Khéo tay hay làm Khéo tay hay làm Khéo tay hay làmkl mac hong phuoc

i LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân thành cảm ơn đến quý Thầy, Cô trƣờng Đại học Tôn Đức Thắng, ngƣời trực tiếp giảng dạy, truyền đạt kiến thức bổ ích cho em, tảng bản, hành trang vô quý giá bƣớc cho em bƣớc vào nghiệp sau tƣơng lai Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS Trần Thị Dung, Cơ tin tƣởng giao đề tài tận tình quan tâm giúp đỡ em suốt ba tháng qua, giải đáp thắc mắc em trình thực đề tài Nhờ vậy, em hồn thành đƣợc đề tài Bên cạnh đó, em xin gởi lời cảm ơn chân thành tới quý Thầy, Cơ cơng tác phịng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học Cơng nghệ Hóa học hết lịng giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Chân thành cảm ơn bạn lớp 08SH1D, ngƣời bạn đồng hành với suốt năm tháng ngồi giảng đƣờng Đại học Cuối quan trọng nhất, với tất lịng thành kính, xin cảm ơn ba mẹ ln động viên, chăm sóc tạo điều kiện cho suốt năm tháng ngồi ghế nhà trƣờng Trong trình thực đề tài, tảng kiến thức em hạn hẹp nên báo cáo chắn không tránh khỏi sai sót Kính mong nhận đƣợc góp, nhận xét từ phía q Thầy, Cơ để kiến thức em ngày hoàn thiện rút đƣợc kinh nghiệm bổ ích áp dụng vào thực tiễn cách hiệu tƣơng lai Kính chúc ngƣời vui vẻ, hạnh phúc, dồi sức khỏe thành công công việc Em xin chân thành cảm ơn! SVTH Mạc Hồng Phƣớc ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix Chƣơng I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Nhiệm vụ đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài Chƣơng II: TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu Ổi 2.1.1 Vị trí phân loại thực vật 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Nguồn gốc số giống ổi giới 2.1.3.1 Nguồn gốc 2.1.3.2 Một số giống Ổi giới 2.1.4 Tình hình sản xuất chế biến Ổi giới 2.1.5 Một số giống Ổi Việt Nam 2.1.6 Điều kiện sinh thái Ổi Việt Nam 2.1.7 Tình hình sản xuất chế biến Ổi Việt Nam 2.2 Tổng quan hợp chất polyphenol 2.2.1 Nhóm hợp chất flavonoid 10 2.2.2 Nhóm hợp chất tanin 11 2.3 Thành phần hóa học Ổi 13 iii 2.4 Tác dụng dƣợc lý 16 2.5 Một số nghiên cứu trình tách chiết polyphenol từ thực vật 18 Chƣơng III: VẬT LIỆU PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 20 3.1 Vật liệu 20 3.1.1 Nguyên liệu thực vật 20 3.1.2 Hóa chất 20 3.1.3 Trang thiết bị thí nghiệm 21 3.2 Phƣơng pháp thí nghiệm 21 3.2.1 Thí nghiệm 1:Khát sát ảnh hƣởng ảnh hƣởng trình tiền xử lý đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 21 3.2.1.1 Bố trí thí nghiệm 21 3.2.1.2 Phƣơng pháp thực 22 3.2.1.3 Chỉ tiêu đánh giá 22 3.2.2 Thí nghiệm 2:Khát sát ảnh hƣởng ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 23 3.2.2.1 Bố trí thí nghiệm 23 3.2.2.2 Phƣơng pháp thực 23 3.2.2.3 Chỉ tiêu đánh giá 24 3.2.3 Thí nghiệm 3:Khát sát ảnh hƣởng ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 24 3.2.3.1 Bố trí thí nghiệm 24 3.2.3.2 Phƣơng pháp thực 24 3.2.3.3 Chỉ tiêu đánh giá 25 3.2.4 Xác định độ ẩm Ổi 25 3.2.5 Phƣơng pháp Foline – Ciocalteau xác định hàm lƣợng polyphenol tổng số 25 3.2.5.1 Nguyên tắc phƣơng pháp Foline – Ciocalteau 25 3.2.5.2 Phƣơng pháp thực 26 iv 3.2.6 Phƣơng pháp FRAP xác định hoạt tính chống oxy hóa 26 3.2.6.1 Nguyên tắc phƣơng pháp FRAP 26 3.2.6.2 Phƣơng pháp thực 26 Chƣơng IV: KẾT QUẢ BÀN LUẬN 28 4.1 Kết độ ẩm Ổi 28 4.2 Kết xây dựng đƣờng chuẩn acid gallic theo phƣơng pháp Foline – Ciocalteau 28 4.3 Kết xây dựng đƣờng chuẩn FeSO4theo phƣơng pháp FRAP 29 4.4Kết khảo sát ảnh hƣởng trình tiền xử lý đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 30 4.4.1 Bảng kết 30 4.4.2 Bàn luận kết khảo sát ảnh hƣởng trình tiền xử lý 31 4.5 Kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 32 4.5.1 Bảng kết 32 4.5.2 Bàn luận kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất 34 4.6 Kết khảo sát ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 35 4.6.1 Bảng kết 35 4.6.2 Bàn luận kết khảo sát ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành 37 4.7 Quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi 38 4.7.1 Sơ đồ quy trình 39 4.7.2 Thuyết minh quy trình 40 Chƣơng V: KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Đề nghị 42 Tài liệu tham khảo 44 v TĨM TẮT Mạc Hồng Phƣớc, lớp Cơng nghệ Sinh học 08SH1D, Đại học Tôn Đức Thắng tiến hành thực Đề tài: “Nghiên cứu trình tách chiết polyphenol từ Ổi” Mục tiêu đề tài khảo sát ảnh hƣởng số yếu tố đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa chiết xuất đƣợc từ Ổi Những yếu tố ảnh hƣởng đƣợc khảo sát trình tiền xử lý sấy khô, phƣơng pháp chiết xuất, phân cực dung môi độ trƣởng thành Ổi Các kết đạt đƣợc: - Trong phƣơng pháp tiền xử lý đƣợc khảo sát phƣơng pháp chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút (BI) sau sấy 500C 20 (500-20h) phƣơng pháp tiền xử lý thích hợp Ổi - Trong phƣơng pháp chiết xuất đƣợc tiến hành khảo sát phƣơng pháp siêu âm nhiệt độ môi trƣờng 10 phút phƣơng pháp chiết xuất hiệu Ổi - Trong dung loại dung môi sử dụng trình chiết xuất Ổi ethanol dung mơi thích hợp cho q trình chiết xuất giai đoạn trƣởng thành Ổi giai đoạn thích hợp để tiến hành chiết xuất giai đoạn Ổi non Các kết đạt đƣợc cho thấy q trình tiền xử lý sấy khơ, phƣơng pháp chiết xuất, phân cực dung môi độ trƣởng thành Ổi đóng vai trị quan trọng hợp chất có hoạt tính chống oxy hóa mà cụ thể hợp chất polyphenol Ổi vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT - BI (boiling and immersion): chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút - BE (boiling and exposure): chần nƣớc sôi 30 giây phơi nắng 300C 15 phút - NP (no pretreatment): không xử lý - 300-72h : sấy 300C 72 - 500-20h : sấy 500C 20 - NT : nghiệm thức - YL (young leaf): non - ML (middle leaf): trƣởng thành - OL (old leaf): già vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thành phần 100g Ổi giống Apple Guava 15 Bảng 4.1: Kết mật độ quang acid gallic nồng độ 10–100µg/mL đo =750 nm 28 Bảng 4.2: Kết mật độ quang FeSO4 nồng độ 100–1000µM đo =595 nm 29 Bảng 4.3: Kết khảo sát ảnh