THIẾT LẬP HỆ THỐNG TÁI SINH JY VITRO CÂY HOA CÚC (Chrysanthemum sp)

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ************ THIẾT LẬP HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO CÂY HOA CÚC (Chrysanthemum sp.) Giảng viên hướng dẫn : Sinh viên thực : TS TRẦN THỊ DUNG ĐẶNG THỊ THU THẢO Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 LỜI CẢM ƠN Trong sống, phải trải qua lúc khó khăn, vui buồn, vượt qua đạt thành ngày hôm nhờ đến dạy bảo, giúp đỡ, quan tâm chăm sóc gia đình, thầy cô bạn bè Mỗi ngày trôi qua ngày thêm thương Mẹ, người mang đến cho sống hôm dạy bảo nên người Con xin thành kính khắc ghi cơng ơn trời biển Mẹ dành cho Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này: Em xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Tiến sĩ Trần Thị Dung dành nhiều thời gian công sức để truyền đạt cho em kiến thức quý báu, lắng nghe động viên em, tạo điều kiện cho em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cám ơn Thầy, Cô giảng viên môn Công nghệ Sinh học, khoa Khoa học ứng dụng, trường Đại học Tôn Đức Thắng dạy dỗ, truyền đạt kiến thức chuyên môn cho em suốt năm qua Lời cuối, chân thành cám ơn bạn Bùi Thị Thanh Tâm bạn sinh viên lớp 09SH quan tâm, giúp đỡ, động viên suốt thời gian giảng đường Đại học! Đặng Thị Thu Thảo i TĨM TẮT Đặng Thị Thu Thảo, Đại học Tơn Đức Thắng, Tp Hồ Chí Minh Tháng 12/2009, với đề tài “Thiết lập hệ thống tái sinh in vitro hoa Cúc Chrysanthemum sp.)”, hướng dẫn TS Trần Thị Dung Đề tài thực Khoa Khoa học ứng dụng, Trường Đại học Tôn Đức Thắng Thời gian thực từ tháng 10/2009 đến 12/2009 œMục đích đề tài: Tìm hiểu thơng số mơi trường thích hợp cho trình tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro, từ ni cấy thành hoa Cúc hoàn chỉnh in vitro làm sở cho vi nhân giống nghiên cứu chuyển gen có lợi hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) œPhương pháp nghiên cứu: Mẫu hoa Cúc in vitro sử dụng để tiến hành khảo sát thông số sau: - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi Cúc in vitro môi trường agar môi trường lỏng - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro œKết đạt được: Các mẫu Cúc in vitro tái sinh chồi mơi trường MS có bổ sung mg/l NAA + mg/l 2,4-D + mg/l BA Mỗi mảnh mơ sẹo có từ – chồi Sau tái sinh, chồi nhân nhanh để tạo số lượng lớn in vitro mơi trường MS có bổ sung mg/l BA + 0,5 mg/l IBA môi trường MS lỏng có bổ sung mg/l GA3 + 0,05 mg/l NAA Các chồi mọc vươn lên khỏi mơi trường, kích thích phát triển thân Khi đạt số lượng chồi mong muốn, tiến hành tạo rễ môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l IBA Rễ mập, có nhiều lơng hút, thích hợp để chuyển sang giai đoạn ex vitro tạo hoa Cúc hoàn chỉnh ii MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt v Danh sách hình vi Danh sách bảng vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU CHUNG 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Ý nghĩa đề tài .2 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa Cúc 2.1.1 Vị trí phân loại thực vật 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Tình hình sản xuất hoa Cúc 2.1.4 Giá trị kinh tế hoa Cúc 2.1.5 Đặc điểm thực vật .5 2.1.6 Đặc điểm sinh thái 2.1.7 Kỹ thuật trồng 2.2 Khái niệm chung nuôi cấy mô tế bào thực vật .8 2.2.1 Khái niệm chung .8 2.2.2 Các bước nhân giống in vitro 14 2.2.3 Một số kỹ thuật nhân giống vô tính in vitro 15 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển mẫu cấy 16 2.3 Các nghiên cứu trước nuôi cấy mô hoa Cúc 25 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 3.