Nghiên cứu độc tính cấp và bán trường diễn của viên nang cứng An Phụ Khang Plus trên động vật thực nghiệm

Bài viết Nghiên cứu độc tính cấp và bán trường diễn của viên nang cứng An Phụ Khang Plus trên động vật thực nghiệm trình bày xác định độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của viên nang cứng An Phụ Khang Plus trên động vật thực nghiệm.

TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG CỨNG AN PHỤ KHANG PLUS TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Đặng Thị Thu Hiên, Trần Thanh Tùng Trường Đại học Y Hà Nội Nghiên cứu độc tính cấp đánh giá chuột nhắt trắng theo hướng dẫn WHO xác định LD50 theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon Độc tính bán trường diễn viên nang cứng An Phụ Khang Plus (APKP) tiến hành chuột cống trắng, đó, chuột chia làm lô: chứng sinh học, lô uống APKP liều 0,745 g/kg/ngày 2,235 g/kg/ngày vòng tuần Chuột lấy máu thời điểm trước nghiên cứu, sau tuần tuần nghiên cứu để đánh giá chức tạo máu Giải phẫu bệnh gan, thận đánh giá thời điểm kết thúc nghiên cứu Kết nghiên cứu cho thấy: Chuột nhắt trắng uống đến liều tối đa 38,8 g/kg khơng có biểu độc tính cấp, chưa xác định LD50 APKP Nghiên cứu độc tính bán tr­ường diễn mức liều khơng có thay đổi tình trạng chung, chức tạo máu, chức cấu trúc thận chuột cống thời gian nghiên cứu Tuy nhiên, thay đổi mô bệnh học gan quan sát liều cao, cần có nghiên cứu sâu để đánh giá ảnh hưởng APKP mơ bệnh học gan Từ khóa: An Phụ Khang Plus, độc tính cấp, độc tính bán trường diễn I ĐẶT VẤN ĐỀ Để tiến hành thử nghiệm thuốc hay chế phẩm người, thiết phải có nghiên cứu khẳng định tính an tồn hiệu trước động vật thực nghiệm Đánh giá độc tính bao gồm nghiên cứu độc tính cấp, độc tính dài hạn, độc tính chỗ, độc tính sinh sản phát triển, độc tính sinh miễn dịch… Trong đó, nghiên cứu độc tính cấp nghiên cứu độc tính bán trường diễn (là loại nghiên cứu dài hạn) có vai trị quan trọng thử nghiệm lâm sàng phát triển thuốc dược liệu Viên nang cứng An Phụ Khang Plus (gọi tắt APKP) bao gồm 15 vị dược liệu Đây chế phẩm dùng để hỗ trợ điều trị u xơ tử cung, u nang buồng trứng dựa tác dụng vị dược liệu có Tác giả liên hệ: Đặng Thị Thu Hiên Trường Đại học Y Hà Nội Email: thuhien@hmu.edu.vn Ngày nhận: 22/07/2022 Ngày chấp nhận: 22/08/2022 106 thành phần.1-3 Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu khẳng định tính an tồn kết hợp thành phần dược liệu Do đó, để chứng minh kết hợp đảm bảo tính an tồn sử dụng chúng tơi tiến hành đề tài nghiên cứu với mục tiêu: Xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang cứng An Phụ Khang Plus động vật thực nghiệm II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu Thuốc nghiên cứu: Viên nang cứng APKP hàm lượng 0,69 g/viên, sản xuất Công ty dược phẩm thương mại Phương Đông Động vật nghiên cứu Chuột cống trắng chủng Wistar, khỏe mạnh, giống, trọng lượng 200 ± 20g, Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng - Hà Nội cung cấp Chuột nhắt trắng chủng Swiss, khỏe mạnh, giống, trọng lượng 20 ± 2g để nghiên cứu xác định độc tính cấp Động vật ni - TCNCYH 157 (9) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Thành phần chế phẩm nghiên cứu cho viên nang cứng Tên dược liệu Hàm lượng mg/viên Tên