hƣởng trình tiền xử lý đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 30 Bảng 4.4: Kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 32 Bảng 4.5: Kết khảo sát ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 35 viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Cây Ổi (Psidium guajava L.) Hình 2.2 : Cơng thức hóa học anthocyanidin 10 Hình 2.3: Cơng thức hóa học acid ellagic 12 Hình 2.4: Cơng thức hóa học acid gallic 12 Hình 2.5: Cơng thức hóa học falvan-3-ol 13 Hình 2.6: Cơng thức hóa học flavan-3,4-diol 13 Hình 2.7: Cơng thức hóa học quercetin 15 Hình 3.1: Lá non (YL) 20 Hình 3.2: Lá trƣởng thành (ML) 20 Hình 3.3: Lá già (OL) 20 Hình 4.1: Các mẫu acid gallic sử dụng để xây dựng đƣờng chuẩn 29 Hình 4.2: Các mẫu FeSO4sử dụng để xây dựng đƣờng chuẩn 30 Hình 4.3: Sơ đồ quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi 39 ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ Đồ thị 4.1: Đƣờng chuẩn acid gallic 28 Đồ thị 4.2: Đƣờng chuẩn FeSO4 29 Biểu đồ 4.3: So sánh hàm lƣợng polyphenol tổng số từ trình tiền xử lý 31 Biểu đồ 4.4: So sánh hoạt tính chống oxy từ q trình tiền xử lý 31 Biểu đồ 4.5: So sánh hàm lƣợng polyphenol tổng số từ phƣơng pháp chiết xuất 33 Biểu đồ 4.6: So sánh hoạt tính chống oxy hóa từ phƣơng pháp chiết xuất 33 Biểu đồ 4.7: So sánh hàm lƣợng polyphenol nhóm chiết xuất loại dung môi 36 Biểu đồ 4.8: So sánh hoạt tính chống oxy hóa nhóm chiết xuất loại dung môi 36 Chƣơng I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nƣớc ta có diện tích khoảng 330.000 km2, nằm Đơng Nam châu Á, có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nhiệt độ trung bình năm cao (trên 220C), lƣợng mƣa năm lớn (trung bình 1200 – 2800 mm), độ ẩm tƣơng đối cao (trên 80%) Những điều kiện thuận lợi nhƣ tạo cho nƣớc ta hệ thực vật phong phú đa dạng Theo số liệu thống kê gần hệ thực vật Việt Nam có 10.000 lồi, khoảng 3.200 đƣợc sử dụng y học dân tộc Đây nguồn tài nguyên quý báu đất nƣớc ta Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học đóng vai trò quan trọng đời sống ngƣời Chúng đƣợc dùng để sản xuất dƣợc phẩm, thuốc bảo vệ thực vật, nguyên liệu cho công nghiệp thực phẩm, hƣơng liệu mỹ phẩm … Mặt khác, đất nƣớc ta nƣớc phát triển Do đó, nhà nƣớc có chủ trƣơng tăng cƣờng sản xuất dƣợc phẩm, thực phẩm, hƣơng liệu … nƣớc, hạn chế nhập khẩu, hạ giá thành sản phẩm để phục vụ nhân dân Nguồn nguyên liệu sản xuất sử dụng nguồn nguyên liệu từ thiên nhiên Vì vậy, vấn đề đƣợc đặc biệt quan tâm nghiên cứu hợp chất đƣợc tách từ sản phẩm thiên nhiên Cây Ổi loại quen thuộc đời sống ngƣời dân nƣớc ta, đặc biệt vùng nông thôn trồng để lấy ăn, chế biến làm nƣớc giải khát, làm mứt Ổi … Ngoài phận Ổi có búp non, non, vỏ rễ vỏ thân đƣợc dùng làm thuốc chữa bệnh Cho đến công dụng hợp chất polyphenol hoạt tính chống oxy hóa có ý nghĩa sức khỏe ngƣời loài thực vật đƣợc nhà khoa học nghiên cứu, đặc biệt ởtrà Tuy nhiên, Ổi chƣa có nhiều nghiên cứu chuyên sâu việc tách chiết hợp chất Vì vậy, tơiquyết định chọn đề