ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CỒNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SO SÁNH TƯƠNG ĐỊNG TRÌNH Tự GEN VP2 CỦA CHỦNG THUỘC ĐỊA PARVOVIRUS Lưu HÀNH TẠI TPHCM VỚI CHỦNG VACCINE THƯƠNG MẠI VANGUARD ®PLUS Sinh viên thực : Nguyễn Thị Ngọc Ánh Mã số sinh viên : 1711543973 GVHD : TS Thân Văn Thái TP HCM, 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG BIẾU viii DANH MỤC CHŨ VIẾT TẤT ix ĐẶT VẤN ĐỀ X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái niệm lịch sừ Parvovirus 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Cấu trúc 1.1.3 Các đường lây nhiễm 1.1.4 Triệu chứng 1.1.5 Cách phòng điều trị 1.1.6 Phạm vi ảnh hưởng 1.1.7 Dịch tề học 1.2 Các phương pháp chuẩn đoán bệnh 1.2.1 Chuẩn đoán theo triệu chứng lâm sàng 1.2.2 Phương pháp PCR 1.2.3 Phương pháp ELISA 1.3 Các phương pháp tách chiết DNA virus 1.4 Giải trình tự gen 1.5 Xây dựng phát sinh loài .10 ii 1.6 Các nghiên cứu nước 10 1.6.1 Nghiên cứu nước 10 1.6.2 Nghiên cứu giới 11 CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 13 2.1 Địa điếm thực 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 13 2.3 Vật liệu nghiên cứu 13 2.3.1 Thiết bị, dụng cụ 12 2.3.2 Hóa chất thuốc thử 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Thu nhận mẫu 14 2.4.2 Tách chiết DNA 15 2.4.3 Phương pháp PCR .16 2.4.4 Kiểm tra sản phấm PCR 17 2.4.5 Giải trình tự gen 18 2.4.6 Phân tích trình tự gen 18 2.4.7 Xây dựng phát sinh loài 18 2.5 So sánh chủng Parvovirus thuộc địa chủng Parvovirus vaccine thương mại VANGUARD ®PLUS 18 CHƯƠNG KẾT QƯẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Ket thu mẫu 19 3.2 Tách chiết DNA 19 3.3 Kết PCR 19 3.4 Kết khuếch đại gen VP2 20 3.5 Kết giải trình tự gen VP2 21 3.6 Xây dựng phát sinh 23 iii 3.7 So sánh tương đồng trình tự nucleotide axit amin 25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 PHỤ LỤC 29 IV TĨM TẤT Bệnh tiêu chảy chó Canine parvovirus bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm gây chết chó Ket giải trình tự phân tích trình tự gen VP2 Parvovirus type nghiên cứu cho thấy mức độ tương đồng cao nucleotide (nu) axit amin (aa) so sánh với chùng CPV có vaccine thương mại VANGUARD ®PLUS Đe tài: “Nghiên cứu so sánh tương đồng trình tự gen VP2 chủng thuộc địa Parvovirus lưu hành TP HCM với chủng vaccine thương mại VANGUARD "PLUS 5“ thực từ tháng 06 - 9/2020 Phịng thí nghiệm Vi sinh vật, Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành Đe tài có nội dung chủ yếu sau: Thu nhận mẫu phân tiêu chảy chó nghi nhiễm CPVs, tách chiết DNA, thực phản ứng PCR, phân tích trình tự phân tích đặc điểm di truyền phân tử đoạn gen VP2 CPVs Những kết đạt sau tháng nghiên cứu: Thu nhận 47 mẫu phân tiêu chảy chó TP.HCM Thử nghiệm phản ứng PCR cho kết 45/47 (95,74 %) số mẫu dương tính với CPV Giải trình tự gen VP2 cùa chủng CPVs Phân tích trình tự nucleotide phát sinh loài gen VP2 so sánh mức độ tương đồng với chùng CPVs có sằn vaccine V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu trúc 3D CPV Hình 1.2 Bộ gen hoàn chỉnh cùa Canine parvovirus Hình 1.3 Phân chó nhiễm bệnh Hình 1.4 Cơ the bị nước Hình 1.5 Dương tính với ELISA Hình 3.1 Mầu phân sử dụng cho nghiên cứu 19 Hình 3.2 Sản phẩm PCR chẩn đốn CPV (M) thang chuẩnDNA 20 Hình 3.3 Sản phẩm PCR gen VP2 (M)thang chuẩn DNA.Bên trái (A) mầu thuộc địa Bên phải (B) mẫu vaccine 20 Hình 3.4 Ket trình tự xấu .22 Hình 3.5 Kết trình tự tốt .22 Hình 3.6 Cây phả hệ phân tích mối tương quan gen VP2 chủng CPV nghiên cứu với chủng CPV tham chiếu 24 vii DANH MỤC BẢNG BIẺƯ Bảng 2.1 Bảng mồi sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 16 Bảng 2.3 Nhiệt độ thời gian cho cặp mồi phát 17 Bảng 2.4 Nhiệt độ thời gian cho cặp mồi đoạn gen VP2 17 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR 17 Bảng 2.6 Nhiệt độ thời gian cho cặp mồi phát 17 Bảng 2.7 Nhiệt độ thời gian cho cặp mồi đoạn gen VP2 17 Bảng 