dược liệu Hàm lượng mg/viên Cao Trinh nữ hoàng cung 350mg Cao Củ mài đắng 20mg Cao Náng hoa trắng 100mg Cao Hương phụ 20mg Cao Tỏa dương 30mg Cao Tam lăng 20mg Cao Xuyên khung 30mg Cao Nga truật 20mg Cao Bồ quân 30mg Cao Sinh địa 10mg Cao Đương quy 20mg Cao Xích thược 10mg Cao Hồng hoa 20mg Curcumin nano 5mg Bột Tam thất 5mg ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu ăn thức ăn chuẩn, uống nước tự phịng thí nghiệm Bộ mơn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội Thuốc, hóa chất, máy móc phục vụ nghiên cứu Kit định lư­ợng enzym chất chuyển hoá máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), Bilirubin toàn phần, Albumin, Cholesterol toàn phần, Creatinin hãng Erba, định lư­ợng máy sinh hóa bán tự động Erba Ấn Độ Các dung dịch xét nghiệm máu hãng Horiba ABX, định lượng máy Horiba ABX Micros Pháp Các hóa chất xét nghiệm làm tiêu mô bệnh học đạt tiêu chuẩn thí nghiệm Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu độc tính cấp Nghiên cứu độc tính cấp tiến hành theo hướng dẫn WHO xác định LD50 theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon.4 Chuột nhắt trắng trọng lượng 20 ± 2g chia thành lô, lô 10 Cho chuột uống thuốc thử APKP với liều tăng dần (trong thể tích) để xác định liều thấp TCNCYH 157 (9) - 2022 gây chết 100% chuột liều cao không gây chết chuột (gây chết 0% chuột) Chuột nhịn ăn 12 trước uống thuốc thử, uống nước đầy đủ Theo dõi tình trạng chung (ăn uống, hoạt động thần kinh, lại, tiết…), các dấu hiệu nhiễm độc (nơn, co giật, kích động ), số chuột chết 72 đầu sau uống thuốc thử (nếu có) Nếu chuột chết, mổ chuột để đánh giá đại thể tổn thương quan Sau theo dõi tình trạng chung chuột đến hết ngày thứ sau uống thuốc Xác định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết vòng 72 đầu Nghiên cứu độc tính bán trường diễn Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của viên nang cứng An Phụ Khang Plus chuột cống trắng theo đường uống tiến hành theo hướng dẫn WHO5: Chuột đuợc chia làm lô, lô 10 con: - Lô (chứng sinh học) (n = 10): uống nước cất 10 mL/kg/ngày - Lô trị (APKP liều thấp) (n = 10): uống APKP liều 0,745 g/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dự kiến người, tính theo hệ số 6) - Lô trị (APKP liều cao) (n = 10): uống APKP liều 2,235 g/kg/ngày (gấp lần liều lô trị 1) 107 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Chuột uống nước thuốc thử kim đầu tù tuần liên tục, ngày lần vào buổi sáng Các tiêu theo dõi trước trình nghiên cứu: - Tình trạng chung, thể trọng chuột - Đánh giá chức phận tạo máu thông qua số lư­ợng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hàm l­ượng Hemoglobin, Hematocrit, số lư­ợng bạch cầu, công thức bạch cầu số lư­ợng tiểu cầu - Đánh giá chức gan thông qua định trư­ớc lúc uống thuốc, sau tuần uống thuốc, sau tuần uống thuốc - Mô bệnh học: sau tuần uống thuốc, chuột đư­ợc mổ để quan sát đại thể toàn quan Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận 30% số chuột lô Các xét nghiệm vi thể đ­ược thực Trung tâm Nghiên cứu phát sớm ung thư (do PGS.TS Lê Đình Roanh đọc kết vi thể) Xử lý số liệu lượng số chất chuyển hố máu: Bilirubin tồn phần, Albumin Cholesterol toàn phần - Đánh giá tổn thương tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzym máu: ALT, AST - Đánh giá chức thận thông qua định lượng nồng độ Creatinin huyết - Các thông số theo dõi đư­ợc kiểm tra vào Số liệu nhập xử lý phương pháp thuật toán thống kê y sinh học phần mềm Microsoft Excel Số liệu biểu ̅ ± SD Kiểm định giá trị diễn dạng X t-test Student test trước sau (Avantaprès) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p ≤ 0,05 p ≤ 0,05 p ≤ 0,01 p ≤ 0,001 Khác biệt so với lô chứng sinh học * ** *** Khác biệt so với lô mơ hình + ++ +++ III KẾT QUẢ Nghiên cứu độc tính cấp Bảng Kết nghiên cứu độc tính cấp APKP n Liều (mL/kg) Liều dùng (g/kg) Tỷ lệ chết (%) Dấu hiệu bất thường khác Lô 10 30 15,5 Không Lô 10 45 23,3 Không Lô 10 60 31,1 Không Lô 10 75 38,8 Không Lô chuột Chuột nhắt trắng uống APKP với liều có chuột chết vòng 72 sau tăng dần từ 15,5 g/kg/ngày đến 38,8 g/kg/ngày, sau uống thuốc thử, chuột ở tất cả các lô ăn uống, hoạt động tiết bình thường Khơng thấy có biểu ngộ độc chuột không uống thuốc Tiếp tục theo dõi ngày sau uống thuốc, thấy chuột hồn tồn bình thường, khơng có biểu đặc biệt Do tăng độ đậm đặc thuốc không 108 TCNCYH 157 (9) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC thể tăng thể tích cho chuột uống nên chưa xác định độc tính cấp chưa tính LD50 APKP chuột nhắt trắng theo đường uống Nghiên cứu độc tính bán trường diễn Tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột Tình trạng chung: Trong thời gian nghiên cứu, chuột lơ hoạt động bình thường, ăn uống tốt, nhanh nhẹn, mắt sáng, phân khô Sự thay đổi thể trọng chuột Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến thể trọng chuột Lô chứng Thời gian Trọng lượng (g) Lô trị % thay Trọng đổi trọng lượng (g) lượng Lô trị % thay Trọng % thay đổi trọng lượng đổi trọng lượng (g) lượng Trước uống 199,00 205,00 208,00 thuốc ± 46,77 ± 39,79 ± 20,98 Sau tuần 238,00 uống thuốc ± 46,62 p trước - sau < 0,05 Sau tuần 250,00 uống thuốc ± 55,38 p trước - sau < 0,05 249,00 ↑19,6 ± 47,71 ↑17,7 < 0,05 ± 35,84 (t-test Student) > 0,05 ↑14,4 > 0,05 ↑21,6 > 0,05 < 0,05 259,00 ↑25,6 238,00 p ± 50,65 ↑26,3 < 0,05 253,00 ± 45,47 < 0,05 Sau tuần tuần uống thuốc thử, trọng lượng chuột lô (lô chứng lô trị) tăng so với trước nghiên cứu Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Khơng có khác biệt mức độ gia tăng trọng lượng chuột lô chứng lô dùng thuốc thử (p > 0,05) Đánh giá chức tạo máu Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến số lượng hồng cầu Số l­ượng hồng cầu ( T/l ) Lô chứng Lô trị Lô trị p (t- test Student) Trước uống thuốc 8,99 ± 1,13 9,56 ± 0,90 9,18 ± 1,00 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 9,93 ± 1,19 10,59 ± 0,93 9,63 ± 0,74 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 8,91 ± 0,83 8,62 ± 1,02 8,44 ± 1,28 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian p (tr­ước - sau) Sau tuần uống thuốc p (trư­ớc - sau) TCNCYH 157 (9) - 2022 109 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến hàm lượng huyết sắc tố máu chuột Hàm lư­ợng huyết sắc tố (g/dl) Lô chứng Lô trị Lô trị p (t- test Student) Tr­ước uống thuốc 13,79 ± 1,13 14,36 ± 2,23 14,64 ± 1,28 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 14,41 ± 1,48 15,45 ± 0,96 14,37 ± 1,34 