NGUYỄN THỊ tú LINH xây DỰNG và THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ASTRAGALOSIDE IV TRONG HOÀNG kỳ BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ TÚ LINH XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ASTRAGALOSIDE IV TRONG HỒNG KỲ BẰNG HPTLC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ TÚ LINH 1701330 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ASTRAGALOSIDE IV TRONG HỒNG KỲ BẰNG HPTLC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Lâm Hồng ThS Nguyễn Mai Hương Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Lâm Hồng ThS Nguyễn Mai Hương, giảng viên môn Hóa phân tích – Độc chất, trường Đại học Dược Hà Nội, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ, dành nhiều tâm huyết truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho em suốt q trình thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy mơn Hóa phân tích – Độc chất, trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian em làm thực nghiệm môn Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt kiến thức giúp đỡ em suốt hành trình năm học trường Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè bên cạnh động viên, ủng hộ em để em vững bước, tự tin đường chọn Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Tú Linh MỤC LỤC Lời cảm ơn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Hoàng Kỳ 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Đặc điểm vị dược liệu Hoàng Kỳ 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.6 Chế biến 1.1.7 Tính vị, quy kinh 1.1.8 Tác dụng dược lý 1.1.9 Công năng, công dụng 1.2 Chất Astragaloside IV 1.2.1 Tính chất vật lí 1.2.2 Tính chất hóa học 1.2.3 Tác dụng dược lí 1.3 Tình hình nghiên cứu cần thiết tiến hành nghiên cứu 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 1.3.3 Sự cần thiết tiến hành nghiên cứu 10 1.4 HPTLC 10 1.4.1.Kỹ thuật HPTLC 11 1.4.2 Một số ưu điểm phương pháp HPTLC 12 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 13 2.1.1 Nguyên vật liệu 13 2.1.2 Thiết bị 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Chuẩn bị mẫu 14 2.3.2 Xác định điều kiện sắc ký 15 2.3.3 Thẩm định phương pháp 15 2.3.4 Xác định hàm lượng AS IV rễ Hoàng Kỳ 16 2.3.5 Xử lí số liệu 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 17 3.1 Khảo sát, lựa chọn điều kiện sắc ký 17 3.1.1 Lựa chọn điều kiện pha động 17 3.1.2 Lựa chọn bước sóng phát 18 3.1.3 Khảo sát phun/nhúng mỏng 19 3.2 Lựa chọn phương pháp xử lí mẫu 21 3.2.1 Khảo sát quy trình xử lí mẫu 21 3.2.2 Khảo sát nồng độ định lượng 23 3.3 Kết xây dựng phương pháp 23 3.3.1 Xử lí mẫu 23 3.3.2 Điều kiện sắc kí 23 3.4 Thẩm định phương pháp 24 3.4.1 Độ phù hợp hệ thống 24 3.4.2 Độ đặc hiệu 25 3.4.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 26 3.4.4 Khoảng tuyến tính 27 3.4.5 Độ lặp lại 28 3.4.6 Độ 29 3.5 Định lượng mẫu rễ Hoàng Kỳ thị trường 30 3.5.1 Xác định hàm ẩm mẫu dược liệu 30 3.5.2 Xác định hàm lượng AS IV số mẫu dược liệu Hoàng Kỳ lưu hành thị trường 30 3.6 Bàn luận 32 3.6.1 Phương pháp nghiên cứu 32 3.6.2 Điều kiện sắc kí 33 3.6.3 Xử lí mẫu 34 3.6.4 Thẩm định phương pháp 34 3.6.5 Ứng dụng phương pháp phân tích mẫu thị trường 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích thống (Assosiation of Official Analytical Chemists) AS IV Astragaloside IV CHCl3 Cloroform DAD Detector mảng diod (Diode Array Detector) DĐVN Dược điển Việt Nam ELSD Detector tán xạ bay (Evaporative light scattering detector) EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol H2 O Nước HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (High Performance Thin Layer Chromatography) LC - MS Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography–mass spectrometry) MeOH Methanol RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SKĐ Sắc ký đồ STT Số thứ tự PAD Pulsed amperometric detection TB Trung bình TL Tài liệu TLC Thin Layer Chromatography TLTK Tài liệu tham khảo UV Tử ngoại (Ultraviolet ) DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng………………………………………………………………………….Trang Bảng 1 Các phương pháp định lượng AS IV HPTLC Bảng Đặc điểm số phương pháp định tính AS IV Hồng Kỳ TLC HPTLC 10 Bảng Diện tích pic AS IV tiến hành phun nhúng mỏng (AU) 20 Bảng Kết thẩm định độ phù hợp hệ thống phương pháp 24 Bảng 3 Giá trị S/N nồng độ chuẩn AS IV pha loãng 26 Bảng Nồng độ diện tích pic AS IV 28 Bảng Kết thẩm định độ lặp lại 29 Bảng Kết thẩm định độ 29 Bảng Kết xác định hàm ẩm mẫu rễ dược liệu Hoàng Kỳ 30 Bảng Kết định lượng AS IV số mẫu Hoàng Kỳ 31 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Tên hình vẽ, sơ đồ, đồ thị .Trang Hình 1 Hoàng Kỳ - Astragalus membranaceus Hình Rễ Hồng Kỳ Hình Cơng thức cấu tạo số saponin Hoàng Kỳ Hình Cơng thức cấu tạo số flavonoid Hồng Kỳ Hình Công thức cấu tạo AS IV Hình Các phận máy HPTLC 12 Hình Chuẩn AS IV EP 13 Hình Kết khảo sát hệ pha động (1), (2), (3) (4) 17 Hình Kết khảo sát tỉ lệ thành phần pha động hệ (2) 18 Hình 3 Hình ảnh vết AS IV trước dẫn xuất 254 nm sau dẫn xuất ánh sáng nhìn thấy 366 nm 19 Hình Kết khảo sát bước sóng phát 366 nm 19 Hình Hình ảnh vết AS IV phun thuốc thử nhúng vào thuốc thử 20 Hình Sơ đồ quy trình xử lí mẫu theo DĐVN V theo EP 10.0 21 Hình Hình ảnh sắc kí xử lí mẫu theo DĐVN V theo EP 10.0 22 Hình SKĐ mẫu (theo DĐVN V) mẫu (theo EP 10.0) 22 Hình Sắc ký đồ dung dịch phân giải 24 Hình 10 Sắc ký đồ dung dịch trắng (Tr), chuẩn (C), thử (T), thử thêm chuẩn (t+c) 25 Hình 11 Hình ảnh quét phổ chống phổ mẫu thử với mẫu chuẩn 26 Hình 12 SKĐ mẫu chuẩn AS IV nồng độ 19,96 ppm 27 Hình 13 SKĐ mẫu chuẩn AS IV nồng độ 9,98 ppm 27 Hình 14 Biểu đồ mối tương quan nồng độ diện tích pic 28 Hình 15 Hình ảnh sắc ký mẫu rễ dược liệu số 31 Hình 16 Hình ảnh sắc ký mẫu rễ dược liệu số 32 Hình 17 Hình ảnh sắc ký mẫu dược liệu số 32 Hình 18 Hình ảnh sắc kí mẫu cao Hồng Kỳ 32 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong vài thập kỷ qua, hợp chất từ nguồn tự nhiên trở nên quan trọng ngày sử dụng phổ biến đa dạng hóa học tính an toàn sinh học Điều dẫn đến gia tăng cao nhu cầu thảo dược, đồng thời kéo theo cần phải đảm bảo chất lượng, an toàn hiệu loại dược liệu thuốc từ thảo dược Tuy nhiên, chất lượng dược liệu gặp nhiều vấn đề bị giả mạo, nhầm lẫn, khơng có hoạt chất hàm lượng thấp, việc kiểm tra chất lượng dược liệu khó khăn thiếu chất chuẩn mẫu phức tạp Hoàng Kỳ vị thuốc dược liệu sử dụng phổ biến, với nhiều tác dụng tim mạch, thận, gan, có tác dụng chống viêm, kháng khuẩn, chống oxy hóa, chống tăng đường huyết [5], [16] Ngày nay, Hoàng Kỳ xuất nhiều thị trường dạng chế phẩm cao, viên hoàn, trà uống,… với mục đích chủ yếu bổ khí dưỡng huyết, dùng mệt mỏi, hay bị nhầm lẫn với Hồng Kỳ Astragaloside IV có Hồng Kỳ , saponin với nhiều tác dụng chống viêm, chống ung thư đóng vai trị chất điểm “marker” kiểm nghiệm Hoàng Kỳ [13], [40] Sự có mặt hàm lượng Astragaloside IV tiêu đánh giá chất lượng Hoàng Kỳ với giới hạn hàm lượng cho phép (theo DĐVN V 0,04%), ngồi cịn dùng để phân biệt Hoàng Kỳ Hồng Kỳ Các phương pháp định lượng Astragaloside IV Hoàng Kỳ bao gồm phương pháp HPLC [2], [10], [14], [21], [38], [42] HPTLC [28], [29], [41] Phương