3.1 Ket chuẩn đoán PCR 20 Bảng 3.2 So sánh mức độ tương đồng trình tự nu (%) gen VP2 giừa chủng CPV nghiên cứu chủng tham chiếu 25 Bảng 3.3 So sánh mức độ tương đong trình tự aa (%) gen VP2 chủng CPV nghiên cứu chùng tham chiếu 26 viii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẤT CPV: Tác nhân gây bệnh tiêu chảy cấp tính chó (Canine parvovirus') PCR: Phản ứng chuồi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction) nu: Nucleotide aa: Axit amin VP: Protein vỏ virus NCBI: National Center for Biotechnology Information ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay DNA: Deoxyribonucleic axit FBV: Virus gây giảm bạch cầu mèo (Feline Panleukopenia virus) IX ĐẶT VÁN ĐÈ Việt Nam nay, nhu cầu nuôi thú cưng người ngày tăng cao Vì vậy, sức khỏe cùa vật nuôi ngày quan tâm trọng, theo đó, phịng khám thú y mở ngày nhiều phân bố rộng rãi Trong lồi vật ni nhà lồi chó coi loài động vật trung thành, dễ gần dề hóa, ngồi chó cịn giúp ích nhiều sống ngày Vì vậy, mà giống chó ngày nuôi nhiều, phổ biến hơn, đa dạng chủng loại, hình dáng kích thước Ngày nay, ô nhiễm môi trường xung quanh đời sống người làm ảnh hưởng tới sức khỏe vật nuôi, Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng ẩm điều kiện thuận lợi cho bệnh virus phát triển Trong đó, Canine parvovirus virus gây bệnh viêm ruột viêm tim chó Đây bệnh truyền nhiễm cấp tính, nguy hiểm có tỷ lệ gây tử vong cao không phát điều trị kịp thời, chó chó chưa tiêm vaccine phịng bệnh Ngồi ra, mầm bệnh cịn có khả phát tán nhanh tồn ngồi mơi trường tự nhiên suốt thời gian dài nên nguy lây nhiễm cao Canine parvovirus lồi có tốc độ tiến hóa phát triển nhanh chóng, có nhiều biến dị di truyền kháng nguyên nghiên cứu công bố tồn giới Hiện nay, bệnh có vaccine tiêm phịng chưa có thuốc đặc trị, vaccine CPV sừ dụng có hạn chế cụ thể, nên việc theo dõi cập nhật tình hình dịch bệnh tìm hiểu, làm rõ đặc điểm di truyền chủng lưu hành Việt Nam cùa Canine parvovirus so sánh chủng CPV với vaccine thương mại việc làm quan trọng có tính cấp thiết, theo đề xuất chế tạo nên vaccine đặc hiệu với chủng thuộc địa Từ lý trên, đề xuất thực đề tài: “Nghiên cứu so sánh tương đồng trình tự gen VP2 chủng thuộc địa Parvovirus lun hành TP HCM với chủng vaccine thương mại VANGUARD ®PLUS 5” X Mục tiêu đề tài: - Chẩn đoán tỷ lệ nhiễm CPV PCR mẫu bệnh phẩm thu thập Tp Hồ Chí Minh - Xác định đặc điểm di truyền phân tử gen VP2 số chủng CPV lưu hành chó Hồ Chí Minh so sánh độ mức độ tương đồng chủng có vaccine XI Chương Kết thảo luận Dựa vào kết Bảng 3.1, cho thấy phương pháp ELISA PCR cho kết dương tính với CPV Tuy nhiên, Kit test nhanh ELISA lại cho kết dương tính 47/47, cịn phương pháp PCR lại cho kết qua 45/47, xuất sai khác cho thấy phương pháp ELISA có khả cho kết dương tính giả xuất lây nhiễm chéo giừa mầu bệnh phẩm, phương pháp test nhanh mang ý nghĩa sàng lọc, phát đối tượng có khả nhiễm khơng đảm bảo xác Cịn phương pháp PCR đưa kết tương đối xác nhiều thời gian để đưa kết cuối 3.4 Ket khuếch đại gen VP2 Sau chẩn đoán mẫu dương tính với CPV, chọn lựa mẫu CPV mầu vacccine thương mại VANGUARD ©PLUS thực phản ứng PCR nhằm khuếch đại đoan gen VP2 với cặp mồi mô tả bảng két điện di sản phẩm PCR soi gel agarose 1,2 % A MI B M vaccine Hình 3.3 Sản phẩm PCR gen VP2 (M) thang chuẩn DNA Bên trái (A) mầu thuộc địa Bên phải (B) mầu vaccine Ket Hình 3.3 cho thấy mẫu lựa chọn chủng vaccine thương mại lên với kích thước dự đoán Các band điện di cho kết rõ, sáng, khơng xuất hiện tượng smear, thích hợp cho việc giải trình tự sản phẩm PCR giải trình tự phương pháp Sanger Sequencing công ty 1st Base, Malaysia 21 Chương Kết thảo luận 3.5 Ket giải trình tự gen VP2 Sau có kết giải trình tự từ cơng ty 1st Base dạng file, file abi hiến thị peak tín hiệu file FASTA lưu trừ trình tự thô — BicEdit Sequence Alignment Editor File Edit Zoom view Horizontal Scale Accesory Application RNA Window □ X Help a ABI Chromatogram: C:\Usefs\hnc\Deslrtop\CPV\Hau\TrinhTugenome\1st_BASE_3947343_21-1_NSFext.ab1 Selected none CJ~|[ E Sample 3947343_21-l_NSF«xt File c u*enhnc Desktop cpvHau TrinhTuạenorae l»t_BASE_394-343_21-l_NSFext abl 920 930 940 950 960 970 980 990 AAAAGAGTAACATCACC TGAAG ACT GG AT G AT G TT AC A CCAGATA G HAT ATT G AAA TG AT GGCCA cc cc GG AGGTG AA Hình 3.4 Ket trình tự xấu BioEdit Sequence Alignment Editor File Edit view Zoom Horizontal Scale — Accesory Application RNA Window □ X Help a ABI Chromatogram: C:\Users\hnc\Desktop\CPV\Hau\TrinhTugenome\1st_BASE_3947352_24-1_Parvo-R1.ab1 J1 Selected none I II E) I|wE3b| Sample: 3947352_24-l_Parvo-Rl Ede: c Uieri hnc Desktop CPVHau irinhTujenome Iit_BASE_394”352_24-I_Parvo-Ri abl 350 360 370 380 390 400 410 420 GTTT GCTTAT GT CT GTAT GTTAATATAGTcAC CCATT CACTATC TT CT GCAAT TTCTCT GAGCTTAATCTT TTCAGT Hình 3.5 Ket trình tự tốt Phần mềm Bioedit sử dụng để xem peak tín hiệu trình tự nu Các trình tự có peak tín hiệu chồng lắp lên chứng tỏ trình tự khơng đù độ tin cậy để phân tích liệu (Hình 3.4) Những trình tự có peak tín hiệu trải đều, khơng chồng lắp trình tự có độ tin cậy tốt, trình tự loại bỏ nucleotide mơ ho (nucleotide N) sử dụng phân tích tiêp theo (Hình 3.5) Việc sử dụng trình tự có độ tin cậy cao giúp cho việc phân tích trình tự dê dàng tránh bị sai lệch kết Phần mềm EditSeq sử dụng để hiệu chỉnh trình tự liệu thơ Trình tự hai chiều (chiều xi chiều ngược) gióng cột với nhằm kiếm tra sai khác hai trình tự Những nu sai khác xác định lại dựa peak tín hiệu cùa 22 Chương Kết thảo luận tập tin abi Hai trình tự gộp thành trình tự để tiến hành phân tích phát sinh loài 3.6 Xây dựng phát sinh Phân tích phát sinh lồi gene VP2 cho thấy chủng CPV nghiên cứu (HCM-1 đến -5)cùng nằm nhánh nhỏ với chủng CPV-2c Việt Nam năm 2017 gần với chúng CPV phân lập số nước Cây phả hệ gen VP2 cho thấy chủng CPV có xu hướng nằm gần xếp thành cụm theo địa lý tiếp đến theo genotype Các chủng CPV gen VP2 quốc gia Châu Á Việt Nam, Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Hàn Quốc nằm hai nhánh gần với chùng phân lập so với chủng tìm thấy số nước thuộc Châu Âu, Châu Mỹ Dựa kết phân tích phát sinh loài, nguyên nhân khiến lượng lớn CPV- 2c phát Việt Nam xâm nhập chủng ngoại lai từ năm 2015 đến năm 2018 Phân tích phát sinh lồi cho thấy chủng CPV-2c Việt Nam gần có chung nguồn gốc tiến hóa với chủng CPV-2c phân lập số nước Châu Á Ket tương đồng với nghiên cứu gần cho thấy xu hướng lưu hành chủng CPV-2c thay dần chủng CPV-2a -2b Trên phát sinh lồi, chủng vaccine thương mại VANGUARD ®PLUS 5, chủng vaccine có mã so FJ197847 Hàn Quốc chủng FPV hợp lại nhóm out group Có the thấy, khoảng cách chủng vaccine thuộc nhóm out group xa với chủng CPV hành Việt Nam lẫn chùng CPV-2c Châu Á Mặc dù CPV thuộc loại virus DNA, tốc độ thay gen khoảng 10 “4 vị trí mồi năm (tương tự virus RNA) nên việc đột biến diễn thường xuyên Có thể thấy, chủng CPV Việt Nam tách han thành nhánh riêng cách xa so với chủng vaccine tham chiếu, điều chứng minh chúng CPV có khuynh hướng đột biến dần theo năm tháng với tốc độ nhanh chóng Với phân tích kết trên, cho thấy lo ngại hiệu hoàn toàn vaccine VANGUARD ®PLUS chống lại biến kháng nguyên CPV lưu hành Việt Nam hay không có sở 23 nghiên cứu với chùng CPV tham chiếu Hình 3.6 Cây phả hệ phân tích môi tương quan gen VP2 chùng CPV Chương Kết thảo luận 3.7 So sánh tương đồng trình tự nucleotide axit amin gen VP2 Mức độ tương đồng trình tự nucleotide amino acid cùa gen VP2 cùa chủng CPV nghiên cứu so sánh với chủng CPV tham chiếu từ ngân hàng Genbank-NCBI (Bảng 3.2 Bảng 3.3).Các chủng CPV so sánh chia sẻ mức độ tương đồng cao, từ 98,4 - 100 % cho nucleotide 97,4 - 100 % cho amino acid Ket cho thấy gen VP2 nhóm CPV - lưu hành có mức độ biến đổi khoảng 1,6 % tong trình tự nucleotide hay 2,6 % tổng trình tự amino acid Các trinh tự thu nhận so với vaccine