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 14,14 ± 1,46 13,21 ± 1,57 13,76 ± 2,45 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian p (trư­ớc - sau) Sau tuần uống thuốc p (tr­ước - sau) Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến Hematocrit Hematocrit (%) Lô chứng Lô trị Lô trị p (t- test Student) Tr­ước uống thuốc 46,67 ± 4,16 45,30 ± 3,67 50,34 ± 5,28 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 49,54 ± 7,13 48,92 ± 4,27 51,84 ± 4,63 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 46,50 ± 4,25 46,46 ± 6,56 49,38 ± 10,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian p (trư­ớc - sau) Sau tuần uống thuốc p (tr­ước - sau) Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến thể tích trung bình hồng cầu máu chuột Thể tích trung bình hồng cầu (fl) Lô chứng Lô trị Lô trị p (t- test Student) Tr­ước uống thuốc 53,50 ± 2,12 54,90 ± 1,73 54,80 ± 1,75 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 54,20 ± 1,87 53,60 ± 1,58 53,70 ± 2,50 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 52,30 ± 1,16 52,80 ± 4,08 53,50 ± 4,03 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian p (trư­ớc - sau) Sau tuần uống thuốc p (tr­ước - sau) Kết bảng 4, 5, cho thấy: sau APKP liều 0,745 g/kg/ngày) lô trị (uống tuần tuần uống APKP, xét nghiệm APKP liều 2,235 g/kg/ngày) khác đánh giá chức tạo máu (số lượng hồng biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh cầu, hàm lượng huyết sắc tố, Hematocrit, thể thời điểm trước sau uống thuốc thử tích trung bình hồng cầu) lơ trị (uống (p > 0,05) 110 TCNCYH 157 (9) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến số lượng bạch cầu máu chuột Số l­ượng bạch cầu (G/l) Lô chứng Lô trị Lô trị p (t- test Student) Tr­ước uống thuốc 8,61 ± 2,75 10,13 ± 2,82 8,74 ± 2,47 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 8,95 ± 2,11 9,14 ± 1,97 9,46 ± 2,21 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 9,07 ± 2,29 9,21 ± 2,29 9,14 ± 2,70 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Thời gian p (trư­ớc - sau) Sau tuần uống thuốc p (tr­ước - sau) Bảng Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến công thức bạch cầu máu chuột Công thức bạch cầu Thời gian Lô chứng Lô trị Lô trị Lympho (%) Trung tính (%) Lympho (%) Trung tính (%) Lympho (%) Trung tính (%) Tr­ước uống thuốc 81,02 ± 3,34 5,42 ± 1,02 79,01 ± 3,75 5,59 ± 1,73 78,52 ± 4,95 6,29 ± 2,17 Sau tuần uống thuốc 79,87 ± 4,60 6,12 ± 1,97 79,39 ± 4,35 5,12 ± 1,54 79,14 ± 8,14 5,32 ± 1,82 p (tr­ước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 79,35 ± 3,84 6,35 ± 1,63 78,47 ± 6,31 6,32 ± 1,40 74,92 ± 10,94 6,63 ± 2,09 p (tr­ước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Bảng 10 Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến số lượng tiểu cầu máu chuột Số l­ượng tiểu cầu (G/l) Thời gian p (t- test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị Tr­ước uống thuốc 623,30 ± 125,25 565,20 ± 83,78 657,80 ± 146,08 > 0,05 Sau tuần uống thuốc 680,30 ± 190,71 675,90 ± 207,99 620,10 ± 132,92 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 570,60 ± 141,62 502,90 ± 118,87 534,50 ± 138,48 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trư­ớc - sau) Sau tuần uống thuốc p (tr­ước - sau) TCNCYH 157 (9) - 2022 111 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết bảng 8, 10 cho thấy: sau tuần tuần uống APKP, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu lô trị lô trị khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến mức độ tổn thương tế bào gan chức gan Đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan 60 160 140 50 Hoạt độ ALT (UI/l) Hoạt độ AST (UI/l) 120 100 80 60 40 30 20 10 20 40 Trước uống thuốc Sau tuần uống thuốc Lô chứng Lô trị Sau tuần uống thuốc Trước uống thuốc Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng APKP đến hoạt độ AST (GOT) máu chuột Lô chứng Sau tuần uống thuốc Lô trị Sau tuần uống thuốc Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng APKP đến hoạt độ ALT (GPT) máu chuột Kết biểu đồ 1, cho thấy: sau tuần tuần uống APKP, hoạt độ AST, ALT máu chuột lơ trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Đánh giá chức tế bào gan Bảng 11 Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến chức gan, thận Chỉ số Albumin (g/dL) Lô (n = 10) 3,21 ± 0,35 Sau tuần ̅ ± SD) (X 3,38 ± 0,21 Sau tuần ̅ ± SD) (X p (t- test Student) Lô chứng Trước NC ̅ ± SD) (X 3,33 ± 0,30 > 0,05 Lô trị 3,45 ± 0,27 3,54 ± 0,31 3,41 ± 0,44 > 0,05 Lô trị 3,19 ± 0,45 3,28 ± 0,22 3,09 ± 0,28 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Lô chứng 1,50 ± 0,12 1,61 ± 0,16 1,52 ± 0,16 > 0,05 Lô trị 1,48 ± 0,30 1,68 ± 0,30 1,62 ± 0,39 > 0,05 Lô trị 1,30 ± 0,36 1,53 ± 0,25 1,42 ± 0,21 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Lô chứng 13,25 ± 0,25 13,45 ± 0,54 13,38 ± 0,45 > 0,05 Lô trị 13,48 ± 0,52 13,22 ± 0,50 13,41 ± 0,62 > 0,05 Lô trị 13,43 ± 0,19 13,26 ± 0,52 13,55 ± 0,55 > 0,05 p (tr­ước - sau) Cholesterol toàn phần (mmol/L) p (tr­ước - sau) Bilirubin toàn phần (mmol/L) 112 TCNCYH 157 (9) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Chỉ số Lô (n = 10) Trước NC ̅ ± SD) (X > 0,05 Sau tuần ̅ ± SD) (X p (t- test Student) > 0,05 Sau tuần ̅ ± SD) (X Lô chứng 0,83 ± 0,15 0,78 ± 0,12 0,84 ± 0,18 > 0,05 Lô trị 0,84 ± 0,15 0,76 ± 0,15 0,80 ± 0,17 > 0,05 Lô trị 0,81 ± 0,14 0,78 ± 0,15 0,79 ± 0,19 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (tr­ước - sau) Creatinine (mg/dL) p (tr­ước - sau) Kết bảng 11 cho thấy: sau tuần tuần uống APKP, xét nghiệm đánh giá chức gan (nồng độ Bilirubin toàn phần, Albumin, Cholesterol toàn phần) chức thận (nồng độ Creatinin) lô trị khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Thay đổi mô bệnh học Đại thể: Trên tất chuột thực nghiệm (lô chứng lô trị), khơng quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan tim, phổi, gan, lách, tuỵ, thận hệ thống tiêu hoá chuột Vi thể: Khơng có khác biệt cấu trúc vi thể gan, thận chuột sau tuần uống thuốc lô trị lô chứng Ở lô trị APKP liều gấp liều lâm sàng 2,235 g/kg/ngày có gây tổn thương vi thể gan chuột nặng so với lô chứng sinh học IV BÀN LUẬN Nghiên cứu độc tính cấp Nghiên cứu độc tính cấp thuốc nhằm theo dõi đánh giá tất dấu hiệu bất thường động vật thí nghiệm sau dùng thuốc tiến hành xác định LD50 tức liều gây chết 50% số chuột theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon.4 Ở liều tối đa tương đương với 38,8 g/kg (liều đặc cho chuột uống kim đầu tù) gấp 