NGHIÊN CỨU KINH NGHIỆM XAY DUNG BO TIEU BAN HIEN VI.CO BINH NHIEM SAC THE
PHUC VU DAY HOC SINH HOG Thân Thị Hoa - Hoang Thi Thúy - Trần Thị Hiền - Hoàng Thị Mai
Trường Đại học Nông - Lâm Bắc Giang
Email: thanhoa87nl@gmail com
Tóm tắt: Đề tài nghiên cứu cải tiến qui trình làm tiêu bản hiển vi tạm thời NST và xây dựng bộ tiêu
bản hiển vi cố định nhiễm sắc thể ở các loài hành tím, tỏi, châu chấu và dế mèn chúng tôi đã thực hiện các phương pháp cải tiến từng bước trong qui trình làm tiêu bản tạm thời nhiễm sắc thể đưa ra
qui trình cải tiến tiết kiệm 60-70% thời gian và 40-50% chỉ phí Các tiêu bản hiển ví tạm thời đẹp, đạt
tiêu chuẩn được cố định qua các bước: Tách lamelle và lame bằng phương pháp để tiêu bản trong
tỦ âm sâu -70 trong 30 phút, sau đó sử dụng lưỡi dao lam tách lamelle dễ dàng không bị dính mẫu; khử nước bằng cồn 30 40, 50, 6ữ, 70, 80, 90, 969 và cồn tuyệt đối trong khoảng thời gian khác nhau Chúng tôi xử Ii đột biến đa bội nhiệm sắc thể trên rễ hành tím bằng cochicine nồng độ 0,03% trong 24 giờ cho tỉ lệ tiêu bản xuất hiện đột biến là cao nhất Từ đó đưa ra qui trình làm tiêu bản đột biến đa bội NST ở rễ hành tím
1 Đặt vấn đề
Trong xu thế đổi mới phương pháp dạy và học hiện đại theo theo chương trình giáo dục STEM với mục tiêu
ấy người học làm trung tâm nhằm hình thành, phát triển phẩm chất và năng lực cho học sinh (HS) thì vai trò của dạy học thực hành thí nghiệm tại các trường phổ thơng
vƠ cùng quan trọng
Nội dung chương trình và SGK Sinh học 9, 10, 12 đã ›hú trọng cung cấp các kiến thức cơ bản, hiện đại về Di ruyền học giúp lý giải các hiện tượng cơ bản nhất của sự
sống Tuy nhiên, Di truyền học là loại kiến thức khó,
nhiều khái niệm trừu tượng Các bài thực hành Ditruyền
học giúp học sinh củng cố kiến thức, cụ thể hóa các khái
hiệm, gây hứng thú học tập, v.v
Tuy nhiên, SGK đưa quy trình làm tiêu bản NST
phức tạp và tốn nhiều thời gian, ước tính khoảng từ 20-25 phút, tiêu bản tạm thời chỉ có thể sử dụng trong
01 tiét thực hành Vì vậy, cần có một quy trình làm tiêu án đơn giản, tiết kiệm thời gian và hướng đến làm tiêu tn cố định NST để xây dựng “kho” tiêu bản cố định NST cho bài học thực hành đạt hiệu quả Trong khi
mua một bộ 10 tiêu bản hiển vi cố định các kì của
i\guyên phân trên thị trường giá thành cao từ 850.000
đồng đến 1.500.000 đồng Vì vậy, nhóm đã thực hiện dễ tài “Xây dựng bộ tiêu bản hiển vi cố định NST phục
tu dạy học sinh học "với mục đích tạo ra bộ tiêu bản cố dinh NST phuc vu bai hoc STEM nhu trong Sinh học T10 tích hợp bài 18, 19, 20, 21 thanh 01 bai hoc STEM chủ đề “Tớ đã lớn lên thế nào?” và quy trình làm tiêu Han tam thời NST đơn giản, giảm 40% chỉ phí thực Hành, tiết kiệm khoảng 60% đến 70% thời gian
2 Nội dung nghiên cứu
2.1 Cải tiến quy trình làm tiêu bản hiển vi tạm thời
Từ khoá: Tiêu bản, nhiễm sắc thể, cố định, tạm thời
Nhận bài: 11/02/2022; Phản biện: 17/02/2022; Duyệt đăng: 19/02/2022
2.1.1 Quy trình làm tiêu bản nguyên phân ở tế bào
rễ hành tím, tỏi, hành tây
