NGUYỄN THU PHƯƠNG NGHIÊN cứu tác DỤNG hạ ACID URIC, CHỐNG VIÊM và độc TÍNH TRÊN THỰC NGHIỆM của VIÊN NANG CHỨA THỔ PHỤC LINH, HY THIÊM và một số dược LIỆU KHÁC KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THU PHƯƠNG Mã sinh viên: 1701466 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ ACID URIC, CHỐNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH TRÊN THỰC NGHIỆM CỦA VIÊN NANG CHỨA THỔ PHỤC LINH, HY THIÊM VÀ MỘT SỐ DƯỢC LIỆU KHÁC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thùy Dương ThS Nguyễn Thị Thanh Nhài Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI 2022 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, với tình cảm chân thành nhất, em xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới Bộ môn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập, nghiên cứu trường Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thùy Dương, ThS Nguyễn Thị Thanh Nhài cho em lời khuyên quý báu, tận tình bảo, động viên, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài để có kết cuối ngày hơm Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Trần Hồng Linh, người thầy bên cạnh sát sao, nhiệt tình hướng dẫn em trình thực khóa luận mơn Bên cạnh em xin cảm ơn DS Đinh Đại Độ, DS Đinh Thị Kiều Giang, DS Nguyễn Thị Thủy, bạn em sinh viên nghiên cứu môn Dược lực hỗ trợ em trình làm thực nghiệm Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tới thầy, cô giáo dạy dỗ em suốt năm năm mái trường Đại học Dược nói chung mơn Dược lực nói riêng, cảm ơn thầy tận tâm với nghề, thầy người truyền cảm hứng, gương sáng lối sống đạo đức nghề nghiệp cho sinh viên chúng em Mặc dù cố gắng tạo điều kiện, song thời gian nghiên cứu ngắn, kiến thức thân hạn chế nên chắn khóa luận cịn nhiều thiếu sót Rất mong nhận đóng góp q báu thầy bạn để khóa luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn Hà nội, ngày 20 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thu Phương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh gút 1.1.1 Định nghĩa bệnh gút 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh bệnh gút 1.1.3 Nguyên nhân gây bệnh 1.1.4 Phân loại gút 1.1.5 Triệu chứng lâm sàng bệnh gút 1.1.6 Điều trị bệnh gút 1.1.7 Thuốc điều trị bệnh gút 1.2 Tổng quan chế phẩm nghiên cứu 11 1.2.1 Thổ phục linh 12 1.2.2 Hy thiêm 13 1.2.3 Một số dược liệu khác 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng, nguyên vật liệu thiết bị 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Động vật thí nghiệm 17 2.1.3 Hóa chất, thuốc thử 18 2.1.4 Thiết bị nghiên cứu 18 2.1.5 Nội dung nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm NC 20 2.2.2 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm NC 22 2.2.3 Phương pháp đánh giá độc tính chế phẩm NC 25 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Kết đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm NC mơ hình gây tăng acid uric máu cấp kalioxonat 29 3.1.1 Đánh giá ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến nồng độ acid uric huyết mơ hình gây tăng acid uric cấp kalioxonat 29 3.1.2 Đánh giá ảnh hưởng chế phẩm nghiên cứu đến hoạt độ enzym xanthin oxidase gan chuột thí nghiệm 30 3.2 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm NC 31 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 31 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat 32 3.3 Kết đánh giá độc tính chế phẩm NC 33 3.3.1 Độc tính cấp 33 3.3.2 Độc tính bán trường diễn 34 CHƯƠNG BÀN LUẬN 41 4.1 Về tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm chế phẩm NC 41 4.2 Về tác dụng chống viêm cấp chế phẩm NC thực nghiệm 43 4.3 Về độc tính chế phẩm NC thực nghiệm 45 KẾT LUẬN 49 PHỤ LỤC 1: XÁC NHẬN CÔNG BỐ PHÙ HỢP QUY ĐỊNH AN TOÀN THỰC PHẨM PHỤ LỤC 2: BẢN THÔNG TIN CHI TIẾT VỀ SẢN PHẨM DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CPNC Chế phẩm nghiên cứu COX - Cyclooxygenase - DRESS Hội chứng phát ban thuốc với tăng bạch cầu ưa acid triệu chứng toàn thân EULAR European League Against Rheumatism (Liên đoàn chống thấp khớp Châu Âu) IL Interleukin iNOS Nitric oxide synthase LOX Lypoxygenase LPS Lipopolysaccarid NaCMC Natri carboxymethyl cellulose NSAIDs Non Steroid Anti Inflammation Drugs (Thuốc chống viêm không steroid) SCAR Phản ứng bất lợi da SOD Superoxid effutase TNF Yếu tố hoại tử u XO Xanthin oxidase DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Trang Bảng 2.1 Thang điểm đánh giá mức độ viêm dựa theo triệu chứng 25 Bảng 3.1 Ảnh hưởng chế phẩm NC đến nồng độ acid uric huyết tỷ lệ giảm acid uric huyết so với lô chứng bệnh 29 Bảng 3.2 Ảnh hưởng chế phẩm NC lên hoạt độ xanthin oxidase gan 30 chuột nhắt trắng thực nghiệm Bảng 3.3 Ảnh hưởng chế phẩm NC lên mức độ phù chân chuột theo 31 thời gian mơ hình gây viêm cấp carrageenan Bảng 3.4 Tác dụng chống viêm chế phẩm NC mơ hình gây viêm 33 màng hoạt dịch khớp gối natri urat Bảng 3.5 Kết thí nghiệm cho thử nghiệm độc tính cấp mẫu thử 34 NC Bảng 3.6 Ảnh hưởng chế phẩm NC liều 1980 mg/kg dùng liên tục 28 36 ngày đến số huyết học chuột cống trắng Bảng 3.7 Ảnh hưởng chế phẩm NC lên thông số sinh hóa 37 chuột Bảng 3.8 Ảnh hưởng chế phẩm NC dùng liên tục 28 ngày đến khối 38 lượng quan chuột cống trắng Bảng 3.9 Ảnh hưởng chế phẩm NC dùng liều lặp lại 28 ngày đến mô 39 bệnh học gan chuột Bảng 3.11 Ảnh hưởng chế phẩm NC dùng liều lặp lại 28 ngày đến mô bệnh học thận chuột 40 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình Trang Hình 1.1 Quá trình tổng hợp acid uric thể Hình 1.2 Phác đồ điều trị đợt gút cấp Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nội dung nghiên cứu 19 Hình 2.2 Quy trình đánh giá tác dụng chế phẩm NC mơ hình gây tăng acid uric cấp kalioxonat 22 Hình 2.3 Quy trình đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột 23 Hình 2.4 Quy trình đánh giá tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat 25 Hình 2.5 Quy trình đánh giá độc tính bán trường diễn 27 Hình 3.1 Biểu đồ biểu diễn nồng độ acid uric huyết mô hình gây