tài: “Nghiên cứu trình tách chiết polyphenol từ Ổi” nhằm hiểu thêm trình chiết tách polyphenol để thu đƣợc chế phẩm polyphenol có hoạt tính sinh học tốt 31 200 GAE values (mg/g) 180 160 140 120 100 30-72 80 50-20 60 40 20 BI BE NP Biểu đồ 4.3: So sánh hàm lƣợng polyphenol tổng số từ trình tiền xử lý EC values (mM/mg) 35 30 25 20 30-72 15 50-20 10 BI BE NP Biểu đồ 4.4: So sánh hoạt tính chống oxy từ trình tiền xử lý 4.4.2 Nhận xét kết khảo sát ảnh hƣởng trình tiền xử lý Theo biểu đồmỗi trình tiền xử lýkhác cho hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa khác Kết thu đƣợc cho thấy trình tiền xử lý phƣơng pháp BI sau sấy500-20h thu đƣợc mẫu có hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa cao mẫu chiết xuất thu đƣợc Quá trình sấy50020h cho kết cao nhiều so với phƣơng pháp sấy300-72h Riêng mẫu không xử lý 32 NP kết hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa sấy 300-72h cho giá trị cao so với sấy 500-20h Giá trị GAE cao thu đƣợc từ mẫu đƣợc tiền xử lý theo phƣơng pháp BI sấy 500-20h, sấy 300-72h NP sấy 300-72h Kết giá trị GAE tƣơng đƣơng với kết giá trị EC đƣợc biểu biểu đồ Ngƣợc lại, mẫu đƣợc tiền xử lý theo phƣơng pháp BE sấy 300-72h thu đƣợc hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa thấp mẫu chiết xuất Nhiệt độ cao đƣợc xem yếu tố cần thiết để ngăn chặn số enzym gây suy thối hoạt tính hợp chất chống oxy hóa diện Ổi Tuy nhiên, nhiệt độ cao phá hủy hợp chất không bền nhiệt Các kết tiền xử lý BI BE cho thấy thời gian ngâm nƣớc sơi kéo dài ảnh hƣởng đến hợp chất không bên nhiệt Ổi Tiền xử lý BI nhiệt độ cao đƣợc dừng lại kịp thời đƣợc ngâm đá, ngăn cản phá hủy hợp chất chống oxy hóa khơng bền nhiệt Do đó, hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa chiết xuất Ổi với BI cao nhiều so với BE Do đó, cho thấy nhiệt độ sấy 500C kích thích hoạt động enzyme sản sinh hợp chất polyphenol Ổi Từ kết thu đƣợc nghiên cứu cho thấy trình tiền xử lý thích hợp cho mẫu chiết xuất Ổi có hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa với chất lƣợng cao Q trình sấy 500-20h nên đƣợc áp dụng cho mẫu tiền xử lý BI trình sấy 300-72h nên đƣợc sử dụng cho mẫu không xử lý NP 4.5 Kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 4.5.1 Bảng kết Bảng 4.4: Kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 33 NT Không khuấy Khuấy Soxhlet Siêu âm Hàm lƣợng polyphenol tổng số (mg/g) Hoạt tính chống oxy hóa (mM/mg) 90,091±0,393 120,598±0,379 160,134±1,109 172,857±1,572 7,607±0,008 12,718±0,018 26,385±0,030 29,940±0,011 200 GAE values (mg/g) 180 160 140 120 100 80 60 40 20 Không khuấy Khuấy Soxhlet Siêu âm Biểu đồ 4.5: So sánh hàm lƣợng polyphenol tổng số từ phƣơng pháp chiết xuất 35 EC values (mM/mg) 30 25 20 15 10 Không khuấy Khuấy Soxhlet Siêu âm Biểu đồ 4.6: So sánh hoạt tính chống oxy hóa từ phƣơng pháp chiết xuất 34 4.5.2 Nhận xét kết quảkhảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất Theo biểu đồ cho thấy phƣơng pháp chiết xuất khác cho mẫu chiết xuất có hàm lƣợng