Xây dựng thành công quy trình cải tiến làm tiêu bản hiển vi các kì trong phân bào nguyên phân ở hành tím, tỏi và hành tây Sách giáo khoa cơ bản và nâng cao Sinh học 10 đưa ra quy trình làm 1 tiêu bản tạm thời các
kì nguyên phân hết khoảng thời gian từ 36-46 phút Bằng
thực nghiệm nhóm nghiên cứu xây dựng quy trình làm
tiêu bản hiển vi tạm thời hết 8 phút, rút ngắn được 40%
thời gian cho bài thực hành
{ Trồng hành hoặc tỏi cho ra rễ, cất ˆ khoảng 2mm, rửa sạch
Ỷ
Lây 1-2 rê hành đặt lên phiên kính 1 giot HCL 2N, đê trong 5 phút cho mâu
rễ mềm, dùng dao lam dàm nhẹ và — ìn mẫu [ Nhỏ 1 giọt aceto-orcein 2% lênmã _ ôm trong 3 phút Đậy lá kính, dùng đâu vết lông hoặc thì án và xoay nhẹ Èn tu bain tr trong ra |
ngoài cho tế bảo dàn đều, thám hết phẩm nhuộm còn từa 7
Hình 1 Sơ đồ cải tiến quy trình làm tiêu bản quá trình nguyên phân ở rễ hành tím, tỏi
2.1.2 Quy trình làm tiêu bản giảm phan 6 chau chau và dế mèn
Xây dựng thành công quy trình cải tiến làm tiêu bản
hiển vi các kì trong phân bào giảm phân ở châu chấu và
dế Sách giáo khoa Sinh học cơ bản lớp 12 đưa ra quy trình làm tiêu bản giảm phân hết khoảng 20-25 phút Lê Minh Đức, Đặng Thị Ngọc Thanh, 2015 đưa ra quy trình làm tiêu bản giảm phân ở châu chấu với thời gian
khoảng 30-35 phút Bằng thực nghiệm nhóm nghiên cứu xây dựng quy trình làm tiêu bản hiển vi tạm thời hết 05
phút, rút ngắn được 75% thời gian cho bài thực hành
Trang 2NGHIÊN CỨU KINH NGHIÊM
| Tách tinh hồn ra kh¢ +
| Đưa tỉnh hoàn lên phiế
1 bụng của châu chấu đực | tách lammelle mà không làm ảnh
hưởng đến tiêu bản, tế bào còn và nhỏ lên đó vài giọt nước | nguyên trên lame không bám vào —;_ lammelle và không bị xê dịch, có thể | a Dùng kim mồ tách xung quanh tinh hoàn |
| Đặt 3 túi tinfi lên phiến kính, nhỏ 1 q¡ mac dam nhe lêr
sử dụng để làm tiêu bản cố định
to-orcein 2%, dùng dao lam hoặc kim mũi ` Khử nước: Lame có mẫu vật sau
ii tinh và nhuộm 3 phút khi đã tách lammelle được chuyển qua Đậy lá kính, dùng ngón tay ấn nhẹ phẩm _ ặt lá kính cho tê bào dàn đều thâm hết | Tn còn thừa các lọ cồn có nồng độ tăng dan (30°, 40°, 50°, 60°, 70°, 80°, 90°, 96°, con tuyệt đối) để khử nước Thời gian giữ
| Q at KHV | mau qua các lọ cồn thay đổi tùy loại
Hình 2 Sơ đồ cải tiến qui trình làm tiêu bản tạm thời quá trình giảm phân châu chấu và dế mèn
2.2 Xây dựng bộ tiêu bản hiển vi cố định nhiễm sắc thể
Những tiêu bản tạm thời màu sắc đẹp, TB nhược trương, dàn đều thành 1 lớp mỏng không chỗng chéo lên
nhau được sử dụng để làm tiêu bản cố định
Tách lammelle: Chúng tôi thực hiện các phương pháp tách lammelle khác nhau thu được kết quả bang 7
Bảng 1 Kết quả tách lammelle thực hiện tiêu ban hiển vi cố định
Công thức Phương pháp Kết quả |
Để khô tự nhiên TBbamnhiduvao -
2 Ngâm trong acid acetic 45% | TB bị xê dịch, không còn trong 10 phút giữ đúng vị trí trên lame 3 Đặt tiêu bản trong ngăn đá tủ | TB bị dính vào lammelle
lạnh trong 24 giờ
Đặt tiêu bản trong tủ lạnh sâu | Dễ dàng tách lammelle ra -70°C trong 30 phút khỏi lame mà không bi xê 4 dịch TB, không bị dính TB vào lammelle, TB vẫn dàn | đều, màu sắc đẹp hay bị xê dịch Bảng 1 cho thấy để tiêu bản khô tự nhiên sau đó