26,04 lần liều dự kiến dùng lâm sàng không gây biểu nhiễm độc TCNCYH 157 (9) - 2022 > 0,05 cấp chuột, không gây chết chuột sau 72 sau ngày uống thuốc khơng có dấu hiệu bất thường chưa thể xác định LD50 chế phẩm APKP chuột nhắt trắng theo đường uống Theo Đỗ Tất Lợi, thành phần Hồng Hoa cactamin có liều độc thỏ 20 - 75 mg/kg, mèo 80 - 85 mg/kg thể trọng.6 Nghiên cứu M A Latif năm 1979, bột Nga Truật gây độc chuột tuần tuổi gây tử vong 100% vòng ngày cho ăn 320 g/kg/ngày Thân rễ tươi cắt nhỏ sấy khô dùng liều 400 g/kg gây giảm hoạt động chuột nhắt trắng, liều 250 g/ngày dùng lâm sàng gây mệt mỏi uể oải, da xanh tái sử dụng dài ngày.7 Chiết xuất ethanol thành phần alkaloid Náng trắng có LD50 22,75 g/kg p.o chuột.8 Tuy nhiên, liều lượng dược liệu có viên nang cứng APKP thấp nhiều lần so với liều gây biểu độc tính báo cáo Các dược liệu khác theo Đỗ Tất Lợi chưa quan sát thấy độc tính.6 Như vậy, kết nghiên cứu độc tính cấp cho thấy liều dự kiến dùng người viên nang cứng APKP viên/ngày chấp nhận Nghiên cứu độc tính bán trường diễn Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus lên tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn 113 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC lựa chọn đối tượng nghiên cứu chuột cống trắng lồi dễ ni hơn, chế độ ăn tương tự số nghiên cứu tương đối ổn định Tình trạng chung thay đổi thể trọng phản ánh tình trạng sức khỏe động vật Theo báo cáo M A Latif, bột Nga Truật cho chuột non cai sữa dùng với liều 400 g/kg có tượng giảm cân nhanh chóng hai số năm chuột tử vong vòng ngày Trong nghiên cứu, chuột lô ăn uống, hoạt động bình thường, mắt sáng, lơng mượt, phân khô Cân nặng chuột lô tăng so với trước nghiên cứu Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lô trị so với lô chứng thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) Như vậy, APKP khơng ảnh hưởng xấu tới tình trạng chung mức độ thay đổi thể trọng chuột uống thuốc liên tục tuần Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến hệ thống tạo máu Để đánh giá ảnh hưởng thuốc đến chức tạo máu tiến hành xác định số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu máu chuột Ngoài ra, định lượng huyết sắc tố, thể tích trung bình hồng cầu cho biết chức hồng cầu vận chuyển khí máu Hematocrit tỉ lệ % khối hồng cầu máu toàn phần Qua nghiên cứu cho thấy, số chuột lô trị thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê so với trước dùng thuốc so với lô chứng sinh học thời điểm (p > 0,05) Theo báo cáo Fyal Younas, polysaccharid từ Đương qui có tác dụng làm tăng số lượng hồng cầu, Hemoglobin, chống lại tác nhân gây tình trạng thiếu máu.9 Điều chứng tỏ APKP khơng thể độc tính quan tạo máu Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến mức độ tổn thương tế bào gan chức gan, thận Trong thể, gan có vai trò quan trọng 114 Gan đảm nhiệm nhiều chức phức tạp quan chuyển hóa Khi đưa thuốc vào thể, thuốc độc cho gan, gây hủy hoại tế bào gan, ảnh hưởng đến chức gan Khi tổn thương hủy hoại tế bào gan, nồng độ ALT tăng cao AST chủ yếu nằm ty thể, tổn thương mức độ tế bào AST giải phóng ngồi Ngồi ra, gan có chức chuyển hóa protid, lipid, tạo mật qua đó, gan thể vai trị tổng hợp Albumin, Cholesterol tồn phần Bilirubin Kết nghiên