polyphenoltổng số hoạt tính chống oxy hóa khác Kết thu đƣợc cho thấy kỹ thuật siêu âm mang lại chiết xuất với hàm lƣợng polyphenoltổng số hoạt tính chống oxy hóa cao kỹ thuật ngâm không khuấy thu đƣợc chiết xuất có hàm lƣợng polyphenol tổng sốvà hoạt tính chống oxy hóa thấp Giá trị GAE EC chiết xuất thu đƣợc từ phƣơng pháp siêu âm 172,857 ± 1,572 mg/g 29,940 ± 0,011 mM/mg cao gần gấp 2, lần giá trị GAE EC chiết xuất thu đƣợc từ phƣơng pháp ngâm mà không khuấy 90,091 ± 0,393 mg/g 7,607 ± 0,008 mM/mg Xem xét ảnh hƣởng phƣơng pháp khuấy, kết cho thấy chiết xuất thu đƣợc cách khuấy cho hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa cao đáng kể khơng khuấy Tuy nhiên, phƣơng pháp khuấy có khả để thu đƣợc chiết xuất có hàm lƣợng hoạt tính cao so sánh với phƣơng pháp soxhlet siêu âm Phƣơng pháp soxhlet thu đƣợc chiết xuất có hàm lƣợng polyphenol tổng sốvà hoạt tính chống oxy hóa thấp so với phƣơng pháp siêu âm Do kỹ thuật soxhlet bột Ổi sấy khô đƣợc chiết xuất với ethanol tuyệt đối ngƣng tụ nhiệt độ sơi giờ, việc trì nhiệt độ cao thời gian dài làm giảm hàm lƣợng hoạt tính hợp chất chống oxy hóa khơng bền nhiệt Ổi Trong đó, kĩ thuật siêu âm sử dụng chuyển động với tần số cực cao để phá vỡ cấu trúc thành tế bào thực vật tạo điều kiện tối đa cho việc tiếp xúc dung môi vật liệu thực vật làm cho lƣợng chất chiết đƣợc với hàm lƣợng hoạt tính cao Về độ dài thời gian chiết xuất, phƣơng pháp ngâm không khuấy, ngâm khuấy, soxhlet siêu âm yêu cầu thời gian chiết xuất khác lần lƣợt giờ, 10 phút Điều cho thấy phƣơng pháp siêu âm phƣơng pháp chiết xuất hiệu 35 không để có đƣợc hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa cao mà cịn cho việc giảm tiêu thụ thời gian Từ kết thu đƣợc, siêu âm đƣợc lựa chọn phƣơng pháp chiết xuất polyphenol từ Ổi 4.6 Kết ảnh hƣởng phân cực dung môi chiết xuất độ trƣởng thành đến hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 4.6.1 Bảng kết Bảng 4.5: Kết khảo sát ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành NT Ethyl acetate Ethanol Nƣớc nóng Hàm lƣợng YL 136,331±3,762 187,837±1,109 160,066±3,046 polyphenol tổng ML 112,253±0,856 172,857±1,572 143,102±1,277 số (mg/g) OL 98,094±7,173 167,180±0,295 134,757±0,547 Hoạt tính chống YL 17,426±0,053 46,371±0,023 31,968±2,355 oxy hóa ML 10,413±0,036 29,940±0,011 30,926±5,141 (mM/mg) OL 7,218±0,021 25,593±0,341 22,468±0,150 36 200 180 GAE values (mg/g) 160 140 120 YL 100 ML 80 OL 60 40 20 Ethyl acetate Ethanol Nƣớc nóng Biểu đồ 4.7: So sánh hàm lƣợng polyphenol tổng số nhóm chiết xuất loại dung môi 50 EC values (mM/mg) 45 40 35 30 YL 25 ML 20 OL 15 10 Ethyl acetate Ethanol Nƣớc nóng Biểu đồ 4.8: So sánh hoạt tính chống oxy hóa nhóm chiết xuất loại dung môi 37 4.6.2 Nhận xét kết khảo sát ảnh hƣởng phân cực dung môi độ trƣởng thành Theo biểu đồ kết khảo sát ảnh hƣởng độ phân cực dung môi chiết xuất cho thấy dung môi khác có hiệu chiết xuất hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa khác từ Ổi Các dung môi chiết xuất sử dụng sở hữu