VANGUARD ®PLƯS (VPCPV/USA) có tống phần trăm tỷ lệ khác nu 1,6 % aa 2,6 % Dựa vào phát sinh loài bảng so sánh mức độ tương đồng thấy khác biệt rõ rệt chủng vaccine chùng CPV nghiên cứu, chùng vaccine VPCPV/USA mô tả hồ trợ ngăn ngừa bệnh parvovirus (CPV) CPV-2c Điều dần đến hình thành biến chủng có tính kháng nguyên biến đoi tác động tới hiệu loại vaccine sử dụng thị trường CPV với tính kháng ngun khơng ngừng trơi dạt biến đối cấu trúc kháng nguyên cách nhanh chóng liên quan đến việc khỏi đáp ứng miễn dịch vật chủ chủng ngừa Có the giải thích điều áp lực đột biến chọn lọc tự nhiên Với phân tích kết phân tích kết dựa vào phát sinh loài, cho thấy lo ngại hiệu hoàn toàn vaccine thương mại VPCPV/ƯSA chống lại biến the kháng nguyên Việt Nam hay khơng có sở Bảng 3.2 So sánh mức độ tương đồng trình tự nu (%) gen VP2 chùng CPV nghiêu cứu chủng tham chiếu VPCPV/USA DQ025994 KJ813884 MH660525 KX421789 KX421786 VPCPV/USA 100 99,2 99,2 98,8 98,4 98,4 HCM-1 98,4 98,9 98,9 99,6 99,4 99,3 HCM-2 98,4 98,9 98,9 99,6 99,4 99,3 HCM-3 98,4 98,9 98,8 99,6 99,3 99,3 HCM-4 98,4 98,9 98,9 99,6 99,4 99,3 HCM-5 98,5 99,0 98,9 99,7 99,4 99,4 25 Chương Kết thảo luận Bảng 3.3 So sánh mức độ tương đồng trình tự aa (%) gen VP2 chủng CPV nghiên cứu chủng tham chiếu VPCPV/USA DQ025994 KJ813884 MH660525 KX42178S KX421786 VPCPV/USA 100 98,4 98,2 97,9 97,4 97,4 HCM-1 97,6 99,1 98,9 99,6 99,4 99,4 HCM-2 97,6 99,1 98,9 99,6 99,4 99,4 HCM-3 97,6 99,1 98,9 99,6 99,4 99,4 HCM-4 97,6 99,1 98,9 99,6 99,4 99,4 HCM-5 97,6 99,1 98,9 99,6 99,4 99,4 Chó nhiễm CPV khơng có thuốc đặc hiệu đê điều trị mà sử dụng biện pháp truyền dịch, bổ sung chất điện giải nhằm tăng cường sức đề kháng, kết hợp sử dụng kháng sinh để tránh bội nhiễm vi khuẩn Do đó, sử dụng vaccine coi phương pháp hiệu phòng trị bệnh CPV gây Hiện thị trường có nhiều loại CPV vaccine nhập vào nước ta Tuy nhiên chưa có nghiên cứu cho thấy hiệu sử dụng loại vaccine phịng trị bệnh CPV gầy Do đó, cần tiếp tục nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học phân tử chủng CPV nhằm đánh giá khả bảo hộ cùa CPV vaccine lựa chọn chủng virus phù họp cho công tác sản xuất CPV vaccine đặc hiệu nước ta 26 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ Ket luận Sau tháng thức khóa luận, chúng tơi thu nhận kết sau: - Thu nhận 47 mầu phân tiêu chảy nghi nhiễm CPV chó Phịng khám Thú y Thành phố Hồ Chí Minh - Ket chấn đoán phương pháp test nhanh ELISA PCR cho kết 47/47 (100 %) 45/47 (95,74 %) mầu dương tính với CPV - Ket giải trình tự 05 chủng CPV cho thấy chủng nghiên cứu thuộc nhóm CPV-2c gần gũi với chủng CPV phân lập Trung Quốc - Phân tích trình tự genome CPV phần mềm tin - sinh học Vè phát sinh, phân tích mức độ tương đồng xác định khác biệt nucleotide dần đến thay đổi amino acid gen VP2 Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu ve đặc điểm dịch tễ học di truyền học chủng CPV lưu hành nước ta Từ hồ trợ đánh giá hiệu CPV vaccine sử dụng thị trường hồ trợ lựa chọn chủng CPV phù hợp cho sản xuất CPV vaccine nước ta 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO Carmichael L An annotated historical account of Canine parvovirus Journal of Veterinary Medicine, Series B 2005;52(7-8):303-311 Larson D, Laurie J An Historical Timeline of Canine parvovirus 2019; Internet: https://www.maddiesfund.org/an-historical-timeline-of-canine-parvovirus.htm , truy cập ngày 16 tháng năm 2019 Miranda c, Thompson G Canine parvovirus: the worldwide occurrence of antigenic variants Journal of General Virology 2016;97(9):2043-2057 Nandi s, Kumar M Canine parvovirus: current perspective Indian Journal of virology 2010;21(l):31-44 Mai NTY, Bích TN, Khánh NP, Phuthavong K, Thanh TV Tình hình bênh viêm ruột parvovirus chó phịng mạch thú y tình Tiền Giang, Đồng Tháp thành phơ Cân Thơ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cản Thơ 2018:136142 Nakamura M, Tohya Y, Miyazawa T, et