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm .29 3.1.1 Địa điểm 29 iii 3.1.2 Thời gian 29 3.2 Nội dung nghiên cứu 29 3.3 Vật liệu thí nghiệm 29 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 29 3.3.2 Trang thiết bị thí nghiệm 29 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 29 3.3.4 Điều kiện nuôi cấy 31 3.4 Phương pháp thí nghiệm 31 3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 31 3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 32 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro mơi trường lỏng .33 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 34 3.5 Phương pháp phân tích số liệu .34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .49 5.1 Kết luận 49 5.2 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 52 iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT MS: Môi trường Murashige Skoog (1962) BA: Benzyl adenine IAA: Indole – – acetic acid IBA: Acid indolebutyric NAA: – naphthalene acetic acid 2,4-D: 2,4 – dichlorophenoxyacetic acid GA3: Acid gibberellic ĐC: Đối chứng NSC: Ngày sau cấy CĐHST: Chất điều hòa sinh trưởng v DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Cây hoa Cúc Hình 2.2 Quy trình chuyển gen vào thực vật kỹ thuật đĩa nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 11 Hình 2.3 Một số giống hoa Cúc thuộc chi Chrysanthemum sp .28 Hình 4.1 Ảnh hưởng NAA, 2,4-D BA đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro sau 40 ngày nuôi cấy 37 Hình 4.2 Ảnh hưởng NAA, 2,4-D BA đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 38 Hình 4.3 Ảnh hưởng BA IBA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 42 Hình 4.4 So sánh ảnh hưởng BA IBA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 43 Hình 4.5 Ảnh hưởng GA3 NAA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường lỏng .45 Hình 4.6 Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 47 Hình 4.7 Sơ đồ thiết lập hệ thống tái sinh in vitro từ mẫu hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) 48 vi DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 3.1 Thành phần môi trường MS (Murashige – Skoog, 1962) 30 Bảng 3.2 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 31 Bảng 3.3 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 32 Bảng 3.4 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi Cúc in vitro môi trường lỏng .33 Bảng 3.5 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 34 Bảng 4.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 35 Bảng 4.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 39 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường lỏng 44 Bảng 4.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro .46 vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU CHUNG 1.1 Đặt vấn đề Từ xa xưa, chơi Cúc thú chơi tao nhã bậc học sỹ gia đình giàu có Trải qua nhiều năm, với kỹ thuật lai ghép, phương pháp trồng hoa mới, chất lượng chủng loại hoa Cúc cải thiện nhiều Cho đến có khoảng 70 giống Cúc trồng với mục đích cắt cành Cây hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) lồi hoa trang trí phổ biến giới Hoa Cúc đa dạng màu sắc hình dáng, loại hoa cắt cành làm cảnh, loại hương liệu dược liệu Hoa Cúc nhanh chóng trở thành mục tiêu thương mại vi nhân giống, cách sử dụng kỹ thuật nuôi cấy mô để sản xuất với số lượng lớn Có nhiều cơng trình nghiên cứu nhân giống hoa Cúc nhiều quốc gia báo cáo nuôi cấy mô sẹo tái sinh thành con, nuôi cấy đỉnh sinh trưởng in vitro, nuôi cấy tế bào trần, nuôi cấy mô sẹo phát sinh từ thân và từ phần hoa [9] Nhân giống sinh dưỡng ex vitro cách cắt cành phương pháp đơn giản nông dân sử dụng đồng ruộng Tuy nhiên, thu nhận từ phương pháp bị thối hóa sau vài hệ bị nhiễm virus Ngoài nhân giống, nghiên cứu tạo giống hoa có màu sắc lạ, giống Cúc có mang gen chống chịu sâu bệnh hay điều kiện thời tiết khắc nghiệt trọng, nhiên thường thực phương pháp lai tạo truyền thống nên thường gây đột biến, cho kết không mong muốn Thời gian gần đây, nhờ can thiệp kỹ thuật di truyền đem lại nhiều kết khả quan lĩnh vực nuôi cấy mô thực vật chuyển nạp gen gfp nhờ Agrobacterium tumefaciens vào mẫu Cúc đại đóa giúp giống có khả phát sáng Vì vậy, đề tài “Thiết lập hệ thống tái sinh in vitro hoa Cúc (Chrysanthemum sp.)” nhằm tìm mơi trường thích hợp để tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro tạo thuận lợi cho nghiên cứu sau chuyển nạp gen ứng dụng khác hoa Cúc 1.2 Mục