tách lammelle khỏi lame thấy tế bào bám nhiều vào lammelle không thể thực hiện làm tiêu bản cố định Khi ngâm tiêu bản tạm thời váo accid acetic 45% trong 10 phút khi tách lammelle ra thì tế bào bị xê dịch không còn gữi đúng vị trí trên lame đa số bị trôi theo lammelle,
không thể thực hiện tiêu bản cố định Khi đặt tiêu bản trong tủ lạnh sâu -70°C trong 30 phút có thể dễ dàng
Bảng 2 Thời gian khử nước tối ưu ứng với các mẫu tiêu bản
' Nồng độ còn | Hành tím | Hành tây | Tỏi | Châu chấu | Dế mèn
30 17 giây IBgiây |20giây| 5 giây 3 giây
40 17giây | 18giây |20giây| 5giây 3 giây
50 17 giây 18giây |20giây| 5 giây 3 giây 60 16 giây 18 giay | 18 gidy} 5 giây 3 giây
70° 16 giây 15 giây |1Bgiây| 5 giây ở giây
80 13giây | l5giây | 18giay| 5 giây 3 qiây
90 13giây | 10giây |15giây| 5 giây 3 giây 96° 12 giây 5giây |15giây| 5 giây 3 giây còn tuyệt đối | 12 giây 5giây |10giây| 5 giây 3 giây
ss o Giao chirc Viet Nam
mẫu vật đề mẫu không mất màu nhanh
(khử chưa hết nước) hoặc TB bị teo
(khi khử nước nhiều quá) Kết quả thể
hiện ở bảng 2
Làm trong mẫu: Chuyển lame có mẫu đã khử nước
qua xylen | va xylen II Tiêu bản cố định cần đạt về yêu cầu: TB không bị co, màu tương phản, giữ màu lâu, quan sát được NST
2.2.1 Xây dựng bộ tiêu bản cố định nhiễm sắc thể
các kì trong nguyên phân và giảm phân
Xây dựng thành công bộ tiêu bản các kì của quá trình nguyên phân ở hành tím, tỏi
Thời điểm cắt mẫu rễ, có thể quan sát quá trình
nguyên phân của các tế bào ở đầu rễ tại mọi thời điểm trong ngày Ở thực vật trong đa số trường hợp thời điểm phân chia cực đại vào buổi sáng (khoảng 8 - 9 giờ) Vũ Đình Luận, Trần Thanh Hùng (2016) hướng dẫn cách trồng tỏi trên cát ẩm trong 1 tuần, thu mẫu vào thời gian 10 giờ sáng: theo Võ Thị Thanh Phương
(2012) thời điểm thu mẫu tốt nhất đối với hành tây, hành tím và rễ non các cây họ Ráy là từ 9 giờ 30 - 10
giờ sáng Qua thực nghiệm đề tài đối với các loài trên,
thời gian thu mẫu tốt nhất từ 7 - 9 giờ sáng vì lúc này tế
bào rễ hành đang phân chia mạnh, khi quan sát sẽ dễ thấy đây đủ các kì của nguyên phân
Hình 3 Tiêu bản các kì trong nguyên phân ở rễ hành tím - Xây dựng thành công bộ tiêu bản cố định các kì trong quá trình giảm phân ở châu chấu (hình 4)
2.2.2 Xây dựng bộ tiêu bản hiển vi cố định về đột biến nhiễm sắc thể ở hành tím
Xử lý rễ hành tím với colchicine ở các nông độ từ
Trang 3NGHIÊN CỨỬU KINH NGHIỆM a — ¬} ở Xà: giữa 2 P _ gk” by ers co ĐỐC *% Hình 4 Tiêu bản hiển vi cố định các kì trong giảm phân của tế bao châu chau trong thời gian 24 giờ gây đột biến thành công do có số 3 Kết luận
tế bào bị đột biến nhiều nhất đảng 2 sau đây thể hiện Đề tài đã thực hiệm các kết quả sau:
tác dụng đa bội hóa của colchicine ở các nông độ khác - Cải tiến thành công quy trình làm tiêu bản hiển vi nhau lên tế bào của rê hành tím sau 24 giờ xử lý tạm thời NST giảm 60-70% thời gian và tiết kiệm được
Bảng 2 Số tiêu bản xuất hiện tế bào tứ bội hóa 40% chi phí
thành công + Thời gian lấy mẫu đối với rê hành tím, tỏi từ 8 giờ -
