NGUYỄN THỊ vân xây DỰNG PHƢƠNG PHÁP xác ĐỊNH một số THUỐC hóa dƣợc NHÓM hạ HUYẾT áp và lợi TIỂU TRỘN KHÔNG KHAI báo TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG dƣợc BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dƣợc sĩ

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC HÓA DƢỢC NHÓM HẠ HUYẾT ÁP VÀ LỢI TIỂU TRỘN KHÔNG KHAI BÁO TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƢỢC BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN Mã sinh viên: 1701670 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC HÓA DƢỢC NHÓM HẠ HUYẾT ÁP VÀ LỢI TIỂU TRỘN KHÔNG KHAI BÁO TRONG CHẾ PHẨM ĐƠNG DƢỢC BẰNG HPTLC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh ThS Nguyễn Thành Đạt Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích – độc chất HÀ NỘI – 2022 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đối tƣợng nghiên cứu 1.1.1 Amlodipin besylat 1.1.2 Nifedipin 1.1.3 Felodipin 1.1.4 Furosemid 1.1.5 Spironolacton 1.2 Tình hình nghiên cứu thuốc hóa dƣợc hạ huyết áp, lợi tiểu trộn trái phép chế phẩm đông dƣợc 1.2.1 Trên giới 1.2.2 Tại Việt Nam 1.3 Tổng quan phƣơng pháp nghiên cứu – Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao 1.3.1 Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 1.3.2 Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) CHƢƠNG : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị đối tƣợng nghiên cứu 11 2.1.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 11 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu .11 2.1.3 Đối tƣợng khảo sát 12 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu nội dung nghiên cứu 12 2.2.1 Chế tạo mẫu 12 2.2.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích 13 2.2.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 13 2.2.4 Ứng dụng phân tích mẫu thu thập đƣợc 14 2.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu .14 CHƢƠNG : THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 15 3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký .15 3.1.1 Khảo sát hệ dung môi pha động 15 3.1.2 Khảo sát bƣớc sóng định lƣợng 16 3.2 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 18 3.2.1 Độ chọn lọc 18 3.2.2 Độ phù hợp hệ thống 19 3.2.3 Khoảng nồng độ tuyến tính 20 3.2.4 Độ độ xác .22 3.2.5 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 24 3.3 Ứng dụng phƣơng pháp phân tích mẫu thực lƣu hành thị trƣờng 25 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 29 4.1 Xây dựng phƣơng pháp phân tích 29 4.1.1 Về phƣơng pháp phân tích 29 4.1.2 Xây dựng phƣơng pháp HPTLC 29 4.2 Thẩm định phƣơng pháp 29 4.3 Ứng dụng phƣơng pháp HPTLC để phân tích mẫu chế phẩm thuốc đông dƣợc thị trƣờng 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC LỜI CẢM ƠN Đầu tiên xin chân thành bày tỏ biết ơn kính trọng sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh ThS Nguyễn Thành Đạt ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo anh chị cán Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội tạo điều kiện thiết bị hỗ trợ cho suốt q trình nghiên cứu để hồn thành khóa luận Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, hỗ trợ cho nhiều suốt trình học tập thực đề tài Dù có nhiều cố gắng trình thực khóa luận thật tốt, song khơng thể tránh khỏi nhiều mặt thiếu sót hạn chế Tơi mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp dẫn thầy cô giáo Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2022 Nguyễn Thị Vân DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AML Amlodipin besylat AOAC Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức (Association of Official Analytical Chemists) CTCT Cơng thức cấu tạo FEL Felodpin FUR Furosemid HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HPTLC Sắc kí lớp mỏng hiệu cao (High Performance Thin Layer Chromatography) LOD Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ Giới hạn định lƣợng (Limit of quantitation) MeCN Acetonitril MeOH Methanol N01 Nền mẫu cao lỏng N02 Nền mẫu cao khô NIF Nifedipin RSD Độ lệch chuẩn tƣơng đối ( Relative Standard Deviation) S/N Tỷ số tín hiệu nhiễu SĐK Số đăng ký SPI Spironolacton TLC Sắc ký lớp mỏng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Danh mục chất chuẩn đƣợc sử dụng 11 Bảng 1: Kết phân tích độ thích hợp hệ thống .19 Bảng 2: Cách pha dãy nồng độ xây dựng đƣờng chuẩn 20 Bảng 4: Kết thẩm định khoảng nồng độ tuyến tính 20 Bảng 5: Kết thẩm định độ độ xác 23 Bảng 6: Kết thẩm định LOD .24 Bảng 7: Kết thẩm định LOQ .25 Bảng 8: Sắc ký đồ dạng vết 20 mẫu thực bƣớc sóng 254 nm (a) 366 nm (b) 26 Bảng 9: Kết định tính mẫu thực phƣơng pháp HPTLC 27 DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1: CTCT Amlodipin besylat .2 Hình 2: CTCT Nifedipin .3 Hình 3: CTCT Felodipin .3 Hình 4: CTCT Furosemid .4 Hình 5: CTCT Spironolacton Hình 1: Sắc ký đồ khảo sát pha động 15 Hình 2: Sắc ký đồ tách chất nghiên cứu hệ dung mơi lựa chọn 16 Hình 3: Phổ hấp thụ UV chất nghiên cứu 17 Hình 4: Sắc ký đồ thẩm định độ chọn lọc dạng vết 18 Hình 5: Chồng phổ cao khơ (N02) với mẫu chuẩn vị trí FUR 18 Hình 6: Đồ thị biểu diễn tƣơng quan tuyến tính diện tích pic nồng độ AML với dung môi pha mẫu: MeOH, dịch chiết N01, dịch chiết N02 22 Hình 7: Minh họa sắc ký đồ LOD mẫu thêm chuẩn cao lỏng nồng độ ppm bƣớc sóng 240 nm 366nm 24 Hình 9: Kết chồng phổ số mẫu nghi ngờ với chất chuẩn 28 24 Rarmen, F., Lozano, A Aguera, A (2011), "Overcoming matrix effects using the dilution approach in multiresidue methods for fruits and vegetables", Journal of Chromatography A 1218(2011), pp 7634 - 7639 25 Zhang, R., Yin, L Jin, S (2014), "Detection of illegally added drugs in dietary supplements by near-infrared spectral imaging", Journal of innovative optical health sciences 7(6), pp 1450032 1-6 26 Zheng, S., Lu, Y., Chen, J., Chen, B (2009), "Simultaneous determination of illegal synthetic drugs in antihypertensive dietary supplements by high performance liquid chromatography-mass spectrometry", Se Pu 27(1), pp 449 PHỤ LỤC Phụ lục 1: SKĐ thẩm định độ chọn lọc Phụ lục 1.1: Sắc ký đồ mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn bƣớc sóng 240nm 366nm Tại bƣớc sóng 240nm: Hình 1: Sắc ký đồ tá dược bào chế bước sóng 240nm Hình 2: Sắc ký đồ siro bước sóng 240nm Hình 3: Sắc ký đồ cao lỏng bước sóng 240nm Hình 4: Sắc ký đồ cao khơ bước sóng 240nm Hình 5: Sắc ký đồ mẫu chuẩn bước sóng Hình 6: Sắc ký đồ mẫu cao lỏng thêm chuẩn 240nm Hình 7: Sắc ký đồ mẫu cao khơ thêm chuẩn bước sóng 240nm bước sóng 240nm Hình 8: Sắc ký đồ tá dược bào chế bước sóng 366nm Hình 9: Sắc ký đồ siro bước sóng 366nm Hình 11: Sắc ký đồ cao khơ bước sóng 366nm Hình 13: Sắc ký đồ mẫu cao lỏng thêm chuẩn bước sóng 366nm Hình 10: Sắc ký đồ cao lỏng bước sóng 366nm Hình 12: Sắc ký đồ mẫu chuẩn bước sóng 366nm Hình 14: Sắc ký đồ mẫu cao khơ thêm chuẩn bước sóng 366nm Phụ lục 1.2: Kết chồng phổ mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn Hình 15: Chồng phổ AML mẫu cao lỏng mẫu cao khô thêm chuẩn với mẫu chuẩn Hình 16: Chồng phổ NIF mẫu cao lỏng mẫu cao khô thêm chuẩn với mẫu chuẩn Hình 17: Chồng phổ FEL mẫu cao lỏng mẫu cao khô thêm chuẩn với mẫu chuẩn Hình 18: Chồng phổ FUR mẫu cao lỏng mẫu cao khô thêm chuẩn với mẫu chuẩn Hình 19: Chồng phổ SPI mẫu cao lỏng mẫu cao khô thêm chuẩn với mẫu chuẩn Phụ lục 1.3: Độ tinh khiết pic chất phân tích Hình 20: Độ tinh khiết pic AML Hình 21: Độ tinh khiết pic NIF Hình 22: Độ tinh khiết pic FEL Hình 23: Độ tinh khiết pic FUR Hình 24: Độ tinh khiết pic SPI Phụ lục 2: SKĐ thẩm định khoảng tuyến tính Hình 25: Sắc ký đồ dạng vết đường chuẩn pha MeOH bước sóng 254 nm 366 nm Hình 26: Sắc ký đồ dạng vết đường chuẩn pha cao lỏng bước sóng 254 nm 366 nm Hình 27: Sắc ký đồ dạng vết đường chuẩn pha cao khơ bước sóng 254 nm 366 nm Phụ lục 3: SKĐ xác định LOD LOQ Hình 28: LOD cao lỏng bước sóng 240 nm 366 nm Hình 29: LOD cao khơ bước sóng 240 nm 366 nm Phụ lục 3.2: SKĐ xác định LOQ Hình 30: LOQ cao lỏng bước sóng 240 nm 366 nm Hình 31: LOQ cao khơ bước sóng 240nm 366 nm Phụ lục 4: Chồng phổ mẫu thực dƣơng tính Phụ lục.1: Các mẫu thực cho tín hiệu vết dƣơng tính với Amlodipin besylat Hình 32: M02 Hình 33: M06 Hình 34: M12 Hình 35: M14 Hình 36: M17 Hình 37: M20 Phụ lục 4.2: Các mẫu thực cho tín hiệu vết dƣơng tính với Nifedipin Hình 38: M12 Hình 39: M18 Phụ lục 4.3: Các mẫu thực cho tín hiệu vết dƣơng tính với Furosemid Hình 40: M02 Hình 41: M03 Hình 42: M04 Hình 43: M05 Hình 44: M06 Hình 45: M07 Hình 46: M19 Hình 47: M20 Phụ lục 4.4: Các mẫu thực cho tín hiệu vết dƣơng tính với Spironolacton Hình 48: M01 Hình 49: M20 Phụ lục 5: Danh mục mẫu thực Bảng 1: Danh mục mẫu thực M01 M02 M03 M04 M05 M06 M07 M08 M09 M10 M11 M12 M15 M13 M14 M16 M17 M18 M19 M20 ... ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN Mã sinh viên: 1701670 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC HÓA DƢỢC NHÓM HẠ HUYẾT ÁP VÀ LỢI TIỂU TRỘN KHÔNG KHAI BÁO TRONG CHẾ PHẨM ĐƠNG DƢỢC BẰNG HPTLC. .. đó, đề tài: ? ?Xây dựng phƣơng pháp xác định số thuốc hóa dƣợc nhóm hạ huyết áp lợi tiểu trộn không khai báo chế phẩm đông dƣợc HPTLC? ?? đƣợc thực với mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác định amlodipin... (2018), Xây dựng phương pháp xác định số dược chất nhóm hạ huyết áp trộn lẫn chế phẩm đông dược HPTLC HPLC, Luận văn cao học, Đại học Dƣợc Hà Nội 11 Phạm Văn Hùng (2021), Xây dựng phương pháp xác định