pháp HPLC với ưu điểm độ nhạy, độ chọn lọc cao, nhiên Astragaloside IV hấp thụ bước sóng ngắn, không phát băng detector DAD, mà phải sử dụng detector ELSD, MS, PAD không phổ biến đắt Trong đó, tạo dẫn xuất đáp ứng UV định lượng chất số ưu điểm phương pháp HPTLC cách phun thuốc thử màu giúp cho trình đơn giản hơn, đồng thời phương pháp HPTLC cịn giúp tiết kiệm chi phí thời gian định lượng nhiều mẫu lúc Tại Việt Nam chưa có cơng bố phương pháp định lượng Astragaloside IV HPTLC Do vậy, khóa luận “Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Astragaloside IV Hoàng Kỳ HPTLC” thực nghiên cứu với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng astragaloside IV Hoàng Kỳ HPTLC Bước đầu ứng dụng định lượng Astragaloside IV số mẫu dược liệu thị trường 3.6.3 Xử lí mẫu Phương pháp xử lí mẫu theo DĐVN V lựa chọn để chiết AS IV đem định lượng Quy trình xử lí mẫu sử dụng phương pháp chiết siêu âm Nhiều nghiên cứu cho thấy siêu âm có khả phá vỡ màng tế bào nguyên liệu, giúp dung môi xâm nhập vào tế bào dễ Bên cạnh đó, siêu âm cịn có tác dụng khuấy trộn mạnh dung môi, gia tăng tiếp xúc dung môi với chất cần chiết cải thiện hiệu suất chiết đáng kể [33] Ở số TL định lượng AS IV [10], [29], [41] sử dụng phương pháp chiết hồi lưu gây thời gian phức tạp hóa quy trình Kỹ thuật chiết siêu âm chiết AS IV với hiệu suất cao nhiều dược điển sử dụng, phương pháp chiết đơn giản, tiết kiệm thời gian dung môi Do AS IV cấu trúc số dạng astragaloside khác, nên số điều kiện dẫn đến chuyển hóa thành phần AS IV NH3 10% dùng với mục đích kiềm hóa, loại bỏ nhóm acetyl, chuyển dạng saponin Astragaloside I, Isoastragaloside I, Astragaloside II, Acetylastragaloside I thành AS IV [9], [11], [24], làm tăng lượng AS IV định lượng có mẫu dược liệu Các TL [2], [14], [29], [41] sử dụng MeOH, n-butanol bão hịa quy trình chiết AS IV AS IV dễ tan dung môi MeOH, đó, MeOH chọn làm dung mơi chiết dung mơi pha lỗng [31] N- butanol dung mơi hịa tan tương đối chọn lọc saponin có mạch đường từ ngắn tới trung bình nên thường dùng để tinh chế saponin cách phân bố với nước [1], [25] Do vậy, bước chiết phân bố lỏnglỏng với n-butanol nhằm lấy saponin loại bớt tạp AS IV tan nước [13], [26] nên lắc với nước loại tạp phân cực polysaccharide Dù vậy, quy trình xử lí mẫu chọn khơng có bước loại tạp nước, việc định lượng không bị ảnh hưởng nhiều yếu tố (do polysaccharide vết AS IV AS IV phân tách hoàn toàn khỏi vết khác) Cô cách thủy n-butanol để thu cắn chiết Q trình có nhiệt tác động, nhiên, AS IV bền với nhiệt không bị ảnh hưởng q trình Đồng thời, nhiệt cịn yếu tố thúc đẩy q trình deacetyl hóa, giúp chuyển astragaloside khác AS IV [11] So với quy trình xử lí mẫu EP 10.0, quy trình xử lí mẫu chọn đơn giản hơn, tiết kiệm thời gian, dung môi hơn, độ lặp đạt tốt hơn, hiệu suất chiết AS IV cao đảm bảo phương pháp xây dựng đạt độ lặp, độ 3.6.4 Thẩm định phương pháp Sau xây dựng quy trình phân tích, phương pháp tiến hành thẩm định 34 theo quy định AOAC 2016 Với việc áp dụng quy trình xử lí mẫu chạy điều kiện sắc ký mục 3.3, kết cho thấy việc áp dụng phương pháp đối tượng mẫu rễ Hồng Kỳ mua từ Lãn Ơng, Hồn Kiếm, Hà Nội cho kết độ lặp độ thu hồi đạt theo tiêu chuẩn AOAC 2016 3.6.5 Ứng dụng phương pháp phân tích mẫu thị trường Phương pháp tiến hành phân tích thêm số mẫu rễ Hoàng Kỳ khác thị trường, kết cho thấy mẫu dược liệu số đạt yêu cầu hàm lượng AS IV, mẫu dược liệu số không đạt hàm lượng AS IV theo quy định DĐVN V, mẫu dược liệu số không vết AS IV, nghi ngờ khơng phải dược liệu Hồng Kỳ, dược liệu Hồng Kỳ, cần phân tích thêm