cứu cho thấy, ALT, AST số chức gan chuột cống lơ trị khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với thời điểm trước nghiên cứu so với lô chứng thời điểm Điều chứng tỏ, APKP mức liều khơng thể độc tính gan Thận quan tiết thể Khi đưa thuốc vào thể, phần lớn thuốc thải trừ qua thận Vì vậy, thuốc gây độc làm tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn, thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận tổn thương, nồng độ Creatinin tăng sớm Ure, để đánh giá theo dõi chức thận, Creatinin máu tiêu quan trọng tin cậy Ure 10 Giải phẫu bệnh đại thể vi thể số cần thiết đánh giá độc tính bán trường diễn theo hướng dẫn WHO.5 Các mẫu bệnh phẩm gan lô gồm lơ dùng thuốc thử lơ chứng có tỉ lệ số mẫu thối hóa mức độ nhẹ/số mẫu bình thường thời điểm sau tuần uống thuốc Ở lô trị cho thấy hình ảnh tổn thương vi thể gan rõ hơn so với lô chứng sinh học Tuy nhiên thấy số sinh hóa đánh giá chức gan (AST, ALT, Albumin, Cholesterol toàn TCNCYH 157 (9) - 2022 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC phần, Bilirubin tồn phần) lại khơng có dấu hiệu bất thường tất lơ Sở dĩ có khơng phù hợp hình ảnh tổn thương vi thể số sinh hóa mức độ tổn thương tế bào gan nhẹ khu trú nên tế bào gan bình thường cịn lại có tượng hoạt động bù trừ Mặt khác, xem xét thành phần APKP thấy, nghiên cứu Peng Cao cộng năm 2018 rằng: hợp chất polysaccharid có Đương qui có tác dụng giảm thối hóa tế bào gan số lượng không bào tế bào chất chuột tiếp xúc với liều paracetamol, làm giảm rõ rệt tình trạng tổn thương gan thơng qua việc tăng nồng độ GSH ức chế trình apoptosis gan Trong ống nghiệm, polysaccharid làm tăng đáng kể tỷ lệ sống sót tế bào gan nguyên phát chuột dùng liều paracetamol Tác dụng cải thiện q trình peroxy hóa lipid stress oxy hóa, với việc ức chế q trình apoptosis.11 Thành phần sesquiterpenes có Nga Truật phân lập từ dịch chiết aceton có tác dụng bảo vệ gan Cần có nghiên cứu thời gian dài để đánh giá ảnh hưởng chế phẩm lên tổn thương tế bào gan Trên giới nghiên cứu độc tính chung phối hợp bị dược liệu có thành phần APKP chưa ghi nhận Đây dược liệu phổ biến, chúng tơi chưa tìm thấy báo cáo độc tính vị dược liệu này, tham khảo tài liệu chưa thấy đề cập tới độc tính nghiêm trọng.4,5 V KẾT LUẬN Viên nang cứng An Phụ Khang Plus khơng gây độc tính cấp khơng xác định LD50 chuột nhắt trắng Viên nang cứng An Phụ Khang Plus liều 0,745 g/kg/ngày liều cao gấp lần liều dự kiến lâm sàng (2,235 g/kg/ngày) dùng đường TCNCYH 157 (9) - 2022 uống liên tục tuần khơng ảnh hưởng đến tình trạng chung, số huyết học, sinh hóa, mơ bệnh học thận Tuy nhiên, cần có nghiên cứu sâu để đánh giá ảnh hưởng lên mô bệnh học gan chuột cống trắng TÀI LIỆU THAM KHẢO Hyun JH, Kang JI, Kim SC, et al The effects of crinum asiaticum on the apoptosis induction and the reversal of multidrug resistance in HL60/MX2 Toxicol Res 2008;24(1):29-36 Nguyen HYT, Vo BHT, Nguyen LTH, et al Extracts of crinum latifolium inhibit the cell viability of mouse lymphoma cell line EL4 and induce activation of anti-tumour activity of macrophages in vitro J Ethnopharmacol 2013;149(1):75-83 Song Y, Hu J, Wang H, et al Research on the modern clinical herbal administration rules in TCM treatment of ovarian