tính phân cực riêng biệt, lấy từ nƣớc nóng có độ phân cực cao nhất, lấy từ ethanol có độ phân cực trung bình lấy từ ethyl acetate có độ phân cực thấp Điều hợp chất có độ phân cực trung bình tồn nhiều mẫu chiết xuất so với hợp chất có độ phân cực cao Ngồi kết luận hợp chất phân cực tồn với hàm lƣợng nhỏ mẫu Ổi Kết cho thấy ethanol dung mơi chiết xuất thích hợp cho trình tách chiết hợp chất polyphenol từ Ổi Theo biểu đồ kết khảo sát ảnh hƣởng độ trƣởng thành cho thấy hàm lƣợng polyphenoltổng số chiết xuất đƣợc từ mẫu YL cao mẫu ML OL loại dung môi sử dụng Hàm lƣợng polyphenol tổng số cao mẫu YL chiết xuất dung môi ethanol với giá trị GAE tƣờng ứng 187,837 ± 1,109 mg/g thấp mẫu OL chiết xuất dung môi ethyl acetate với giá trị GAE tƣơng ứng 98,094 ± 7,173 mg/g Khi khảo sát hoạt tính chống oxy hóa có kết tƣơng đƣơng nhƣ hàm lƣợng polyphenol tổng số từ mẫu Chiết xuất ethanol mẫu YL thể hoạt tính chống oxy hóa cao tất mẫu với giá trị EC tƣơng ứng 46,371 ± 0,023 mM/mg thấp mẫu OL chiết xuất ethyl acetate với giá trị EC tƣơng ứng 7,218 ± 0,021 mM/mg Điều cho thấy hàm lƣợng polyphenol tổng số mẫu Ổi non cao gấp lần so với mẫu Ổi già hoạt tính chống oxy hóa mẫu Ổi non cao gấp 1,5-2 lần so với mẫu Ổi già chiết xuất điều kiện Kết cho thấy Ổi non thích hợp cho trình tách chiết hợp chất polyphenol từ Ổi 38 4.7 Quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi Sau tiến hành khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi, dựa vào kết thí nghiệm xây dựng đƣợc quy trình tách chiết polyphenol hồn chỉnh áp dụng thực tiễn Cơ sở trỉnh chiết xuất phƣơng pháp trích ly Trích ly nhằm tách hợp chất có Ổi, đặc biệt thành phần polyphenol việc sử dụng dung mơi có độ phân cực thích hợp sở chênh lệch nồng độ Áp dụng trình tiền xử lý chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút sau sấy 500C 20 Dung môi chiết xuất đƣợc sử dụng ethanol Phƣơng pháp siêu âm phƣơng pháp chiết xuất Và mẫu Ồi sử dụng cho trình tách chiết mẫu Ổi non 39 4.7.1 Sơ đồ quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi Lá Ổi non Tiền xử lý Làm khô Chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút Sấy 500C – 20 Nghiền nhỏ Ethanol Trích ly Siêu âm 10 phút Bã Lọc Dịch trích ly Cơ quay chân khơng Bx 10% 450C Sản phẩm Hình 4.3 : Sơ đồ quy trình tách chiết polyphenol từ Ổi 40 4.7.2 Thuyết quy trình  Lựa chọn nguyên liệu Lá Ổi non dùng làm thí nghiệm đƣợc chọn lựa kỹ chọn tƣơi, nguyên cuống phiến, loại bỏ khơ, héo, có mảng trắng bị rầy xâm hại Sau lựa chọn Ổi đƣợc rửa với nƣớc vài lần  Tiền xử lý Mục đích: Nhằm loại bỏ enzyme hoạt động làm suy giảm hoạt tính chống oxy hóa củacác chất Ổi nhiệt độ cao Tuy nhiên, không đƣợc để nhiệt độ cao lâu phân hủy hợp chất polyphenol Do cần phải hạ nhiệt độ nhanh sau lấy khỏi môi trƣờng nhiệt độ cao Cách tiến hành: Chần Ổi nƣớc sôi 30 giây ngâm vào nƣớc đá 15 phút  Làm khơ Mục đích: nhằm làm giảm thủy phần Ổi, hạn chế ảnh hƣởng nƣớc trình tách chiết hợp chất mong muốn tạo điều kiện thích hợp cho enzyme oxidase