tiêu khác vi phẫu bột Một mẫu cao khơng có vết AS IV nguồn nguyên liệu đầu vào bị nhầm lẫn, q trình chiết cao tạo ảnh hưởng, lựa chọn chiết cao nước, AS IV tan nước [13], [26] Có thể áp dụng phương pháp xây dựng để kiểm tra chất lượng nguồn nguyên liệu đầu vào, tối ưu hóa trình chiết cao cho hiệu suất hàm lượng AS IV ổn định để làm cao định chuẩn Tuy nhiên, khóa luận cịn chưa khảo sát mẫu Hồng Kỳ chế để đánh giá hàm lượng AS IV Hoàng Kỳ chế loại sử dụng để uống 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Trên sở kết thực nghiệm báo tham khảo, tiến hành khảo sát trình định lượng AS IV Hoàng Kỳ phương pháp HPTLC thu kết sau: Điều kiện sắc kí - Bản mỏng HPTLC glass plate silica gel 60 F 254 20x10 cm - Dung dịch phân giải chứa AS IV nồng độ 100% AS III nồng độ lớn nồng độ mẫu thử - Thể tích tiêm mẫu: 10 µl, độ rộng band mm, vết tiêm cách mép mm - Bão hòa 20 phút điều chỉnh hàm ẩm buồng bão hòa ~40% - Khoảng cách dung môi chạy 80 mm - Nhúng mỏng vào thuốc thử màu H2SO4 10%/EtOH (tt/tt), sấy 105°C/5 phút - Định lượng bước sóng 366 nm Quy trình xử lí mẫu Quy trình xử lí mẫu theo DĐVN V lựa chọn tiến hành xây dựng phương pháp định lượng AS IV Hồng Kỳ HPTLC: Cân xác khoảng g bột dược liệu vào ống ly tâm Thêm 30 ml MeOH, siêu âm 30 phút Ly tâm 2500 r/min, phút (Cắn + 15 ml MeOH, ly tâm 2500 r/min, phút) x lần Hút lấy dịch Gộp dịch MeOH, cô cắn Thêm 10 ml NH3 10% vào cắn, siêu âm phút Chuyển sang bình gạn, chiết với 20, 10, 10, 10 ml n-butanol bão hịa Gộp dịch n-butanol, cắn, hịa tan MeOH theo hệ số pha lỗng, lọc 0,45 µm 36 Thẩm định phương pháp theo AOAC 2016 Kết thẩm định: - Phương pháp có độ đặc hiệu tốt với AS IV - Có tương quan tuyến tính nồng độ với diện tích pic khoảng nồng độ 19,98 – 598,8 ppm - LOQ = 199,6 ng/vết, LOD < 99,8 ng/vết - Phương pháp có độ phù hợp hệ thống đáp ứng yêu cầu AOAC 2016 - Phương pháp có độ lặp lại tốt đáp ứng yêu cầu AOAC 2016 - Phương pháp có độ thu hồi tốt đáp ứng yêu cầu AOAC 2016 Định lượng số mẫu rễ Hoàng Kỳ thị trường Nghiên cứu định lượng AS IV số mẫu rễ Hoàng Kỳ thị trường với kết có mẫu đạt hàm lượng (0,0658%), mẫu khơng đạt (0,0308%) mẫu khơng có AS IV, nghi ngờ nhầm lẫn Hoàng Kỳ Hồng Kỳ Mẫu cao Hồng Kỳ qua khảo sát khơng thấy có AS IV Đề xuất Mở rộng ứng dụng phương pháp, thẩm định phương pháp cao để ứng dụng rộng từ nguồn nguyên liệu Hoàng Kỳ đến bán thành phẩm, thành phẩm Trong trình sản xuất thành phẩm cao, hoạt chất AS IV bị nhiều nguyên nhân, như: nguyên liệu đầu vào (Hoàng Kỳ chất lượng, Hoàng Kỳ giả mạo…), dung môi chiết,… 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y Tế (2018), Dược liệu học, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 205-209 Bộ Y Tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 1188- 1189 Bộ Y Tế (2012), Hóa phân tích II, NXB Y học Hà Nội, tr 205-212 Bộ Y Tế (2002), Dược cổ truyền, NXB Y học Hà Nội, tr 228 Viện Dược Liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 946-950 Tiếng Anh AOAC Oficial Method of Analysis (2016), "Appendix F: Guidelines for standard method performance requirement" 10 11 12 13 14 15 16 Bian YY Li P (2008), "Studies on chemical constituent of Astragalus membranceus (Fishc.) Bge var mongholicus (Bge.) Hsiao", J Chin Pharm, 41(16), pp 1217-1221 Chan WS Durairajan SS, Lu JH (2009), "Neuroprotective effects of Astragaloside IV in 6-hydroxydopamine-treated primary nigral cell culture", Neurochem Int, 55(6), pp 414-422 Chu Chu, Liu E Hu, et al (2014), "Transformation of astragalosides from Radix Astragali under acidic, neutral, and alkaline extraction