cysts based on data mining Journal of Traditional Chinese Medical Sciences 2017;4(2):222-231 Litchfield JT, Wilcoxon F A simplified method of evaluating dose-effect experiments J Pharmacol Exp Ther 1949;96(2):99-113 WHO Working group on the safety and efficacy of herbal medicine Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 2013 Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam 8th ed Nhà xuất Y học, Hà Nội; 2015 Latif MA, Morris TR, Miah AH, Hewitt D, Ford JE Toxicity of shoti (Indian arrowroot: Curcuma zedoaria) for rats and chicks Br J Nutr 1979;41(1):57-63 Phuong NK Studies on pharmacological effects of crinum asiaticum L Journal of Medicinal Materials - Hanoi P 2003:149-152 Younas F, Aslam B, Muhammad F, et al Haematopoietic effects of Angelica sinensis root cap polysaccharides against lisinopril115 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC induced anaemia in albino rats Pharm Biol 2017;55(1):108-113 10 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương Xét nghiệm sử dụng lâm sàng Nhà xuất Y học; 2005 11 Xia JY, Fan YL, Jia DY, et al Protective effect of Angelica sinensis polysaccharide against liver injury induced by D-galactose in aging mice and its mechanisms Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi 2016;24(3):214-219 Summary STUDY ACUTE AND SUB-CHRONIC TOXICITY OF AN PHU KHANG PLUS ON EXPERIMENTAL ANIMALS The study was conducted to assess the acute toxicity on Swiss mice according to the World Health Organization Guidance, LD50 was determined by Litchfield-Wilcoxon method The subchronic toxicity of An Phu Khang Plus were studied on Wistar rats, in which rats were divided in groups: no treatment; treated with An Phu Khang Plus at the daily dose of of 0.745 g/kg per day and 2.235 g/kg per day, respectively, for weeks After administration, rats were sacrificed to collect samples for blood analysis before and at 2.4 weeks after treatment Histopathological of liver and kidney were only observed at the end of treatment The results show no symptom of acute toxicity up to a maximum dose 38.8 g/kg, LD50 of APKP has not been determined The APKP at two doses of 0.745 g/kg per day and 2.235 g/kg per day had no effect on general conditions, hematopoietic function No change in the liver and kidney functions, however, histopathological changes were seen in the liver at the high dose A subchronic study of other doses consumed should be further carried out to assess the effects of APKP on liver histology Keywords: An Phu Khang Plus, acute toxicity, sub-chonic toxicity 116 TCNCYH 157 (9) - 2022 ... viên nang cứng APKP viên/ ngày chấp nhận Nghiên cứu độc tính bán trường diễn Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus lên tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột Trong nghiên cứu độc tính bán trường. .. thể độc tính quan tạo máu Ảnh hưởng viên nang An Phụ Khang Plus đến mức độ tổn thương tế bào gan chức gan, thận Trong thể, gan có vai trị quan trọng 114 Gan đảm nhiệm nhiều chức phức tạp quan... tìm thấy báo cáo độc tính vị dược liệu này, tham khảo tài liệu chưa thấy đề cập tới độc tính nghiêm trọng.4,5 V KẾT LUẬN Viên nang cứng An Phụ Khang Plus không gây độc tính cấp khơng xác định