NGHIÊN cứu và PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH học TUYỂN CHỌN và KHẢO sát điều KIỆN NUÔI cấy DÕNG VI KHUẨN HIẾU KHÍ có KHẢ NĂNG THỦY PHÂN bã mía

B ăGIÁOăD CăVẨăĐẨOăT O TR NGăĐ IăH CăC NăTH ă VI NăNGHIểNăC UăVẨăPHÁTăTRI N CỌNGăNGH ăSINHăH C LU NăVĔNăT TăNGHI PăĐ IăH C NGÀNH CỌNGăNGH ăSINHăH C TIểNăTI N TUY NăCH NăVẨăKH OăSÁTăĐI UăKI NăNUỌIă C YăDọNGăVIăKHU NăHI UăKHệăCịăKH ăNĔNGă TH YăPHỂNăBẩăMệA CÁN B H NG D N ThS.ăVẪăVĔNăSONGăTOẨN ThS D NGăTH ăH NGăGIANG C năTh , Tháng 11/2010 SINH VIÊN TH C HI N Nguy năTh ăThanhăTrúc MSSV: 3064492 L P: DA0666T1 PH NăKụăDUY T CÁNăB ăH NGăD Nă ThS.ăVõăVĕnăSongăToƠn CÁNăB ăH ThS.ăD SINHăVIểNăTH CăHI N Nguy năTh ăThanhăTrúc NGăD N ngăTh ăH ngăGiang DUY TăC AăH IăĐ NGăB OăV ăLU NăVĔN ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầầầầ Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 CH ăT CHăH IăĐ NG L IăC MăT Để đề tài luận văn t t nghi p đ ợc hoàn thành thật t t, em xin chân thành gửi l i tri ân đến: Ths Võ Văn Song Toàn Ths D ơng Thị H ơng Giang BGĐ Vi n Nghiên cứu Phát triển Công ngh Sinh học, Tr ng Đ i học Cần Thơ đư tận tình h ng d n, truyền đ t kiến thức d y em su t th i gian học tập th c hi n luận văn t t nghi p Em xin chân thành c m ơn quỦ thầy cô đư tận tình gi ng d y cung cấp nh ng kiến thức quỦ báu đư đ ng viên, giúp đỡ em su t trình học tập Em xin chân thành c m ơn chị Nguy n Thị Xuân Dung, cán b Vi n Nghiên cứu Phát triển Công ngh Sinh học, Tr ng Đ i học Cần Thơ đư tận tình h trợ, đóng góp nh ng Ủ kiến quỦ báu su t trình làm luận văn Các anh chị cán b phịng Vi sinh vật, phòng Sinh học phân tử, phòng th c ph m đư t o điều ki n cho em th c hi n t t luận văn Chân thành c m ơn gia đình nơi đư c u mang h trợ em nhiều su t th i gian dài làm luận văn Cám ơn b n bè đư h trợ, đ ng viên cho em hoàn thành nhi m v th i gian học tập nh th i gian th c hi n đề tài Cu i cùng, em xin kính chúc quỦ thầy cô dồi sức kh e, thành công lưnh v c TịMăL C Đề tài “Tuyển chọn kh o sát điều ki n ni cấy dịng vi khu n hiếu khí có kh thuỷ phân bư mía” tiến hành xác định dịng vi khu n có kh thuỷ phân bư mía cho ho t đ thuỷ phân cao nhất, từ tiến hành t i u hố điều ki n môi tr ng nh hửơng lên kh sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n Kết qu cho thấy 12 dòng vi khu n hiếu khí đ ợc phân lập từ bư mía, có dịng vi khu n 22 có kh thuỷ phân bư mía cho ho t đ thuỷ phân cao Kết qu kh o sát cho thấy rằng, dòng vi khu n sinh tổng hợp cellulase t t điều ki n pH 5,0 7,0 nhi t đ 350C 300C lần l ợt cho dòng vi khu n 22 Dịng vi khu n cho ho t tính endoglucanase exogucanase t i u (0,0076 U/ml 0,0049 U/ml) sau 96 gi lắc (120 vịng/phút), ho t tính endoglucanse exoglucanase c a dịng vi kh n 22 đ t c c đ i sau 48 gi lắc (120 vịng /phút) v i ho t tính thu đ ợc lần l ợt 0,0268 U/ml 0,0235 U/ml Hàm l ợng protein thu đ ợc t ơng thích v i th i gian t i u Mơi tr ng có bổ sung beef extract 0,2% (w/v) 0,5% (w/v) đ ợc xem hi u qu cho s sinh tổng hợp cellulase c a dòng vi khu n 22 Từăkhố: bã mía, cellulase, beef extract, endoglucanase, exoglucanase, i M CăL C Trang PH NăKụăDUY Tă L IăC MăT TịMăL Că i M CăL C ii DANHăSÁCHăB NG v DANH SÁCH HÌNH vi CH NGăI.