Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc trên dòng tế bào ung thư cổ tử cung Hela của Cao N-Hexane từ lá thiết đinh cà ná ((Markhamia stipulata var. canaense v.s. dang).pdf

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH LUẬN VĂN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TRÊN DỊNG TÉ BÀO UNG THU CÓ TỦ CUNG HELA CỦA CAO V-HEXANE TỪ LÁ THIÉT ĐINH CÀ NÁ (MARKHAMIA STIPULATA VAR CANAENSE v.s DANG) Trần Thị Minh Tâm Sinh viên thực : Chuyên ngành : Công nghệ sinh học TP.HCM, tháng năm 2018 Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẮT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG LUẬN VÀN TĨT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TRÊN DỊNG TÉ BÀO ƯNG THU CĨ TỦ CUNG HELA CỦA CAO 7V-HEXANE TÙ LÁ THIẾT ĐINH CÀ NÁ (MARKHAMIA STIPULATA VAR CANAENSE V.s DANG) Sinh viên thực : Trần Thị Minh Tâm Mă số sinh viên : 1411529695 Lớp : 14DSH02 Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần : TS Nguyễn Tấn Phát TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Đe có ngày hơm lời tơi xin chân thành cảm ơn đến ba mẹ sinh nuôi học đến ngày hôm cho vật chất tinh thần đe chấp cánh ước mơ Tôi cảm ơn ban giám hiệu Trường Đại học Nguyễn Tất Thành tạo cho môi trường học tập thật tốt giảng viên giỏi chuyên môn Tôi chân thành cảm ơn thầy cô Khoa Công nghệ Sinh học Môi Trường - Trường Đại học Nguyễn Tất Thành hồ trợ việc học suốt thời gian qua Cảm ơn Viện Cơng nghệ Hóa học cho môi trường thực nghiệm thật tốt suốt thời gian làm khóa luận Cuối lời cảm ơn đặc biệt đen giảng viên TS Nguyễn Tấn Phát, phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học, Viện Cơng nghệ Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam ThS NCS Ngơ Trọng Nghía, giảng viên Trường Đại học Kiên Giang Suốt thời gian qua thầy bỏ nhiều thời gian tâm sức để hướng dẫn tơi, dù khó khăn thầy động viên an ủi Thầy dạy nhiều kiến thức học tập việc sống điều mà chưa rõ Tôi sè không quên công ơn thầy Trần Thị Minh Tâm Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii TÓM TẮT V DANH MỤC CÁC CHỪ VIẾT TẦT vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix DANH MỤC PHỤ LỤC ix DANH MỤC CÁC BẢNG xiii ĐẶT VÁN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tên gọi phân loại: Markhamia stipulata var canaense v.s Dang 1.2 Phân bố đặc điểm 1.2.1 Phân bố 1.2.2 Đặc điểm .2 1.3 Các nghiên cứu nước 1.4 Các nghiên cứu nước 1.4.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học 1.4.1.1 Markhamia acuminata 1.4.1.2 Markhamia lutea 1.4.1.3 Markhamia obtusifolia 1.4.1.4 Markhamia platycalyx 1.4.1.5 Markhamia stipulata 1.4.1.6 Markhamia zanzibarica 1.4.2 Các nghiên cứu dược lý 16 1.5.1 Khái niệm ung thư 17 1.5.2 Ung thư cổ tử cung 17 1.5.2.1 Nguyên nhân gây bệnh ung thư cô tử cung 17 1.5.2.2 Các giai đoạn phát triển bệnh 18 CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 20 2.1 Noi thực 20 iii 2.1.1 Thiết bị dụng cụ 20 2.1.2 Hóa chất 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phương pháp thu thập mầu 21 2.3.2 Điều chế loại cao 21 2.3.3 Phương pháp phân lập hợp chất 23 2.3.4 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 24 2.3.5 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết điều chế cao phân lập chất 26 3.2 Xác định cấu trúc MSH07 29 3.3 Xác định cấu trúc MSH08 32 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 PHỤ LỤC 39 IV TÓM TẢT Đe tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư cổ tử cung HeLa cao /7-hexane từ Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulata var canaense v.s Dang)” Thời gian 30/01/2018 kết thúc vào 30/06/2018, địa điểm nghiên cứu Phòng Các chất có hoạt tính sinh học, Viện Cơng nghệ Hóa học, số 01, Mạc Đĩnh Chi, Q 1,TP HCM