tăng acid uric máu cấp kalioxonat 29 Hình 3.2 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm NC mơ hình gây phù bàn chân chuột 31 Hình 3.3 Ảnh hưởng viên nang NC liều 1980 mg/kg đến khối lượng thể chuột cống đực 35 Hình 3.4 Ảnh hưởng viên nang NC liều 1980 mg/kg đến khối lượng thể chuột cống 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Gút hậu chuyển hóa acid uric bất thường, tăng nồng độ acid uric máu lắng đọng tinh thể urat khớp, mô mềm đường tiết niệu Biểu lâm sàng bệnh Gút thường đau khớp cấp tính, khởi phát đột ngột với triệu chứng sưng đau dội, nóng đỏ [8] Các triệu chứng ảnh hưởng không nhỏ tới chất lượng sống người bệnh Bệnh có xu hướng gia tăng vài thập kỷ gần đây, nước phát triển [59] Hiện nay, thuốc hóa dược đóng vai trị điều trị bệnh gút với mục tiêu hạ acid uric máu chống viêm Ưu điểm thuốc hóa dược tác dụng nhanh, sử dụng thuận tiện Nhưng bên cạnh đó, thuốc thường kèm số tác dụng không mong muốn bệnh nhân sử dụng lâu dài loét dày, suy gan, thận, độc tủy xương, hội chứng Stevens-Jonhnson… [65], [72] Chính vậy, việc nghiên cứu tìm thuốc trị bệnh gút hiệu an toàn cần thiết Trong trình nỗ lực tìm kiếm, bên cạnh thuốc hóa dược, dược liệu có nguồn gốc tự nhiên ln đối tượng quan tâm nhà nghiên cứu Các dược liệu dùng theo kinh nghiệm để chữa bệnh lý liên quan đến gút hy thiêm, thổ phục linh, bồ công anh, nhọ nồi, vỏ đậu xanh… có chứng in vitro và/hoặc in vivo chống viêm, ức chế enzym xanthin oxidase hỗ trợ giảm acid máu [17] Tuy nhiên, đến chưa có nghiên cứu dược lý thực để đánh giá tác dụng điều trị gout độc tính phối hợp dược liệu Nhằm xây dựng khoa học việc sử dụng sản phẩm lâm sàng, giúp bác sĩ bệnh nhân có thêm lựa chọn điều trị gút, nhóm nghiên cứu thực đề tài “Nghiên cứu tác dụng hạ acid uric, chống viêm độc tính thực nghiệm viên nang chứa thổ phục linh, hy thiêm số dược liệu khác” với ba mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm Đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn chế phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh gút 1.1.1 Định nghĩa bệnh gút Gút bệnh rối loạn chuyển hóa purin dẫn đến lắng đọng tinh thể urat tăng acid uric kéo dài [2] Các rối loạn xảy riêng lẻ hay kết hợp bao gồm: Tăng acid uric máu; Cơn viêm khớp, đau khớp điển hình, cấp tính; Lắng đọng đơn tinh thể natri urat tổ chức: bên xung quanh khớp, sụn xương, gân, tổ chức da, khoảng kẽ nhu mô thận; Sỏi tiết niệu [6] Đặc trưng bệnh đợt viêm cấp, tái phát gây đau dội, lâu dài bệnh trở thành mạn tính [3] 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh bệnh gút 1.1.2.1 Quá trình sinh tổng hợp acid uric Acid uric sản phẩm q trình thối giáng nucleo-protein có chứa nhân purin (adenin, guanin) thể với tham gia enzym: phosphoribosyl, pyrophosphatase (PRPP), nucleosid phosphorylase, xanthin oxidase (XO) [38] Quá trình sinh tổng hợp acid uric thể trình bày tóm tắt sơ đồ hình 1.1 [50] Hình 1.1 Quá trình tổng hợp acid uric thể 1.1.2.2 Cơ chế bệnh sinh bệnh gút Khi hàm lượng purin thể tăng, dẫn đến q trình chuyển hóa purin thành acid uric tăng Khi thể tạo nhiều acid uric giảm thải trừ acid uric, nồng độ acid uric máu lại tăng lên Khi nồng độ acid uric máu tăng cao vượt nồng độ bão hoà dẫn (khoảng 6,8mg/dL) đến tích luỹ vơ triệu chứng tinh thể urat mơ khơng có mạch máu, tạo thành microtophus (vi hạt tophi) [6] Sự lắng đọng hạt vị trí khác gây nên tổn thương khác Khi microtophus sụn khớp bị vỡ ra, tinh thể urat tiếp xúc với mạch máu màng hoạt dịch làm khởi động trình viêm gây gút cấp Sự lắng đọng vi tinh thể cạnh khớp, màng hoạt dịch, mô sụn mơ xương dẫn đến bệnh xương khớp mạn tính gout [50] Tinh thể urat lắng đọng tổ chức kẽ thận dẫn đến viêm thận kẽ; acid uric niệu tăng toan hoá nước tiểu dẫn đến sỏi tiết niệu [6] 1.1.3 Nguyên nhân gây bệnh Có nhiều nguyên nhân gây bệnh gút chủ yếu tăng acid uric máu Nồng độ acid uric máu người Việt Nam khoảng 4,5 - 1,0 mg/L (208 - 327 µmol/L) [6] Khi nồng độ 7,0 mg/L (420 µmol/L) coi tăng acid uric máu [50] Tăng acid uric máu chưa hẳn bị gút bệnh gút chiếm 25% tổng số bệnh nhân có tăng acid uric máu thực tế mắc bênh gút chắn có tăng acid uric máu [6], [60] Tăng acid uric máu nhiều nguyên nhân: tăng tổng hợp, giảm tiết đồng thời hai 1.1.3.1 Tăng tổng hợp acid uric máu Tăng tổng hợp acid uric đến từ yếu tố chính: ngoại sinh, nội sinh tăng thối hóa nucleo – protein tế bào - Ngun nhân ngoại sinh đến từ việc ăn nhiều thức ăn chứa purin nội tạng, hải sản, thịt bò [1], [2] - Nguyên nhân nội sinh rối loạn enzym tổng hợp acid uric thiếu hụt HGPR transferase, enzym có vai trị bắt giữ base purin, làm chậm tạo vòng nên làm chậm trình chuyển gianin hypoxanthin thành acid uric Vì vậy, thiếu hụt enzym gây hội chứng Lesch – Nyhan Hay tăng hoạt động PRPP synthetase enzym đường tạo vịng Vì vậy, tăng hoạt động enzym gây tăng sản xuất mức purin dẫn đến tăng acid uric máu bị sỏi urat [11] - Tăng thối hóa nucleo – protein tế bào: trường hợp tế bào thay nhanh, tăng sinh, chết bệnh bạch cầu, tan huyết, liệu pháp độc tế bào điều trị bệnh ác tính, thối hóa q mức ATP vận động [6] triệu chứng giống gút cấp tính điển hình Vì vậy, mơ hình phù hợp để đánh giá tác dụng chống viêm thuốc điều trị gút Tinh thể natri urat sau tiêm vào khớp gối nhận diện bị thực bào tế bào màng hoạt dịch Trong trình thực bào, tinh thể natri urat kích thích tăng tạo thể gây viêm, hoạt hóa caspase - 1, chuyển ProIL - 1β thành IL - 1β, IL - 1β giải phóng đến gắn vào thụ thể IL - 1R nó, gây hoạt hóa nội mơ, giải phóng yếu tố trung gian tiền viêm, kích thích bạch cầu hạt tới ổ khớp Các yếu tố tiếp tục quay trở lại kích thích IL - 1β làm nặng thêm trình viêm [10] Kết sau tiêm giờ, chuột lô chứng bệnh xuất triệu chứng viêm tương đối nặng, hầu hết chuột khập khiễng, có kéo lê co chân q trình di chuyển, triệu chứng sau tiêm tinh thể Trong đó, thuốc đối chiếu diclofenac 20 mg/kg thể tác dụng chống viêm rõ rệt thời điểm (p 0,05) Kết tương đồng với kết mơ hình gây phù bàn chân carrageenan Lý giải hiệu làm