ăGI IăTHI Uăă CH NGăII.ăL CăKH OăTẨIăLI Uă 2.1 T ngăquanăv ăbƣămíaăvƠăcácăthƠnhăph năchínhătrongăbƣămía .3 2.1.1 Bã mía .3 2.1.2 Các thành phần bư mía 2.1.2.1 Cellulose 2.1.2.2 Hemicellulose 2.1.2.3 Lignin 2.2 CellulaseăvƠăc ăch ăthuỷăphơnăcellulose 2.3 2.2.1 Cơ chế thuỷ phân cellulose 2.2.2 Cellulase 2.2.2.1 Sơ l ợc vi sinh vật phân huỷ cellulose .8 2.2.2.2 M t s ứng d ng c a cellulase 10 nhăh ởngăc aăđi uăki nămôiătr ngălênăkh ănĕngăsinhăt ngăh păcellulase12 2.3.1 Nguồn carbon 13 2.3.2 Nguồn nitrogen .13 2.3.3 Nhi t đ nuôi cấy 14 2.3.4 pH môi tr 2.4 S ăl 2.4.1 căm tăs ăph ng 14 ngăphápănghiênăc u 15 Các ph ơng pháp vi sinh 15 ii 2.4.1.1 Ph ơng pháp pha loưng vi sinh vật .15 2.4.1.2 Ph ơng pháp đếm mật s VSV ph ơng pháp đếm s ng 15 2.4.1.3 Ph ơng pháp đo đ ng kính thuỷ phân 15 2.4.2 Các ph ơng pháp sinh hóa phân tích .15 2.4.2.1 Ph ơng pháp định l ợng cellulose 15 2.4.2.2 Ph ơng pháp đinh l ợng protein ph ơng pháp Bradford (1976) 16 2.4.2.3 Xác định ho t tính enzyme ph ơng pháp Nelson-Somogyi (1944) 16 2.5 TỊNHăHỊNHăNGHIểNăC UăTRONGăVẨăNGOẨIăN CH NGăIII.ăPH 3.1 PH NGăTI NăVẨăPH C 16 NGăPHÁPăNGHIểNăC U .19 NG TI N 19 3.1.1 Th i gian địa điểm .19 3.1.2 Nguyên li u 19 3.1.3 Thiết bị hóa chất 19 3.1.3.1 Thiết bi 19 3.1.3.2 Hoá chất .20 3.2 PH NGăPHÁPăNGHIểNăC U 3.2.1 M c đích thí nghi m .20 3.2.2 Nguyên vật li u 20 3.2.2.1 Nguồn vi khu n 20 3.2.2.2 Bã mía 20 3.2.2.3 Môi tr 3.2.3 ng nuôi cấy vi khu n .20 Ph ơng pháp thí nghi m 21 3.2.3.1 Thí nghi m 1: Kh o sát thành phần cellulose bư mía 21 3.2.3.2 Thí nghi m 2: Phân lập tuyển chọn m t s dòng vi khu n hiếu có kh sinh tổng hợp cellulase cao 22 3.2.3.3 Thí nghi m 3: Kh o sát nh h ng t ơng tác c a nhi t đ pH đến s sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n 23 iii 3.2.3.4 Thí nghi m 4: Kh o sát nh h ng c a th i gian đến q trình th y phân bư mía c a dịng vi khu n hiếu khí 24 3.2.3.5 Thí nghi m 5: Kh o sát s nh h ng c a nguồn nitơ lên q trình thuỷ phân bư mía c a vi khu n hiếu khí 24 3.2.3.6 Thí nghi m 6: Kh o sát nh h ng c a nồng đ nitơ lên s sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n 25 CH NGăIV.