAO A-HEXANE TÙ LÁ THIẾT ĐINH CÀ NÁ (MARKHAMIA STIPULATA VAR CANAENSE v.s DANG) Sinh viên thực : NGUYỄN KHÁNH LINH Mãsốsinhviên : 1411513984 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần : TS NGUYÊN TÁN PHÁT TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại Học Nguyền Tất Thành, Ban chù nhiệm khoa Công nghệ Sinh học, tất thầy cô đà truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt năm học tập nhà trường Lòng biết ơn sâu sắc chân thành đến giảng viên TS Nguyền Tấn Phát, ThS NCS Ngô Trọng Nghĩa người hướng dần, giúp đỡ, bảo em suốt trình thực đề tài Chân thành cảm ơn lãnh đạo, anh chị phịng thí nghiệm Viện Cơng nghệ Hoá Học - Viện Hàn Lâm Khoa Học & Công Nghệ Việt Nam giúp đỡ cho nhiều suốt trình thực đề tài Tuy nhiên thân cịn thiếu nhiều kinh nghiệm thực tiễn nên nội dung báo cáo không tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận góp ý bảo thêm quý thầy anh chị phịng thí nghiệm Viện Cơng nghệ Hố Học - Viện Hàn Lâm Khoa Học & Công Nghệ Việt Nam đe báo cáo hoàn thiện Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, ba mẹ tất bạn bè đồng hành động viên hồ trợ tinh thần suốt trình học tập Xin chân thành cảm ơn! NGUYỀN KHÁNH LINH Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành 11 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẮT V DANH MỤC CÁC CHỪ VIẾT TẦT vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix DANH MỤC CÁC BẢNG X DANH MỤC PHỤC LỤC xi ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Mô tả Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulate! var canaense v.s Dang) 1.1.1 Giới thiệu đối tượng nghiên cứu 1.1.2 Mô tả Thiết đinh 1.2 Thành phần hoá học 1.2.1 Cây Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulata var canaense v.s Dang) 1.2.1.2 Các nghiên cứu nước 1.2.1.3 Các nghiện cứu nước 1.3 Nghiên cứu hóa học cùa khác chi Markhamia 1.3.1 Markhamia acuminata 1.3.2 Markhamia lutea 1.3.4 Markhamia platycalyx 1.3.5 Markhamia stipulata 1.3.6 Markhamia tomentosa 1.3.7 Markhamia zanzibarica 1.4 Nghiên cứu hoạt tính sinh học 15 1.4.1 Cây Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulata var canaense v.s Dang) 15 1.4.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học khác chi Markhamia.U) 1.5 Sơ lược bệnh ung thư gan 16 1.5.1 Khái niệm ung thư 16 iii 1.5.2 ưng thư gan 16 1.5.2.1 Nguyên nhân gây bệnh ung thư gan 16 1.5.2.2 Các giai đoạn phát trien cùa ung thư gan 17 CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 20 2.1 Vật liệu nghiên cứu 20 2.1.1 Đoi tượng nghiêncứu 20 1.2 Thiết bị dung cụ 20 2.1.3 Noi thực 20 2.1.4 Hóa chất 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Thu hải xử lý mẫu 21 2.2.2 Điều che cao chiết 21 2.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 23 2.3.1 Nguyên tắc 23 2.3.2 Quy trình khảo sát hoạt tính gây độc phương pháp SRB 23 2.3.3 Đọc kết 24 2.4 Phân lập hợp chất 24 2.5 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LƯẬN 27 3.1 Ket điều chế cao chiết phân lập hợp chất từ cao n-hexane 27 3.2 Xác định cấu trúc 31 3.2.1 Xác định cấu trúc MSH03 31 3.2.2 Xác định cấu trúc MSH04 34 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 41 iv TĨM TẮT Đe tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư gan HepG2 ciia cao K-hexane từ thiết đinh cà ná (Markhamia stipulate var canaense v.s Dang)” Thời gian 30/01/2018 kết thúc vào 30/06/2018, địa điếm nghiên cứu Phịng Các chất có hoạt tính sinh học, Viện Cơng nghệ Hóa học, số 01, Mạc Đĩnh Chi, Q 1, TP HCM Đe tài gồm có ba nội dung: điều chế cao chiết, nghiên cứu hoạt tính sinh học nghiên cứu thành phần hóa học Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Điều chế cao chiết cách tiến hành thu mầu Thiết đinh Cà