đích Tìm hiểu thơng số mơi trường thích hợp cho q trình tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro, từ ni cấy thành hoa Cúc hoàn chỉnh in vitro làm sở cho vi nhân giống nghiên cứu chuyển gen có lợi hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) 1.3 Ý nghĩa đề tài Xác định nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thích hợp cho tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro Xác định nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thích hợp cho nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar môi trường lỏng Xác định nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thích hợp cho tạo rễ Cúc in vitro Data file: CCCTN1 Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (Chieucaochoitn1) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 1.577 0.526 Within 0.041 0.005 103.247 0.0000 Total 11 1.618 Coefficient of Variation = 5.56% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 2.430 0.810 0.08 0.04 3.00 3.560 1.187 0.04 0.04 3.00 5.470 1.823 0.10 0.04 3.00 3.930 1.310 0.04 0.04 -Total 12.00 15.390 1.283 Within 0.38 0.07 Bartlett's test Chi-square = 2.350 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File : CCCTN1 Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Case Range : 13 - 16 Variable : Chieucaochoitn1 Function : RANGE Error Mean Square = 0.005000 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test 56 0.11 LSD value = 0.1937 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.8100 Mean = 1.187 Mean = 1.823 Mean = 1.310 Ranked Order C B A B Mean = 1.823 Mean = 1.310 B Mean = 1.187 B Mean = 0.8100 57 A C PHỤ LỤC 2: Data file:%CHOIAG Title: THI NGHIEM - % MAU TAO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (%taochoiag) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 11852.592 1316.955 Within 20 5926.963 296.348 4.444 0.0026 Total 29 17779.555 Coefficient of Variation = 25.82% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 99.990 33.330 0.00 9.94 3.00 133.320 44.440 19.24 9.94 3.00 133.320 44.440 19.24 9.94 3.00 166.650 55.550 19.24 9.94 3.00 233.320 77.773 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 233.320 77.773 19.25 9.94 3.00 199.980 66.660 0.00 9.94 -Total 30.00 1999.880 66.663 Within 24.76 17.21 Bartlett's test Chi-square = 62.922 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value 58 4.52 Data File :%CHOIAG Title : THI NGHIEM - % MAU TAO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : %taochoiag Function :RANGE Error Mean Square = 296.3 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 39.99 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 33.33 C Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 88.89 A Mean = 55.55 ABC Mean = 77.77 AB Mean = 77.77 AB Mean = 77.77 AB Mean = 88.89 A Mean 10 = 66.66 ABC Mean = 88.89 A Mean = 55.55 ABC Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 77.77 AB Mean = 44.44 BC Mean 10 = 66.66 ABC Mean = 33.33 C Data file:SCTN2 Title: THI NGHIEM – SO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (sctn2) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 306.623 34.069 Within 20 4.095 0.205 166.394 0.0000 Total 29 310.718 Coefficient of Variation = 4.93% 59 Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 10.660 3.553 0.39 0.26 3.00 14.330 4.777 0.51 0.26 3.00 20.000 6.667 0.34 0.26 3.00 24.340 8.113 0.51 0.26 3.00 32.000 10.667 0.34 0.26 3.00 40.000 13.333 0.34 0.26 3.00 36.340 12.113 0.51 0.26 3.00 38.660 12.887 0.51 0.26 3.00 31.670 10.557 0.20 0.26 3.00 27.330 9.110 0.70 0.26 -Total 30.00 275.330 9.178 3.27 Within 0.60 0.45 Bartlett's test Chi-square = 3.345 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.840 Data File : SCTN2 Title : THI NGHIEM – SO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : sctn2 Function :RANGE Error Mean Square = 0.2050 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.052 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 3.553 Mean = 4.777 