ăK TăQU ăVẨăTH OăLU Nă 26 4.1 Kh o sát hàm l ợng cellulose chất bư mía .26 4.2 Phân lập tuyển chọn m t s dòng vi khu n hiếu khí có kh th y phân bã mía cao 27 4.3 4.2.1 Phân lập sơ b m t s dòng vi khu n hiếu khí có kh th y phân bư mía 27 4.2.2 Tuyển chọn dịng vi khu n hiếu khí có kh th y phân bư mía m nh 29 nh h ng t ơng tác c a nhi t đ pH đến kh sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n 32 4.4 nh h ng c a th i gian lên kh sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n .34 4.5 nh h ng c a nitrogen lên kh sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n 38 4.6 nh h ng c a nồng đ beef extract lên kh sinh tổng hợp cellulase c a vi khu n 39 CH NGăV K TăLU NăVẨăĐ ăNGH ă .41 TẨIăLI UăTHAMăKH Oă iv DANHăSÁCHăB NG B ng 1: Thành phần hóa học bã mía B ng 2: Thành phần môi tr ng 21 B ng 3: Kh o sát s ng c a nguồn nitơ lên trình sinh tổng hợp cellulase nh h c a vi khu n 25 B ng 4: Kết qu phân tích hàm l ợng cellulose bư mía .26 B ng 5: Phần trăm thành phần bư mía 27 B ng Hình d ng đặc tính c a vi khu n khu n l c c a 12 dịng vi khu n hiếu khí .27 B ng 7: Đ ng trịn đ ng kính th y phân (Dhalo) c a 12 dòng vi khu n hiếu khí 30 B ng 8: B ng tóm tắt kết qu xác định ho t tính endoglucanase exoglucanase c a dòng vi khu n 22 .37 v DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Cấu trúc phân tử c a cellulose .4 Hình 2: Cấu trúc liên kết hydro bên bên ngồi chu i phân tử cellulose Hình 3: Cấu trúc phân tử c a lignin Hình 4: Sơ đồ chế th y phân cellulose c a phức h enzyme cellulase Hình 5: M t s thiết bị thí nghi m 19 Hình 6: Sơ đồ chu n bị b t bư mía 20 Hình 7: Sơ đồ xác định hàm l ợng cellulose bư mía 22 Hình 8: Hình d ng khu n l c c a vi khu n .29 Hình 9: Hình d ng vi khu n .29 Hình 10: Hình gram âm c a vi khu n 29 Hình 11 : Dịng vi khu n có ho t tính khơng có ho t tính cellulase .30 Hình 12: T ơng tác pH nhi t đ c a dòng vi khu n 32 Hình 13: T ơng tác pH nhi t đ c a dòng vi khu n 22 34 Hình 14: Ho t tính endoglucanase exoglucanase theo th i gian c a dòng vi khu n 35 Hinh 15: Ho t tính endoglucanase exoglucanase theo th i gian c a dòng vi khu n 22 35 Hình 16: Hàm l ợng protein theo th i gian c a dòng vi khu n 22 .36 Hình 17: nh h ng c a nguồn nitrogen khác lên kh sinh tổng hợp cellulase c a dòng vi khu n .38 Hình 18: nh h ng c a nồng đ beef extract lên trình sinh tổng hợp cellulase c a dòng vi khu n 22 .40 vi PH ăL C PH ăL Că1:ă PH NGăPHÁPăVIăSINH Ph ơng pháp nuôi cấy vi khu n hiếu khí Các b Ph ơng pháp pha loưng Ph ơng pháp đếm mật s vi khu n cách đếm s ng Ph ơng pháp nhu m gram Ph ơng pháp kiểm tra ho t tính cellulose đ c chu n bị môi tr PH ăL Că2:ă PH ng nuôi cấy ng kính đ ng trịn th y phân NG PHÁP SINH HÓA Ph ơng pháp phân tích cellulose Xác định hàm l ợng protein ph ơng pháp Bradford (1976) Ph ơng pháp xác định ho t tính enzyme (Nelson-Somogyi, 1944) PH ăL Că3:ă HỊNHăMINHăHO PH ăL Că4:ă K TăQU ăNGHIểNăC U PH ăL Că5:ă K TăQU ăPHỂNăTệCHăTH NGăKể vii Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT Cho vào m i ng 250 l CMC 0.5% (hoặc Avicel 0.5%) + 300 l enzyme + 250 l đ m acetate 30 phút 40oC Cho 150 l thu c thử Đồng vào Đ i chứng: lấy ng eppendorf khác, dùng