Ná Xử lý nguyên liệu, phoi khơ Tạo dịch chiết ethanol 96°, sau phân bố lại dung môi /7-hexane, ethyl acetat nước Điều chế cao /7-hexane có độ phân cực khác thành phân đoạn Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan HepG2 cao /7-hexane gồm phân đoạn Tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn có hoạt tính cao Xác định cấu trúc hợp chất phân lập cách sử dụng phưong pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) Thu hợp chất với ký hiệu mẫu MSH03, MSH04 Trong MSH03 7,4’-O-dimethylapigenin MSH04 Apigenin V SUMMARY Topic: Study on chemical composition and cytotoxic activity of the n-hexane extract form Markhamia stipulata var canaense v.s Dang leaves against human liver cancer cell line (HepG2) Lead time: 30/01/2018 - 30/06/2018 Location: INSTITUTE OF CHEMICAL TECHNOLOGY - 01 Mac Dinh Chi Street, district 1, Ho Chi Minh city Result: This thesis consists of three main parts: sample preparation, research on cytlotoxic activity and chemical composition The leaves of Markhamia stipulata var canaense were air-dried Created 96° ethanol extract, then redistributed such as n-hexane, ethyl acetate and water Preparation of n-hexane extract with different polarities is divided into fractions Test on cytotoxic activity of /7-hexane in human liver cancer cell line (HepG2): fractions Conduct research on chemical compositions in the highest activitive fractions Determine the chemical structure of isolated compounds by using nuclear magnetic resonance method (NMR) Obtained compounds: MSH03 (7,4’-ODimethylapigenin) and MSH04 (Apigenin) VI DANH MỤC CÁC CHỮ VIÉT TẮT kg: kilogram g: gram mg: milligram nr Mũi đa (multiplet) C: Chloroform d: Mũi đôi (doublet) dd: Mũi đôi-đôi (doublet of doublet) DMSO: Dimethyl sulfoxide DEPT: Distortionless Enhancement by Polarrization Transfer EA: Ethyl Acetate 'H-NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Hydro Nuclear Magnetic Resonance) 13C-NMR: Pho cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 (Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance) H: /?-Hexane HMBC: Tương quan H-C qua nhiều noi (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) HSQC: Tương quan H-C qua noi (Heteronuclear Single Quantum Correlation) Hz: Hertz J: Hang so ghép (coupling constant) Me: Methanol NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) ppm: Phần triệu (part per million) 5: Mũi đơn (singlet) ĐLC: Độ lệch chuẩn EtOH: Ethanol Ổ: Độ chuyển dịch hóa học (Chemical shift) mL: Mililit (Milliliter) Vil SKC: Sắc ký cột viii DANH MỤC • CÁC HÌNH Hình 1.1 Anh Markhamia stipulate! var canaense v.s Dang Hình 1.2 Lá gan khoẻ mạnh (trái) gan bị xơ với nhiều u cục Hình 3.1 Các tuơng tác HMBC cấu trúc hợp chat MSH03 Hình 3.2 Các tương tác HMBC cấu trúc MSH04 Sơ đồ 2.1 Quy trình tách chiết cao /7-hexane từ Thiết đinh Cà Ná (Markhatnỉa stipuỉata var canaense v.s Dang) Sơ đồ 2.2 Quy trình phân lập hợp chất từ cao 77-hexane Sơ đồ 3.1 Kết điều chế cao chiết Sơ đồ 3.2 Kết phân lập hợp chất từ cao /7-hexane IX ... điều trị bệnh ung thư Nên nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư gan HepG2 cao n-hexane từ Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulate var canaense V.s.. . có độ phân cực khác thành phân đoạn Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan HepG2 cao /7-hexane gồm phân đoạn Tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn có hoạt tính cao Xác định cấu trúc... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG cĩÊĨIbo KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẢN HỐ HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY Độc TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THU GAN HEPG2