polyphenol hoạt động trở lại làm tăng hàm lƣợng polyphenol tổng số Ổi Cách tiến hành: Sấy Ổi 500C 20  Nghiền nhỏ Mục đích: Ổi đƣợc xay nhỏ thành dạng bột mịn để tạo điều kiện thuận lợi cho việc tiếp xúc nguyên liệu với dung môi, làm tăng khả khuếch tán thẩm thấu chất vào dung môi, tăng hiệu trích ly chất mong muốn Cách tiến hành: Lá Ổi sau sấy đƣợc xay máy xay thơng thƣờng, sau chia khối lƣợng mẫu vào lọ đƣợc đóng nắp cẩn thận  Trích ly Mục đích: Sử dụng loại dung mơi phân cực để sử dụng trích ly chất phân cực có Ổi, cụ thể hợp chất polyphenol 41 Cách tiến hành: cân xác lƣợng bột Ổi cho vào lƣợng dung mơi tiến hành trích ly Bột ổi dung mơi trích ly sau đƣợc hịa vào đƣợc đem siêu âm 10 phút nhiệt độ môi trƣờng nhằm tăng khả thu hồi hợp chất polyphenol  Lọc Mục đích: Nhằm loại bỏ tạp chất thơ lẫn dịch trích ly, thu dịch trích ly thuận lợi cho trình xử lý, tinh chế Cách thực hiện: Rót hỗn hợp trích ly qua giấy lọc dịch trích ly thấm qua hết  Cơ quay chân khơng Mục đích: Nhằm thu hồi dung mơi để tái sử dụng Dịch sau cô đặc đƣợc chiết bỏ dung môi nhằm loại bỏ thành phần không mong muốn khác Cách thực hiện: Dịch trích ly đƣợc đặc thiết bị quay chân không nhiệt độ đƣợc giữ 450C Dịch trích ly đƣợc đến thể tích cịn khoảng 10% so với thể tích ban đầu kết thúcthu sản phẩm dịch chiết thô Dịch chiết thô đƣợc lƣu giữ điều kiện ánh sạng nhẹ 40C đem xác định hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa 42 Chƣơng V: KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình thực đề tài kết thí nghiệm thu đƣợc, rút đƣợc số kết luận nhƣ sau:  Về ảnh hƣởng trình tiền xử lý: phƣơng pháp tiền xử lý cách chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút (BI) sau sấy 500C 20 (500-20h) thu đƣợc chiết xuất có hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa cao  Về ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết xuất: siêu âm phƣơng pháp mang lại chiết xuất có hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa cao  Về ảnh hƣởng phân cực dung mơi độ trƣởng thành mẫu non sử dụng dung mơi có độ phân cực trung bình ethanol để chiết xuất mang lại hàm lƣợng polyphenol tổng sốvà hoạt tính chống oxy hóa cao Tổng hợp kết từ yếu tố anh hƣởng đƣợc khảo sát để có đƣợc hàm lƣợng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa đạt yêu cầu hàm lƣợng nhƣ chất lƣợng chọn nguyên liệu Ổi non đem tiền xử lý cách chần nƣớc sôi 30 giây ngâm đá 15 phút (BI) sau sấy 500C 20 (500-20h) Sau xấy xong tiến hành chiết xuất phƣơng pháp siêu âm 10 phút với dung môi sử dụng ethanol 5.2 Đề nghị Các kết thu đƣợc từ trình làm đề tài kết thu đƣợc ban đầu Nếu có thêm thời gian kinh phí, tiến hành thí nghiệm chun sâu để tìm đƣợc phƣơng pháp chiết xuất polyphenol từ Ổi tối ƣu nhất, ví dụ nhƣ: - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng khoảng rộng cách sử dụng nhiều loại dung môi (acetone, n-hexan…) với tỷ lệ dung mơi thích hợp 43 - Tiếp tục thực quy trình tinh chế phẩm polyphenol cách sử dụng phƣơng pháp đại nhƣ sắc ký cột hay sắc ký mỏng … - Xác định xác thành phần hàm lƣợng hợp chất polyphenol Ổi phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Ứng dụng bột chiết từ Ổi lĩnh vực chế biến thực phẩm hay y học… 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1].