enzyme đư bất ho t (đun nóng 100oC 30 phút) (b trí song song v i thí nghi m có enzyme ch a bất ho t) Xác định hàm l ợng đ ng khử sinh m u theo đ ng chu n Tính tốn kết quả: Đơn vị ho t tính enzyme 1ml enzyme đ ợc tính theo cơng thức: U= * K’ Trong đó: U: ho t tính enzyme (U/ml) X: Hàm l ợng glucose dung dịch đo T: th i gian ph n ứng (30 phút) VE: Thể tích enzyme (150 l) K’: h s pha loưng Đơn vị ho t tính riêng c a enzyme (ho t tính đặc hi u) s đơn vị ho t tính 1mg protein U/mg Chuyên ngành công nghệ sinh học Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT PH ăL Că3:ăHỊNHăMINHăHO Hình 23:ăHo tăđ ăthuỷ phơnăc aă dịngăviăkhu nă5ăởăpHă7,ă300C Hình 25:ăHo tăđ ăthuỷăphơnăc aă dịngăviăkhu nă5 v iăhƠmăl ngă nitrogen 0.5% Hình 27:ăHo tăđ ăthuỷăphơnăc aă dòngăviăkhu nă5 v iăn ngăđ ăbeefă extract 0.5% Chun ngành cơng nghệ sinh học Hình 24:ăHo tăđ ăthuỷăphơnăc aă dịngăviăkhu nă22ăởăpHă5,ă350C Hình 26:ăHo tăđ ăthuỷăphơnăc aă dịngăviăkhu nă22ăv iăhƠmăl ngă nitrogen 0.5% Hình 28:ăHo tăđ ăthuỷăphơnăc aă dịngăviăkhu nă22ăv iăn ngăđ ă beef extract 0.2% Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT PH ăL Că4:ăK TăQU THệăNGHI M 1.ăK tăqu ăthíănghi mă2 B ngă12:ăK tăqu ăkh oăsátăđ ngăkínhăđ ngătrịnăthuỷăphơnătrênăbƣămíaă c aă12ădịngăviăkhu năhi uăkhí Dịng 10 14 14c 21 22 24 25 28 Lặp lần 0 0 0 Lặp lần 0 0 B ngă13:ăK tăqu ăm tăs ăviăkhu năkh oăsátăđ Lặp lần 0 0 0 ngătrònăđ TB 4.67 0.67 2.00 0.00 0.00 1.00 0.00 0.00 5.00 2.00 0.00 0.33 ngăkínhăthuỷă phơnăbƣămíaăc aă12ădịngăviăkhu năhi uăkhí Dịng 10 14 14c 21 22 24 25 28 Lặp lần 1 15 1 Chuyên ngành công nghệ sinh học Lặp lần 0 0 14 3 Lặp lần 10 0 0 13 TB 8.33 0.33 0.00 4.00 3.33 0.33 0.33 0.67 14.00 4.33 0.33 1.67 CFU/ml 1.67 0.07 0.00 0.80 0.67 0.07 0.07 0.13 2.80 0.87 0.07 0.33 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT 2.ăK tăqu ăthíănghi mă3 B ngă14:ăKh oăsátăt ngătácăpHăvƠănhi tăđ ălênăkh ănĕngăsinhăt ngăh pă cellulaseăc aădòngăviăkhu nă5 Nhi t đ / pH 25 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 30 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 35 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 40 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 45 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 50 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 4.67 0 0 3 2.67 0 0 0 0 B ngă15:ăKh oăsátăt 6 5.33 8 7.00 5.33 5 5.33 6 5.67 0 0 7 7.67 9 8.67 8 8.00 7.00 6 6.33 0 0 0 0 0 0 4 3.33 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 11 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ngătácăpHăvƠănhi tăđ ălênăkh ănĕngăsinhăt ngăh pă cellulaseăc aădòng viăkhu nă22 Nhi t đ / pH 25 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 30 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 35 lặp lần 0 0 0 0 Chuyên ngành công nghệ sinh học 4 