conditions monitored by LC-ESI-TOF/MS", Chinese Journal of Natural Medicines, 12(4), pp 314-320 Convention The United States Pharmacopoeial (2021), The United Stated Pharmacopoeia 43, The USA Dai Y., Wang D., et al (2020), "Quality Markers for Astragali Radix and Its Products Based on Process Analysis", Front Pharmacol, 11, pp 554-777 Department of Health (2005), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards E.Ren (2013), "Pharmacological effects of Astragaloside IV: a literature review", Journal of Traditional Chinese Medicine, 33(3), pp 414-416 Europe Council Of (2019), European pharmacopoeia 10.0, European Directorate for the Quality of Medicine & HealthCare of the Council of Europe (EDQM), France, pp 1325-1326 Fried Joseph Sherma & Bernard (2005), Handbook of Thin-Layer Chromatography, CRC Press Fu J., Wang Z., et al (2014), "Review of the botanical characteristics, phytochemistry, and pharmacology of Astragalus membranaceus (Huangqi)", Phytother Res, 28(9), pp 1275-1283 17 H.Wagner (2011), Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines, Springer, pp 83-98 18 He C S., Liu, Y C., Xu, Z P., Dai, P C., Chen, X W., & Jin, D H (2016), "Astragaloside IV enhances cisplatin chemosensitivity in non-small cell lung 19 cancer cells through inhibition of B7-H3", Cellular Physiology and Biochemistry, 40, pp 1221–1229 Hu JY Han J, Chu ZG (2009), "Astragaloside IV attenuates hypoxia-induced cardiomyocyte damage in rats by upregulating superoxide dismutase-1 levels", Clin Exp Pharmacol Physiol, 36(4), pp 351-357 20 K Sonia (2017), "HPTLC Method Development and Validation: An Overview", Journal of Pharmaceutical sciences and Research, 9(5), pp 652-657 21 Kwon H J., Park Y D (2012), "Determination of astragalin and astragaloside content in Radix Astragali using high-performance liquid chromatography coupled with pulsed amperometric detection", J Chromatogr A, 1232, pp 212- 22 23 24 25 26 27 28 29 Li X., Qu L., et al (2014), "A review of recent research progress on the astragalus genus", Molecules, 19(11), pp 18850-80 M Jiangwei (2011), "Aqueous extract of Astragalus mongholicus ameliorates high cholesterol diet induced oxidative injury in experimental rats models", J Med Plant Res, 5(5), pp 855-858 Mei X., Wang Y., et al (2020), "The chemical transformations for Radix Astragali via different alkaline wash conditions by quantitative and qualitative analyses", J Pharm Biomed Anal, 185, pp 113-164 Monika (2008), Thin Layer Chromatography in Phytochemistry, CRC Press Qing L S., Peng S L., et al (2017), "Astragalosidic Acid: A New WaterSoluble Derivative of Astragaloside IV Prepared Using Remarkably Simple TEMPO-Mediated Oxidation", Molecules, 22(8) Ryu (2008), "Astragali Radix elicits anti-inflamation via activation of MKP-1, concomitant with attenuation of p38 and Erk", J Ethnopharmacol, 115(12), pp 184-193 Shawky E., Selim D A (2017), "Evaluation of the effect of extraction solvent and organ selection on the chemical profile of Astragalus spinosus using HPTLC- multivariate image analysis", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 1061-1062, pp 134-138 Shi Yun, Ji Jing, et al (2020), "Simultaneous quantification of two active compounds in raw and honey-processed Radix Astragali by high-performance thin-layer chromatography", JPC – Journal of Planar Chromatography – Modern TLC, 33(3), pp 321-326 30 Srivastava M (2011), High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC), Springer 31 Tan Y Q., Chen H W., et al (2020), "Astragaloside IV: An Effective