al A novel antigenic variant of Canine parvovirus from a Vietnamese dog Archives of virology 2004; 149(11):22612269 Tran Ngọc Bích, Thảo Tran Thị, Nguyền Thị Yen Mai, Nguyễn Việt Quốc Khảo sát tỷ lệ bệnh Parvovirus chó từ đên tháng tuôi Thành phô Cân Thơ Tạp Khoa học Trường Đại học cần Thơ 2013:15-20 Yu Y, Zhang J, Wang J, et al Naturally-occurring right terminal hairpin mutations in three genotypes of Canine parvovirus (CPV-2a, CPV-2b and CPV2c) have no effect on their growth characteristics Virus research 2019;261:3136 Ikeda Y, Mochizuki M, Naito R, et al Predominance of Canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CP Vs in cats Virology 2000;278( 1): 13-19 10 Decaro N, Desario c, Parisi A, et al Genetic analysis of Canine parvovirus type 2c Virology 2009;385( ):5-10 11 Xinyu T, Min cs, Yifan w, et al Canine parvovirus-2c (CPV-2c) Infection in Wild Asian Palm Civets (Paradoxurus hennaphroditus) in Singapore Journal of wildlife diseases 2019;55(4):965-969 28 PHỤ LỤC Phụ lục Trình tự nu chủng CPV so trình tự nu chùng CPV tham chiếu >VanguardPlusCPV/USA ATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCTG GAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTGCTTTCAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGAA AACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGTG GTTGTAAATAATATGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATATTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGTC ATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCATT TAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATA ATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAG ACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATC TCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTATACTATTGAAAATT CTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAACA CATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAATCTGAAGGAGCTACTAACTTTGG TGATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAATACAAACTATATTACTGAAGCTACTATTATG AGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAGC AGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCAGATGGTGAACCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTCA AAAAACTACCCAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAGAT TGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACGAATGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAGG AATTAACTATACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAAAT TTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGTC AATTATTTGTAAAAGTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTTAC TCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTAĨTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >CPV-2c/Dog/HCM-1 /VN/2020 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCGTCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTACTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAACAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GTTATATAGGAGTCCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAACACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTAT GAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAG CAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTC AAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAG ATTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACA GGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAA ATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGG TCAATTATTTGTAAAAGTTGCACCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTT ACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >CPV-2c/Dog/HCM-2/VN/2020 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCĨTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCGTCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTACTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAACAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GTTATATAGGAGTCCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAACACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTAT GAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAG CAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTC AAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAG ATTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACA GGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAA ATĨTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGG 29 TCAATTATTTGTAAAAGTTGCACCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTT ACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >CPV-2c/Dog/HCM-3/VN/2020 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCGTCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTACTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAACAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GTTATATAGGAGTCCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAACACAAACATTATCACTGAAGCTACTATTAT GAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAG CAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTC AAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAG ATTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACA GGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAA ATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGG TCAATTATTTGTAAAAGTTGCACCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTT ACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >CPV-2c/Dog/HCM-4/VN/2020 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCGTCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGA^AACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTACTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAACAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GTTATATAGGAGTCCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAACACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTAT GAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAG CAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTC AAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAG ATTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACA GGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAA ATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGG TCAATTATTTGTAAAAGTTGCACCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTT ACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >CPV-2c/'Dog/HCM-5/VN/2020 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTGCATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTACTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTTTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GGTTATATAGGAGTCCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAACACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTA TGAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCA GCAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCGAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGT CAAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGA GATTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAAC AGGAATTAACTATACTAATATGTTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCA AATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTG GTCAATTATTTGTAAAAGTTGCACCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACT TACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA 30 >AB054217/CPV-2a/Dog/V 154/Japan 2001 ATGAGTGATGGAGGAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCT GGAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGA AAACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGT GGTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGT CATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCAT TTAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTAT AATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGCAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGA GACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCAT CTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTATACTATTGAAAAT TCTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAAC ACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTG GTTATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAATACAAACTATATTACTGAAGCTACTATTAT GAGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAG CAGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTC AAAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAG ATTGGATTCAGAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAAATGATAATGTATTGCTACCGACAGATCCAATTGGAGGTAAAACA GGAATTAACTATACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAA ATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGG TCAATTATTTGTAAAAGTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTT ACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >MK332005/CPV-2a/Dog/nn 171025/China/2017 ATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGACGGTGGTCAGCCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCTG GAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTCAATAATCAGACGGAATTTAAATTTTTGGAA AACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGTG GTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACCCATGCACAAATTGTAACACCTTGGTC ATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCATT TAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATA ATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAG ACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATC TCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTACACTATTGAAAATT CTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTATTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAACA CACACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTGG TTATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAATACAAACATTATTACTGAAGCTACTATTATG AGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAGC AGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTCA AAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAOA TTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAAATGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAGCAG GAATTAACTATACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAAA TTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGT CAATTATTTGTAAAAGTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTTA CTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >Vaccine/Dog'CPV-2b/SAH/ltaly/2008 ATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCTG GAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTCAATAATCAGACGGAATTT.AAATTTTTGGAA AACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGTG GTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGTC ATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCATT TAGTTAGTTTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATA ATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAG ACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATC TCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTATACTATTGAAAATT CTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAACA CATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTGG TTATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAAAACAAACTATATTACTGAAGCTACTATTATG AGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAGC AGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTCA AAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAGA TTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGATGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAG GAATTAACTATACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAAA TTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGT CAATTATTTGTAAAAGTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTTA CTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA >AB 120723/CPV-2b/Dog,HCM-23/VN/2004 ATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGACGGTGGTCAACCTGCTGTCAGAAATGAAAGAGCTACAGGATCTGGGAACGGGTCTG GAGGCGGGGGTGGTGGTGGTTCTGGGGGTGTGGGGATTTCTACGGGTACTTTTAATAATCAGACAGAATTTAAATTTTTGGAA 31 AACGGATGGGTGGAAATCACAGCAAACTCAAGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAAATTATAGAAGAGTG GTTGTAAATAATTTGGATAAAACTGCAGTTAACGGAAACATGGCTTTAGATGATACTCATGCACAAATTGTAACACCTTGGTC ATTGGTTGATGCAAATGCTTGGGGAGTTTGGTTTAATCCAGGAGATTGGCAACTAATTGTTAATACTATGAGTGAGTTGCATT TAGTTAGTĨTTGAACAAGAAATTTTTAATGTTGTTTTAAAGACTGTTTCAGAATCTGCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATA ATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATGCCATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAG ACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATC TCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATATATACCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTTTATACTATTGAAAATT CTGTGCCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATGTAGACTAACA CATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCATTTCTAAATTCTTTGCCTCAAGCTGAAGGAGGTACTAACTTTGG TTATATAGGAGTTCAACAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTCAAATGGGAAATACAAACTATATTACTGAAGCTACTATTATG AGACCAGCTGAGGTTGGTTATAGTGCACCATATTATTCTTTTGAGGCGTCTACACAAGGGCCATTTAAAACACCTATTGCAGC AGGACGGGGGGGAGCGCAAACAGATGAAAATCAAGCAGCAGATGGTGATCCAAGATATGCATTTGGTAGACAACATGGTCA AAAAACTACCACAACAGGAGAAACACCTGAGAGATTTACATATATAGCACATCAAGATACAGGAAGATATCCAGAAGGAGA TTGGATTCAAAATATTAACTTTAACCTTCCTGTAACAGATGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAG GAATTAACTATACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTTTATCCAAATGGTCAAA TTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTTCATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGT CAATTATTTGTAAAAGTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGAATTGTAACTTA CTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTAAGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAA 32 Phụ lục Bảng thống kê tỷ lệ mẫu dương tính với phương pháp PCR STT 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 Ngày nhận mẫu Ngày xử lý mẫu Ngày PCR 10/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 17/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 4/7/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 20/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 22/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 23/6/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 5/7/2020 33 PCR mẫu 555 F-R + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Phụ lục Bảng thông so sánh mức độ tương đông nucleotide chủng tham chiêu chủng truy vân Va^uardiCPV-ỈQĨkữV-ỉdlX^-ỉr/ữí^ỉt/thữV-ỈQ^ MG5773C MK3S772S MÍ35772Ễ KX42Ư8SI V»xine/F KX4U785* KY93765O MH66052Ỉ K®37655 r.VSẾŨSr 8^ gl 8j SISj S8 SR 81 8^ SSj SR SSj gggggggggggggggg s — IĨ Ĩ: ĩ! ĩ! Ĩ ?: ĩ ĩ ĩ Ĩ -!' ĩ ĩ ĩ Ĩ S-S i£ ếR SR _ S$ ẩlẩỉ gj SR gj gj g> Sg eg gj gj gj gS Sg SR 8> » ễ?i cR SR e?» eR cR eR SR ễ^Ị S^ 8» Sr» Srl SR si íliỉỉiílỉiiã gS^r^rcr^r^rda^rcrcr Srl SR SR 1R SR SR SR SR ẫ s — „ „ „ „ e I § £ g g g g g g g g Srl SR B ?- s B 3- 3- B B 3 s g g g g g g g s g g ẵ ÌẩBSỄSSãSB Ỉ8BBS5Í88B8B s _ e _ g g § § §§ § g§ gg a ggg gg gĐ Đgg g£» d 4991 gS g! gi gl CÕ ' 0567 gs gỉ g> CÕ d 4974 gi g> gS CÕ ' cõ o.% g^> gS 4998 Q 95B IO = 0,9% 0,9% » 4976 § SR gj 0,969 gj gj gj gj g^ gj gj g^ gj g g» ^R 0,926 gj gg JR J^J 4965 §-* ^ị gj SR $ § § § SR SR » ễK e i_2 22„_2 SR SR 8? SR SR SR SR SR SR sặ? s?? SR s?; s?i s?i s£i s?i SR s—i s?i' cR JR gj 4972 ẵ cR rR » » JR JR o.% o> 3~i CJ> » g> JR JR '2 co- 2- 2- 0,976 cr» $R » «R r '2 2* co- 2* co- 2" co- 4969 ẩ 8^ C^Ị 8» w > rTj 0,926 S SR cR iR rri 4969 "-^ §> ậỉ ìặỉ SR SR £r gỉ g ậỊ p CP 8, 0,991 § d d 4989 » ễR sặị » » sf; d d d 0588 & §3 d 0,588 §> sg §: SR sp p 4981 d d d SR SR p 0,582 d d d SR SR p 49% dd SR 0986 d d s \4P d d d dd d SR 0,5% í 3- SR 4986 3- 3- 3- 3 co- cS 0#ị SR SR s£i ^R; 4981 eo- ôc 3' 3- 3- 3- o' Đã