3.67 6 5.33 6 2 2.33 3 2.67 0 0.00 2.33 0 0 0 0 0 0 0 0 10 0 0 0 0 11 0 0 0 0 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 lặp lần lặp lần Trung bình 40 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 45 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 50 lặp lần lặp lần lặp lần Trung bình 0 0 0 0 0 0 0 Trường ĐHCT 6 6.00 3 3.67 0 0.00 0 0 5.00 4 3.67 1.00 1 4.33 0 0.00 0 0.00 0 0 0 0.00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3.ăK tăqu ăthíănghi mă4: B ng 16: s ăli uăODăhƠmăl ngăproteinădòngăviăkhu nă5 Gi s lần lặp 24 lặp l i 0.065 0.079 0.086 0.077 lặp l i 0.068 0.076 0.071 0.072 lặp l i 0.07 0.071 0.074 0.072 lặp l i 0.096 0.138 0.133 0.122 lặp l i 0.106 0.108 0.106 0.107 lặp l i 0.108 0.108 0.105 0.107 lặp l i 0.119 0.112 0.118 0.116 lặp l i 0.134 0.133 0.138 0.135 lặp l i 0.134 0.116 0.113 0.121 lặp l i 0.126 0.168 0.117 0.137 lặp l i 0.119 0.135 0.123 0.126 lặp l i 0.156 0.165 0.139 0.153 lặp l i 0.039 0.035 0.045 0.040 lặp l i 0.048 0.06 0.039 0.049 lặp l i 0.054 0.045 0.063 0.054 48 72 96 120 TB lặp OD595nm Chuyên ngành công nghệ sinh học TB OD595nm Hàm l ợng protein (µg/ml) 0.073333 28.17 0.112 47.50 0.124111 53.56 0.138667 60.83 0.047556 15.28 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT B ngă17:ăS ăli uăho tătínhăendoglucanase c aădịngăviăkhu nă5 endoglucanase Gi 24 48 72 96 120 s lần lặp lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 OD ĐC 0.113 0.123 0.118 0.114 0.114 0.108 0.124 0.119 0.115 0.172 0.182 0.16 0.109 0.108 0.112 0.115 0.124 0.118 0.114 0.105 0.119 0.123 0.113 0.116 0.166 0.2 0.168 0.114 0.108 0.107 Gi OD1 OD2 OD3 OD TB Đ ng khử (µg/ml) Ho t tính endoglucanase (U/ml) 0.114 0.121 0.118 0.124 0.117 0.111 0.125 0.118 0.118 0.179 0.205 0.174 0.104 0.105 0.112 TB đ i chứng 0.114 0.123 0.118 0.117 0.112 0.113 0.124 0.117 0.116 0.172 0.196 0.167 0.109 0.107 0.110 OD m u thật 0.282 0.135 0.133 0.138 0.141 0.14 0.138 0.15 0.159 0.241 0.201 0.242 0.172 0.106 0.113 0.131 0.131 0.133 0.139 0.162 0.15 0.157 0.143 0.165 0.224 0.193 0.315 0.163 0.111 0.108 0.129 0.136 0.143 0.153 0.158 0.143 0.2 0.144 0.17 0.249 0.205 0.277 0.167 0.109 0.122 24 0.067 0.011 0.018 0.026 0.008 48 0.026 0.042 0.032 0.033 0.013 72 0.041 0.029 0.048 0.039 0.018 96 0.066 0.004 0.111 0.060 0.034 120 0.058 0.002 0.004 0.021 0.004 0.0009 0.0015 0.0020 0.0038 0.0005 TB m u thật 0.181 0.134 0.136 0.143 0.154 0.144 0.165 0.146 0.165 0.238 0.200 0.278 0.167 0.109 0.114 Hi u TB 0.067 0.011 0.018 0.026 0.042 0.032 0.041 0.029 0.048 0.066 0.004 0.111 0.058 0.002 0.004 B ng 18: S ăli uăho tătínhăexoglucanaseăc aădịngăviăkhu nă5 Gi 24 48 72 96 exoglucanase s lần lặp lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 TB đ i chứng OD ĐC 0.128 0.124 0.138 0.11 0.112 0.119 0.138 0.132 0.13 0.133 Chuyên ngành công nghệ sinh học 0.129 0.124 0.136 0.11 0.117 0.117 0.137 0.133 0.136 0.132 0.129 0.138 0.139 0.111 0.12 0.12 0.131 0.131 0.13 0.139 0.129 0.129 0.138 0.110 0.116 0.119 0.135 0.132 0.132 0.135 OD m u thật 0.145 0.16 0.154 0.132 0.165 0.134 0.158 0.132 0.18 0.141 0.142 0.159 0.152 0.134 0.13 0.141 0.151 0.162 0.174 0.174 0.156 0.158 0.151 0.131 0.136 0.18 0.167 0.183 0.175 0.142 TB m u thật 0.148 0.159 0.152 0.132 0.144 0.152 0.159 0.159 0.176 0.152 Hi u TB 0.019 0.030 0.015 0.022 0.027 0.033 0.023 0.027 0.044 0.018 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 120 lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i2 i3 i1 i2 i3 0.138 0.132 0.114 0.108 0.111 0.139 0.138 0.109 0.106 0.116 Gi OD1 OD2 OD3 OD TB Đ ng khử (µg/ml) Ho t tính exoglucanase (U/ml) Trường ĐHCT 0.136 0.131 0.11 0.112 0.114 0.138 0.134 0.111 0.109 0.114 0.148 0.259 0.144 0.119 0.121 0.145 0.297 0.122 0.117 0.126 0.147 0.166 0.145 0.114 0.247 24 0.019 0.030 0.015 0.021 0.004 48 0.022 0.027 0.033 0.027 0.009 72 0.023 0.027 0.044 0.032 0.012 96 0.018 0.009 0.107 0.045 0.022 120 0.026 0.008 0.051 0.028 0.010 0.0005 0.0010 0.0013 0.0025 0.0011 B ng 19: S ăli uăODăhƠmăl s lần lặp lặp l i 0.29 0.277 0.297 0.288 lặp l i 0.474 0.443 0.427 0.448 lặp l i 0.429 0.408 0.427 0.421 lặp l i 0.457 0.527 0.45 0.478 lặp l i 0.481 0.451 0.491 0.474 lặp l i 0.527 0.516 0.462 0.502 lặp l i 0.439 0.45 0.473 0.454 lặp l i 0.429 0.43 0.437 0.432 lặp l i 0.403 0.405 0.393 0.400 lặp l i 0.307 0.328 0.311 0.315 lặp l i 0.352 0.362 0.344 0.353 lặp l i 0.398 0.343 0.338 0.360 lặp l i 0.323 0.303 0.307 0.311 lặp l i 0.326 0.329 0.323 0.326 lặp l i 0.334 0.318 0.326 0.326 72 96 120 TB OD595nm OD lặp Hàm l ợng protein (µg/ml) OD595nm Chuyên ngành công nghệ sinh học 0.009 0.107 0.026 0.008 0.051 ngăproteinădòngăviăkhu nă22 Gi 48 0.147 0.241 0.137 0.117 0.165 0.218 100.39 0.317 149.83 0.261 121.89 0.175 78.78 0.153 68.00 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT B ngă20:ăS ăli uăho tătínhăendoglucanase c aădịngăviăkhu nă22 endoglucanase ngày 24 48 72 96 120 s lần lặp lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 TB đ i chứng OD ĐC 0.16 0.151 0.199 0.182 0.192 0.236 0.165 0.176 0.162 0.168 0.161 0.168 0.19 0.231 0.187 0.131 0.158 0.131 0.162 0.194 0.236 0.171 0.168 0.146 0.167 0.172 0.171 0.191 0.211 0.161 Gi OD1 OD2 OD3 OD TB Đ ng khử (µg/ml) Ho t tính endoglucanase(U/ml) 0.147 0.144 0.135 0.17 0.201 0.227 0.198 0.171 0.135 0.192 0.167 0.186 0.185 0.165 0.203 24 0.100 0.091 0.113 0.091 0.059 0.146 0.151 0.155 0.171 0.196 0.233 0.178 0.172 0.148 0.176 0.167 0.175 0.189 0.202 0.184 OD m u thật 0.209 0.26 0.322 0.384 0.477 0.344 0.341 0.317 0.312 0.273 0.302 0.429 0.25 0.322 0.311 0.257 0.233 0.236 0.345 0.351 0.364 0.349 0.31 0.316 0.266 0.295 0.358 0.22 0.254 0.324 0.272 0.234 0.245 