Số tiêu bản đột biến Nong độ colchicine (%) 10 giờ sáng Lây tinh hoàn ở dễ mèn và châu châu đực
—_ có kích thước cơ thê 2-2,2 cm
theo thời gian nae 0,01 ; 002 | 003 | 004 | 005 7 *G : ; + Lam meém mâu rê hành tím, toi bang dung dich HCI Rk kp ha gat
= 2N trong khoảng thời gian 5 phút cho kết quả tốt nhất
đ giữ 3 3 10 8 ` + Sử dụng thuốc nhuộm aceto - orcein 2% trong thời
ản nhiễm sắc t
0,03% trong thời gian 24h 2n=16 NST
Trang 4NGHIÊN CỨU KINH NGHIỆM
gian 3 phút đối với tế bào hành tím, tỏi; 3 phút đối với tế
bào túi tinh của châu chấu và dế mèn Tài liệu tham khảo
- Thực hiện thành công 2 bộ tiêu bản các kì nguyên [1] Bọ GD&ĐT (2007), Sách giáo khoa sinh học 9, 10, phân ở hành tím, tỏi, 2 bộ tiêu bản các kì giảm phân ở 12, NXB Giáo dục
châu chấu, dế mèn [2] Nguyễn Đức Lập, Võ Thị Thanh Phương, Khảo sát
+ Gây sốc nhược trương TB trước khi làm tiêu bản cố kiểu nhân ở hành tím (Allium ascalonicwm L), 2012
[3] Lé Minh Đức, Đặng Thị Ngọc Thanh, ?hc hiện tiêu
bản hiển vỉ bộ NŠT của châu chấu (Diya chinensis)
nhằm nâng cao chất lượng dạy học các bài thực hành di truyền học chương trình sinh học phổ thông,
định thành công: Đối với TB rễ hành tím, tỏi xử lý bằng
KCI nồng độ 0,2% trong thời gian 25 phút, đối voi TB tui
tinh của châu chấu và dế mèn xử lý bằng KCI 0,5% trong
thời gian 5 phút làm TB nhược trương, NST dàn đều, Tạp chí Giáo dục, 2015
không xếp chồng lên nhau [4] Vũ Đình luận, Trần Thanh Hùng, Xây đựng và sử
+ Tách lamelle và lame sử dụng phương pháp đặt dụng bộ tiêu bản hiển vì cố định trong giảng day hoc tiêu bản trong tủ âm sâu (-70°C) trong 30 phút có thể phân thực vật học tại Trường đại học Thủ Dâu Mội,
tách lamelle ra khỏi lame dễ dàng, không ảnh hưởng Tạp chí Giáo dục, 2016
đến chất lượng tiêu bản 1
Building a set of fixed chromosomal microscopy for teaching biology students
Than Thi Hoa - Hoang Thi Thuy - Tran Thi Hien - Hoang Thi Mai Bac Giang Agriculture and Forestry University
Email: thanhoa87ni@gmail.com
Abstract: In the study of improving the process of making temporary chromosomal microscopy NST and building a set of chromosomal immobilized microsatellites in purple onions, garlic, grasshoppers and crickets, we have implemented the step-by- step improvement in the chromosomal transient slide process and offered an improved process that saves 60-70% time and 40- 50% cost Beautiful, standard temporary microscope slides were fixed through the following steps: Separating the lamelle and lamella by placing the slide in a minus 70°C refrigerator for 30 minutes, then using the lamelle blade to easily separate the lamelle sample free; dehydrated with alcohol 30°, 40°, 50°, 60°, 70°, 80°, 90°, 96° and absolute alcoho! for different time periods We treated chromosomal multiplex mutants on purple onion roots with cochicine at 0.03% concentration for 24 hours, giving the highest percentage of specimens showing mutations From there, a procedure for making a multi-chromosomal mutation template NST in purple onion roots is proposed
Keywords: Specimen, chromosome, fixed, temporary