Mean = 6.667 Mean = 8.113 Mean = 10.67 Mean = 13.33 Mean = 12.11 Mean = 12.89 Mean = 10.56 Mean 10 = 9.110 Ranked Order G Mean = 13.33 A Mean = 12.89 AB Mean = 12.11 B Mean = 10.67 C Mean = 10.56 C Mean 10 = 9.110 D B Mean = 8.113 D AB Mean = 6.667 Mean = 4.777 Mean = 3.553 F E D C A C D 60 E F G Data file:CCCTN2 Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI TN2 Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (ccctn2) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob -Between 9.659 1.073 Within 20 0.076 0.004 284.172 0.0000 Total 29 9.735 Coefficient of Variation = 5.34% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 8.370 2.790 0.06 0.04 3.00 2.290 0.763 0.02 0.04 3.00 2.570 0.857 0.03 0.04 3.00 2.720 0.907 0.04 0.04 3.00 3.260 1.087 0.12 0.04 3.00 3.770 1.257 0.04 0.04 3.00 3.480 1.160 0.04 0.04 3.00 3.100 1.033 0.08 0.04 3.00 2.570 0.857 0.05 0.04 3.00 2.410 0.803 0.07 0.04 -Total 30.00 34.540 1.151 Within 0.58 0.06 Bartlett's test Chi-square = 8.438 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 61 0.11 Data File :CCCTN2 Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : ccctn2 Function :RANGE Error Mean Square = 0.004000 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1469 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 2.790 Mean = 0.7633 Mean = Mean Ranked Order A Mean = 2.790 E Mean = 1.257 B 0.8567 E Mean = 1.160 BC = 0.9067 DE Mean = 1.087 C Mean = 1.087 Mean = 1.033 CD Mean = 1.257 B Mean = 0.9067 DE Mean = 1.160 BC Mean = 0.8567 E Mean = 1.033 Mean = 0.8567 E Mean = 0.8567 E Mean 10 = 0.8033 E Mean 10 = 0.8033 E Mean = 0.7633 E C CD 62 A PHỤ LỤC 3: Data file: CHIEU CAO CHOI Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI TRONG MT LONG Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (cccl) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 7.662 3.831 Within 2.149 0.358 10.696 0.0105 Total 9.811 Coefficient of Variation = 8.58% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 17.520 5.840 1.01 0.35 3.00 20.950 6.983 0.17 0.35 3.00 24.300 8.100 0.17 0.35 -Total 9.00 62.770 6.974 Within 0.60 Bartlett's test Chi-square = 6.652 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.036 Data File : ChIEU CAO CHOI Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI MT LONG Case Range : 10 - 12 Variable : cccl Function : RANGE Error Mean Square = 0.3580 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.811 1.11 at alpha = 0.01 63 0.37 Original Order Ranked Order Mean = 5.840 B Mean = 8.100 A Mean = 6.983 AB Mean = 6.983 AB Mean = 8.100 A Mean = 5.840 B Data file: SOLA Title: THI NGHIEM – SO LA Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (SOLA) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 9.496 4.748 Within 0.406 0.068 70.217 0.0001 Total 9.902 Coefficient of Variation = 3.89% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 15.910 5.303 0.39 0.15 3.00 20.900 6.967 0.17 0.15 3.00 23.310 7.770 0.13 0.15 -Total 9.00 60.120 6.680 Within 1.11 0.26 Bartlett's test Chi-square = 2.122 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.346 Data File :SOLA Title : THI NGHIEM – SO LA Case Range : 10 - 12 Variable : SOLA Function :RANGE Error Mean Square = 0.06800 64 0.37 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.7894 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 5.303 Mean = 6.967 Mean = 7.770 Ranked Order C B A Mean = 7.770 Mean = 6.967 Mean = 5.303 A B C Data file: SODOT Title: THI NGHIEM – SO DOT Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (sodot) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 22.574 11.287 Within 0.454 0.076 149.258 0.0000 Total 23.028 Coefficient of Variation = 5.27% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 9.340 3.113 0.12 0.16 3.00 16.870 5.623 0.23 0.16 3.00 20.790 6.930 0.40 0.16 -Total 9.00 47.000 5.222 Within 1.70 0.27 Bartlett's test Chi-square = 2.213 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.331 65 0.57 Data