0.365 0.429 0.369 0.382 0.314 0.318 0.295 0.305 0.344 0.245 0.299 0.318 48 0.193 0.223 0.126 0.171 0.121 72 0.179 0.142 0.168 0.153 0.107 96 0.102 0.134 0.202 0.136 0.093 120 0.050 0.089 0.134 0.081 0.051 0.0065 0.0134 0.0118 0.0104 0.0056 Hi u TB TB m u thật 0.246 0.242 0.268 0.365 0.419 0.359 0.357 0.314 0.315 0.278 0.301 0.377 0.238 0.292 0.318 0.100 0.091 0.113 0.193 0.223 0.126 0.179 0.142 0.168 0.102 0.134 0.202 0.050 0.089 0.134 B ngă21: S ăli uăho tătínhăexoglucanase c aădòngăviăkhu nă22 Gi 24 48 72 96 s lần lặp lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 i2 i3 i1 ĐC 0.203 0.186 0.203 0.154 0.161 0.17 0.199 0.19 0.184 0.151 Chuyên ngành công nghệ sinh học 0.199 0.237 0.239 0.173 0.158 0.161 0.189 0.206 0.173 0.191 0.232 0.26 0.178 0.189 0.178 0.167 0.208 0.223 0.218 0.198 exoglucanase TB M u thật OD 0.211 0.243 0.265 0.228 0.296 0.268 0.207 0.252 0.254 0.172 0.344 0.336 0.166 0.316 0.4 0.166 0.33 0.341 0.199 0.337 0.338 0.206 0.344 0.391 0.192 0.319 0.345 0.180 0.324 0.313 0.324 0.34 0.258 0.339 0.317 0.307 0.311 0.406 0.364 0.335 TB OD 0.277 0.301 0.255 0.340 0.344 0.326 0.329 0.380 0.343 0.324 Hi u TB 0.066 0.074 0.048 0.168 0.179 0.160 0.130 0.174 0.151 0.144 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 120 lặp l lặp l lặp l lặp l lặp l i2 i3 i1 i2 i3 0.162 0.161 0.178 0.154 0.153 Trường ĐHCT 0.188 0.154 0.184 0.161 0.185 Gi OD1 OD2 OD3 OD TB Đ ng khử (µg/ml) Ho t tính exoglucanase (U/ml) 0.151 0.183 0.172 0.165 0.175 0.167 0.166 0.178 0.160 0.171 0.304 0.29 0.246 0.229 0.23 0.322 0.29 0.247 0.267 0.223 0.315 0.261 0.263 0.277 0.262 24 0.066 0.074 0.048 0.045 0.022 48 0.168 0.179 0.160 0.151 0.105 72 0.130 0.174 0.151 0.134 0.092 96 0.144 0.147 0.114 0.117 0.079 120 0.074 0.098 0.067 0.062 0.036 0.0025 0.0117 0.0102 0.0087 0.0039 0.314 0.280 0.252 0.258 0.238 0.147 0.114 0.074 0.098 0.067 4.ăK tăqu ăthíănghi mă5: B ngă22:ăK tăqu ăkh oăsátăcácăngu n nit ălênăkh ăănĕngăthuỷăphơnăbƣămíaă c aădịngăviăkhu nădịngă5 Nguồn nitơ Đ ng kính thuỷ phân (mm) Giá trị TB Beef extract 6 6 Peptone 0 0.666667 NH4NO3 0 0 NH4H2PO4 0 0 (NH4)2SO4 0 0 urea 0 0.333333 B ngă23:ăK tăqu ăkh oăsátăcácăngu nănit ălênăkh ăănĕngăthuỷăphơnăbƣămíaă c aădịngăviăkhu nădịngă22 Nguồn nitơ Đ ng kính thuỷ phân (mm) Giá trị TB Beef extract 4 4 Peptone 1 1.33333 NH4NO3 0 0.33333 NH4H2PO4 0 0 (NH4)2SO4 0 0 urea 1 1.33333 Chuyên ngành công nghệ sinh học Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT 5.