Drug for 32 the Treatment of Cardiovascular Diseases", Drug Des Devel Ther, 14, pp 37313746 The HPTLC Association, "Astragalus membranceus - root" 33 Trusheva B Trunvoka D, Bankova V (2007), "Different extraction methods of biologically active components from propolis: a preliminary study", Chemistry Central Journal, 1(1) 34 Vidhyatai Jondhale, Nikita Wagh, Shubhada Mohite, Dr Milind Wagh, Monika Sonawane (2022), "Applications of HPTLC in herbal drugs analysis", Indo 35 36 37 38 39 40 41 American Journal of Pharmaceutical sciences, 9(5), pp 256-264 Wang J N., Zhou, Y Y., Wu, S Z., Huang, K Y (2018), "Astragaloside IV attenuated 3,4-benzopyrene-induced abdominal aortic aneurysm by ameliorating macrophage-mediated inflammation", Frontiers in Pharmacology, X Wang (2006), " Effects of Astragaloside on growth activity and apoptosis of fibroblasts from human skin with and without wrinkle in vitro", Chin J Med Aesthetics Cosmetol, 12(2), pp 94-97 Y L Li Ye, Y., & Chen, H Y (2018), "Astragaloside IV inhibits cell migration and viability of hepatocellular carcinoma cells via suppressing long noncoding RNA ATB99", Biomedicine & Pharmacotherapy, pp 134-141 Yao Meicun (2000), "A Precolumn Derivatization High-Performance Liquid Chromatographic Method with Improved Sensitivity and Specificity for the Determination of Astragaloside IV in Radix Astragali", Journal Chromatograpic Science, 38, pp 325-328 Zhang (2014), "Astragaloside IV inhibits progression of lung cancer by mediating immune function of Tregs and CTLs by interfering with IDO", Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, 140(11), pp 1883-1890 Zhang J., Wu C., et al (2020), "Astragaloside IV derived from Astragalus membranaceus: A research review on the pharmacological effects", Adv Pharmacol, 87, pp 89-112 Zhang Jing, Meng Mei, et al (2015), "A New Approach to Develop a Standardized Method for Simultaneous Analysis of Astragaloside IV and Formononetin in Radix Astragali by High-Performance Thin-Layer Chromatography", Journal of Planar Chromatography – Modern TLC, 28(4), pp 268-273 42 Zu Y., Yan M., et al (2009), "Determination and quantification of astragalosides in Radix Astragali and its medicinal products using LC-MS", J Sep Sci, 32(4), pp 517-25 43 Wall et al (2000), Chromatopraphy: Thin Layer (Planar), pp 907-915 PHỤ LỤC COA chuẩn AS IV EP Mẫu dược liệu Hồng Kỳ (T1) thị trường Hình ảnh qt phổ mẫu thử bước sóng 203 nm (bước sóng cực đại dẫn xuất AS IV) Hình ảnh phổ mẫu thử xử lí theo quy trình khảo sát 366 nm Kết khảo sát quy trình Kết độ phù hợp hệ thống Kết purity mẫu chuẩn, thử, thử thêm chuẩn (8,9,10) Hình ảnh sắc ký đồ độ lặp SKĐ mẫu thử tiến hành độ lặp SKĐ mẫu thử tiến hành độ thu hổi nồng độ 100% Kết độ thu hồi nồng độ thêm chuẩn 80% Kết độ thu hồi nồng độ thêm chuẩn 100% Kết độ thu hồi nồng độ thêm chuẩn 200% Hình ảnh quét phổ mẫu dược liệu số ... ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ TÚ LINH 1701330 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ASTRAGALOSIDE IV TRONG HOÀNG KỲ BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Lâm... pháp định lượng Astragaloside IV HPTLC Do vậy, khóa luận ? ?Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Astragaloside IV Hoàng Kỳ HPTLC? ?? thực nghiên cứu với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp. .. chun luận riêng cho Hồng Kỳ , định lượng AS IV Hoàng Kỳ phương pháp HPLC với detector tán xạ bay ELSD 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 1.3.2.1 Phương pháp HPLC Định lượng AS IV Hoàng Kỳ phương pháp