File :SODOT Title : THI NGHIEM – SO DOT Case Range : 10 - 12 Variable : sodot Function : RANGE Error Mean Square = 0.07600 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.8345 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 3.113 Mean = 5.623 Mean = 6.930 Ranked Order C B A Mean = 6.930 Mean = 5.623 Mean = 3.113 66 A B C PHỤ LỤC 4: Data file:%TAORE Title: THI NGHIEM - % TAO RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (% tao re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 6370.652 1592.663 Within 10 2223.111 222.311 7.164 0.0055 Total 14 8593.762 Coefficient of Variation = 20.97% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 99.990 33.330 0.00 8.61 3.00 266.660 88.887 19.25 8.61 3.00 266.660 88.887 19.25 8.61 3.00 233.320 77.773 19.25 8.61 3.00 199.980 66.660 0.00 8.61 -Total 15.00 1066.610 71.107 Within 24.78 14.91 Bartlett's test Chi-square = 61.511 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data File :%TAORE Title : THI NGHIEM - % TAO RE Case Range : 16 - 20 Variable : % tao re Function : RANGE Error Mean Square = 222.3 67 6.40 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 38.58 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 33.33 Mean = 88.89 Mean = Mean Mean Ranked Order B Mean = 88.89 A A Mean = 88.89 A 88.89 A Mean = 77.77 A = 77.77 A Mean = 66.66 AB = 66.66 AB Mean = 33.33 B Data file:SORE Title: THI NGHIEM – SO RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (so re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 122.461 30.615 Within 10 1.331 0.133 229.982 0.0000 Total 14 123.792 Coefficient of Variation = 8.09% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 2.320 0.773 0.20 0.21 3.00 10.000 3.333 0.67 0.21 3.00 27.660 9.220 0.19 0.21 3.00 17.670 5.890 0.19 0.21 3.00 10.000 3.333 0.34 0.21 -Total 15.00 67.650 4.510 Within 2.97 0.36 Bartlett's test Chi-square = 4.681 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.32 68 0.77 Data File :SORE Title : THI NGHIEM – SO RE Case Range : 16 - 20 Variable : so re Function : RANGE Error Mean Square = 0.1330 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9437 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.7733 Mean = 3.333 Mean = 9.220 Mean = 5.890 Mean = 3.333 Ranked Order D C A B C Mean = 9.220 A Mean = 5.890 Mean = 3.333 C Mean = 3.333 C Mean = 0.7733 B D Data file: CHIEUDAIRE4 Title: THI NGHIEM – CHIEU DAI RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (daire4) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 63.003 15.751 Within 10 0.088 0.009 1780.429 0.0000 Total 14 63.092 Coefficient of Variation = 4.12% 69 Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 18.210 6.070 0.09 0.05 3.00 3.920 1.307 0.15 0.05 3.00 8.290 2.763 0.11 0.05 3.00 2.210 0.737 0.05 0.05 3.00 1.580 0.527 0.04 0.05 -Total 15.00 34.210 2.281 2.12 Within 0.09 Bartlett's test Chi-square = 4.106 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.392 Data File : CHIEUDAIRE Title : THI NGHIEM – CHIEU DAI RE Case Range : 16 - 20 Variable : daire4 Function : RANGE Error Mean Square = 0.009000 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.2455 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 6.070 Mean = 1.307 Mean = 2.763 Mean = 0.7367 Mean = 0.5267 Ranked Order A Mean = 6.070 Mean = 2.763 Mean = 1.307 D Mean = 0.7367 D D Mean = 0.5267 D C B 70 A B C 0.55 ... mẫu mô sẹo tạo chồi NAA 2,4-D BA 20 NSC 40 NSC Chiều cao chồi Số chồi/mẫu (cm) 60 NSC T0 (ĐC) 0 33,30b - - - T1 0,5 0,5 1,0 55,50ab - - - T2 1,0 1,0 2,0 66,60ab - - - T3 1,0 1,0 3,0 77,73a 12,22b... - Thể tích bình: 100 ml - Thể tích dung dịch: 20 ml - Số bình/nghiệm thức: bình - Số mẫu cấy/bình: mẫu - Tổng số bình: 90 bình 32 œ Các tiêu theo dõi: - Tỷ lệ mẫu cấy tạo chồi (%) - Số chồi -. .. 0,0 L2 5,0 0,05 - Thể tích bình: 250 ml - Thể tích dung dịch: 40 ml - Số bình/nghiệm thức: bình - Số mẫu cấy/bình: mẫu - Tổng số bình: 27 bình œ Các tiêu theo dõi: - Số - Số đốt - Chiều cao (cm)