Đe tài có ba nội dung: điều chế cao chiết, nghiên cứu hoạt tính sinh học nghiên cứu thành phần hóa học Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Điều chế cao chiết ethanol toàn phần cao chiết có độ phân cực khác nhau: cao /7-hexane, cao ethyl acetate dịch nước Điều chế cao /7-hexane thành phân đoạn có độ phân cực khác Thử hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư co tử cung HeLa phân đoạn cao /7-hexane Tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học cùa phân đoạn có hoạt tính tốt Phân lập xác định cấu trúc họp chất tinh khiết, cấu trúc họp chất là: MSH07 Apigenin 7-ơ-/?-D-glucopyranoside MSH08 Luteolin 7-ơ-/?-D-glucopryranoside phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) V SUMMARY The theme: “Study on chemical components and cytotoxic activity against HeLa cancer cell line of the //-hexane extract from Markhamia stipulata var canaense v.s Dang leaves” The time began 30/01/2018 to 30/06/2018, reseach location at Bioactive Compounds Laboratory, Institute of Chemical Technolagy - 01 Mac Dinh chi street, district 1, Ho Chi Minh city The theme has contents: prepare extraction, reseach on chemical component and reseach on bioactivity The results obtained after month to study: Preparae the crude ethanol extract and other different polarities: /7-hexane extract, ethyl acetate extract and water solution Preparae the H-hexane extract devided into fractions have different polarities Test for cytotoxic activity against the HeLa cancer cell line on fractions of the /7-hexane extract Study on chemical components of the most activity fraction Isolate Apigenin pure compounds Their 7-ơ-/?-D-glucopyranoside structures (MSH07) of and were identified: Luteolin glucopryranoside (MSH08) by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) VI 7-Ơ-//-D- DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kg: kilogram g: gram H: Hexane EA: Ethyl acetate C: Chloroform M: Methanol NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance spectrocopy) 'H-NMR: Pho cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance) 13C-NMR: Carbon Nuclear Magnetic Resonance HSQC: Tương quan 'H—*13c qua noi (Heteronuclear Single Quantum Correlation) HMBC: Tương quan ‘H—»13c qua nối noi (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) SKC: Sac ký cột SKLM: Sac ký lớp mỏng COSY: Correlation Spectroscopy EA: Ethyl acetate DEPT: Pho DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer) Ppm: Phan triệu (part per million) J: Hang so ghép spin (Coupling constant) S: Mũi đơn (Singlet) vii d: Mũi đôi (Doublet) dd: Mũi đơi đơi (Doublet of doublet) Hz: Hertz Ơ: Độ chuyển dịch hóa học (Chemical shift) m: Mũi đa (Multiplet) HPV: Human papilloma virus ml: Mililit (Milliliter) Vlll DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Ánh Markhamia stipulata var canaense v.s Dang Hình 1.2 Co tử cung bình thường ung thư Hình 3.1 Các tương tác HMBC cấu trúc MSH07 Hình 3.2 Các tương tác HMBC cấu trúc MSH08 Sơ đồ 2.1 Quy trình tách chiết cao từ Thiết đinh Cà Ná Sơ đồ 2.2 Quy trình phân phân đoạn từ cao /7-hexane Sơ đồ 3.1 Kết điều chế cao Sơ đồ 3.2 Kết phân lập chất từ cao /7-hexane ix ... nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư cổ tử cung HeLa cao n-hexane từ Thiết đinh Cà Ná (Markhamia stipulata var canaense v.s Dang)” nhằm nâng cao. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẮT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG LUẬN VÀN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TRÊN DỊNG TÉ BÀO ƯNG THU CÓ TỦ CUNG HELA. .. LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 PHỤ LỤC 39 IV TÓM TẢT Đe tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư cổ tử cung HeLa