LUẬN VĂN ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CHẾ PHẨM THỰC KHUẨN THỂ PHÒNG BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA QUY MÔ IN VITRO VÀ IN VIVO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KỸ THUẬT HOÁ HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC
CÁ TRA BỆNH GAN THẬN MỦ Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus ): cá da trơn, nước ngọt, phổ biến ĐBSCL Sản phẩm xuất quan trọng Dấu hiệu bệnh lý gan thận mủ: da sậm màu, bơi lội lờ đờ, xoang bụng có dịch vàng, gan thận nhạt màu, xuất đốm trắng VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri Thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm Hình que Di động yếu Không sinh bào tử Yếm khí tùy tiện XÁC ĐỊNH MẬT ĐỘ THỰC KHUẨN THỂ TRONG CHẾ PHẨM Stock thực khuẩn thể Dịch vi khuẩn Ống TSA Đĩa chứa LB Ủ Đếm số đốm tan PLAQUE ASSAY ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM THỰC KHUẨN THỂ IN VITRO • • • • MOI 0.02 MOI 0.2 MOI Đối chứng Vi khuẩn E.ictaluri Nuôi lắc Cấy chuyền Bổ sung chế phẩm Đo OD600 ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM THỰC KHUẨN THỂ IN VIVO • 260 cá tra (10g/con) chia làm 21 nghiệm thức (x3) • 20 con/bể - Sục khí liên tục • 20 mL/kg • Đạt mật độ thực khuẩn xấp xỉ 10 , 10 , 10 PFU /g thức ăn • Phage bất hoạt 10 PFU /g • Vi khuẩn: 10 , 10 , 10 , 10 , 10 CFU/ ml • Phản ứng PCR cặp mồi EiFd-1 EiRs • Trọng lượng phân tử DNA E ictaluri cần phát 407 bp 1 Nhiệt độ pH bể cá sau 14 ngày cảm nhiễm Nghiệm thức Nhiệt độ pH Sáng Chiều Sáng Chiều Đối chứng 23.8 ± 0.9 25.1 ±0.8 6.9 ± 0.4 6.9 ± 0.3 Phage 10 24.1 ± 0.7 25.6 ± 0.8 6.8 ± 0.3 6.8 ± 0.2 Phage 10 24.2 ± 0.6 25.2 ± 0.6 6.8 ± 0.3 6.8 ± 0.3 Phage 10 24.2 ± 0.6 25.8 ± 0.7 6.8 ± 0.3 6.8 ± 0.3 Phage bất hoạt 24.3 ± 0.6 25.3 ± 0.8 6.9 ± 0.3 6.9 ± 0.3 Dấu hiệu bệnh lý cá cảm nhiễm Mật độ cảm nhiễm (CFU/mL) Phage 10 (PFU/g) 10 10 10 10 10 33.3 ± 2.9 40.0 ± 5.0 aA abA 48.8 ± 2.9 56.7 ± 2.9 bcA cAB 71.6 ± 2.9 dB Phage 10 (PFU/g) 31.7 ± 2.9 36.7 ± 2.9 abA 45.5 ± 5.0 55.5 ± 5.0 aA bcA cdAB 65.5 ± 5.0 dB Phage 10 (PFU/g) 30.0 ± 5.0 36.7 ± 2.9 43.3 ± 2.9 aA abA abcA 48.8 ± 7.6 bcA 51.7 ± 5.8 cA Phage BH (PFU/g) 36.7 ± 2.9 45.5 ± 5.0 aA abA 50.0 ± 5.0 bcA cdB 63.3 ± 5.8 75.0 ± 5.0 dB ... CÁ TRA BỆNH GAN THẬN MỦ Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus ): cá da trơn, nước ngọt, phổ biến ĐBSCL Sản phẩm xuất quan trọng Dấu hiệu bệnh lý gan thận mủ: da sậm màu, bơi... MẬT ĐỘ THỰC KHUẨN THỂ TRONG CHẾ PHẨM Stock thực khuẩn thể Dịch vi khuẩn Ống TSA Đĩa chứa LB Ủ Đếm số đốm tan PLAQUE ASSAY ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM THỰC KHUẨN THỂ IN VITRO • • • • MOI 0.02... MOI 0.02 MOI 0.2 MOI Đối chứng Vi khuẩn E.ictaluri Nuôi lắc Cấy chuyền Bổ sung chế phẩm Đo OD600 ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA CHẾ PHẨM THỰC KHUẨN THỂ IN VIVO • 260 cá tra (10g/con) chia làm 21 nghiệm