Đinh Văn Điện, Nguyễn Thị Bích Hạnh, Trần Trọng Loan, (2009) Nghiên cứu q trình trích ly polyphenol chè xanh vụn ứng dụng thực phẩm chức năng, đồ án tốt nghiệp, ĐH Bách Khoa Hà Nội [2].Đỗ Tất Lợi, (1999) Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học [3].Nguyễn Kim Phi Phụng,(2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại Học Quốc Gia thành phố Hồ Chí Minh, ĐH Khoa học tự nhiên [4].Đái Thị Xuân Trang, Phạm Thị Lan Anh, Trần Thanh Mến Bùi Tấn Anh, (2012) Khảo sát khả điều trị bệnh tiểu đường cao chiết Ổi (Psidium Guajava L.), ĐH Cần Thơ [5].Nguyễn Xn Trình, Nguyễn Xn Phƣớc, (2009) Nghiên cứu trích ly polyphenol từ Sake ứng dụng tạo sản phẩm đồ uống giàu polyphenol, khóa luận Kỹ sƣ Cơng nghệ thực phẩm, ĐH Cơng Nghệ Sài Gịn Tiếng Anh [6].Ayaz Ali Memom, Najma Memon, Devanand L Luthira, Muhammad Iqbal Bhanger, Amanat Ali Pitafi, (2010) Phenolic acid profiling and antioxidant potential of Mulberry leaves and fruit grown in Pakistan, Pakistan and USA [7].Iris F.F Benzie and J.J Strain, (1996) The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Mwasure of “Antioxidant Power”: The FRAP Assay, HongKong and United Kingdom [8].Kriengsak Thaipong, Unaroj Boonprakob, Kevin Crosby, Luis Cisneros-Zevallos, David Hawkins Byrne, (2005) Comparison of ABTS, DPPH, FRAP, and OEAC assays for estimating anoxidant activity from guava fruit extracts, Thailand and USA [9].M Atanassova, S Georgieva, K Ivancheva, (2011) Total phenolic and total flanovoid contents, antioxidant capacity and biological contaminants in medicinal herbs, Bulgaria 45 [10].Witayanpan Nantianon, Songwut Yotsawimonwat, Siriporn Okonogi, (2010) Factors influencing antioxidant activities and totals phenolic content of guava leaf extract, Chiang Mai University, Thailand Tài liệu Internet [11].http://vi.wikipedia.org/wiki/%E1%BB%94i [12].http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/340 [13].http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=377 [14].http://thuocnam.vn/cay-oi.html [15].http://douongvietnam.blogspot.com/2007/12/i-ngun-nguyn-liu-s-dng-cho-sn-xutung.html [16].http://d.violet.vn/uploads/resources/562/2281840/preview.swf [17].http://thuocdongduoc.vn/index.php?option=com_content&view=article&id=1187:ca ch-dung-oi-tri-chung-tieu-hoa-khong-tot&catid=1:tin-tuc&Itemid=10 [18].http://canthostnews.vn/Default.aspx?NDID=1823&keyword=Cong-nghe-san-xuatbot-chiet-xuat-tu-la-oi&tabid=99 [19].http://www.duoclieu.org/2012/02/phan-loai-flavonoid.html [20].http://www.duoclieu.org/2012/01/phan-loai-tanin.html ... mm), độ ẩm tƣơng đối cao (trên 80%) Những điều kiện thuận lợi nhƣ tạo cho nƣớc ta hệ thực vật phong phú đa dạng Theo số liệu thống kê gần hệ thực vật Việt Nam có 10.000 lồi, khoảng 3.200 đƣợc