ăK tăqu ăthíănghi mă6: B ngă24:ăK tăqu ăkh oăsátăcácăngu nănit ălênăkh ăănĕngăthuỷăphơnăbã mía c aădòngăviăkhu nădòngă5 Nồng đ beef extract (%) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Đ 0 2 5 ng kính thuỷ phân (mm) 0 4 5 0 4 4 Giá trị TB 0 1.666667 6.666667 3.333333 4.333333 4.666667 B ngă25:ăK tăqu ăkh oăsátăcácăngu nănit ălênăkh ăănĕngăthuỷăphơnăbƣămíaă c aădịngăviăkhu nădịngă22 Nồng đ beef extract (%) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Chuyên ngành công nghệ sinh học Đ 14 16 14 13 ng kính thuỷ phân (mm) 14 16 12 14 12 5 14 14 12 14 14 5 Giá trị TB 14 15.33333 12.66667 13.66667 11.66667 5.333333 5.333333 7.666667 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT PH ăL Că5:ăPHỂNăTệCHăTH NGăKể 1.ăTh ngăkêăthíănghi mă2:ăTuy năch nădịngăviăkhu năcóăkh ănĕngăthuỷăphơnăbƣă mía B ngă26:ăTh ngăkêăđ ngăkínhăđ ngătrịnăthuỷăphơnăc aă12ădịngăviăkhu nă hi uăkhí B ngă27:ăTh ngăkêăm tă s ăviăkhu n c aă12ădịngăviăkhu năhi uăkhí 2.Th ngăk ăthíănghi mă3:ăT đ ngătácăpHăvƠănhi tăđ ăc a 2ădịngăviăkhu năhi uăkhíă căch n Chun ngành cơng nghệ sinh học Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 B ngă28:ăTh ngăkêăt B ngă29:ăTh ngăkêăt Chuyên ngành công nghệ sinh học Trường ĐHCT ngătácăpHăvƠănhi tăđ ăc aădòngăviăkhu nă5 ngătácăpHăvƠănhi tăđ ădòngăviăkhu nă22 Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT 3.ăTh ngăkêăthíănghi mă4:ă nhăh ởngăc aăth iăgianălênăkh ănĕngăsinhăt ngăh pă cellulaseăc aăviăkhu n B ngă30:ăTh ngăkêăkhácăbi tăhƠmăl ngăprotein,ăho tătínhăendoglucanseăvƠă exoglucanaseăheoăth iăgianăc aădịngăviăkhu nă5 B ngă31:ăTh ngăkêăkhácăbi tăho tătínhăhƠmăl ngăprotein,ăendoglucanaseăvƠăă exoglucanaseătheoăth iăgianăc aădịngăviăkhu nă22 Chun ngành cơng nghệ sinh học Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT 4.ăTh ngăkêăthíănghi mă5:ăKh oăsátă nhăh ởngăc aăcácăngu nănit ălênăkh ănĕngă sinhăcellulaseăc aăviăkhu n B ngă32:ăTh ngăkêăkhácăbi tăc aăcácăngu nănit ă- dòngăviăkhu nă5 B ngă33:ăTh ngăkêăkhácăbi tăc aăcácăngu nănit ă- dòng vi khu nă22 Chú thích: 1: Beef extract 2: Peptone 3: NH4NO3 Chuyên ngành công nghệ sinh học 4: NH4H2PO4 5: (NH4)2SO4 6: Urea Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010 Trường ĐHCT 5.ăTh ngăkêăthíănghi mă6:ă nhăh ởngăc aăn ngăđ ăbeefăextractălênăkh ănĕngăthuỷă phơnăc aăviăkhu n B ngă34:ăTh ngăkêăkhácăbi tăn ngăđ ăbeefăextractăậ dòngăviăkhu nă5 B ngă35:ăTh ngăkêăkhácăbi tăn ngăđ ăbeefăextractă- dòngăviăkhu nă22 Chuyên ngành công nghệ sinh học Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học ... ă dòngă vi? ? khu n hi uă khí? ? có? ? kh ă nĕngă th yă phân bã mía cao 4.2.1 Phân lập sơ số dịng vi khuẩn hiếu khí có khả thủy phân bã mía 12 dịng vi khu n hiếu khí đ ợc phân lập từ m u bư mía c a... Hìnhă10:ăHìnhăGram? ?vi? ?khu n Hìnhă9:ăHìnhăd ng? ?vi? ?khu n 4.2.2 Tuyển chọn dịng vi khuẩn hiếu khí có khả thủy phân bã mía mạnh M i hai dịng vi khu n hiếu khí đ ợc ni cấy mơi tr mía 0,5%, ng agar... nh : th i gian nuôi cấy, t c đ lắc s c khí, mật s vi sinh vật đ ợc ch ng vào ban đầu Chuyên ngành công nghệ sinh học 14 Vi? ??n NC & PT Công Nghệ Sinh Học Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 32 – 2010