giảm viêm mơ hình này, chế phẩm NC có đa số thành phần có chế ức chế IL - 1β yếu tố trung gian tiền viêm chứng minh hy thiêm, thổ phục linh, vỏ đậu xanh nano curcumin Tuy nhiên tăng liều tác dụng chống viêm không tốt 4.3 Về độc tính chế phẩm NC thực nghiệm 4.3.1 Độc tính cấp Một thuốc để sử dụng phải có hiệu lực an tồn để chứng minh tính an tồn phải nghiên cứu độc tính thuốc Khảo sát độc tính cấp đánh giá biểu bất thường xuất thuốc gây sau dùng liều 24 đầu động vật thí nghiệm Việc thử độc tính cấp nhằm cung cấp thơng tin dự đoán triệu chứng, dự kiến biện pháp điều trị ngộ độc cấp, xác định phạm vi an toàn, LD50 thuốc Theo y học cổ truyền, thành phần chế phẩm NC thổ phục linh, hy thiêm, bồ cơng anh, cỏ nhọ nồi có tác dụng điều trị gút, khơng có độc tính Trong thử nghiệm thăm dị, chúng tơi xác định mức liều 37,7 g/kg liều cao mà chuột dung nạp mà không gây chết chuột, liều gấp gần 31 lần liều có tác dụng dược lý 45 Thử nghiệm thức tiến hành lơ chuột với mức liều 25,18 g/kg 37,33 g/kg Kết cho thấy khơng có chuột tử vong sau uống mẫu thử mức liều Sau dùng chế phẩm, chuột ăn uống, vận động bình thường, phản xạ tốt với kích thích, lơng mượt, niêm mạc hồng hào, mắt sáng, phân khơ, nước tiểu bình thường Như vậy, kết độc tính cấp cho thấy, chế phẩm NC tương đối an tồn, khơng gây độc tính cấp nghiêm trọng động vật 4.3.2 Độc tính bán trường diễn Nghiên cứu sử dụng mơ hình thử độc tính thử độc tính liều nhắc lại 28 ngày theo đường uống OECD thử nghiệm chuột cống trắng Trên chuột cống trắng, nhóm nghiên cứu thử nghiệm với liều 1980 mg/kg Chuột đươc uống chế phẩm NC pha nước cất liên tục 28 ngày Sau ngày thứ 28, chuột lấy để làm xét nghiệm huyết học, sinh hóa mổ để quan sát đại thể vi thể quan 4.3.2.1 Ảnh hưởng chế phẩm NC lên thể trạng toàn thân, cân nặng chuột Theo dõi tình trạng chung chuột lô chứng lô uống chế phẩm thử suốt q trình nghiên cứu cho thấy khơng có biểu bất thường Tại tuần thứ nhất, khối lượng lơ có dấu hiệu giảm nhẹ lô chứng lô thử nhiên số nhỏ (0,98% 1,46%) sai số trình cho chuột nhịn ăn, kĩ thuật cân kỹ thuật đọc số liệu Còn lại cân nặng chuột lơ tăng khơng có khác biệt tăng trưởng khối lượng thể lô thử so với lô chứng giống, tất thời điểm nghiên cứu Như vậy, chế phẩm NC liều 1980 mg/kg không ảnh hưởng đến thể trạng toàn thân cân nặng chuột cống trắng 4.3.2.2 Ảnh hưởng chế phẩm NC lên thơng số huyết học Máu đóng vai trị trì hoạt động quan thể, số lượng chất lượng tế bào máu phản ánh tình trạng quan tạo máu Vì vậy, thuốc tác động đến quan tạo máu, làm thay đổi số lượng chất lượng tế bào máu Nhóm nghiên cứu xác định thơng số huyết học bao gồm số lượng hồng cầu (RBC), nồng độ hemoglobin (HGB), tỷ lệ hematocrit (HCT), thể tích trung bình hồng cầu (MCV), số lượng tiểu cầu (PLT), số lượng bạch cầu (WBC) tỷ lệ % tế bào lympho (LYM%) Đây thông số huyết học thường xác định nghiên cứu độc tính bán trường diễn Kết nghiên cứu cho thấy hầu hết lơ thử khơng có khác biệt so với lô chứng Ở chuột cái, số LYM lô thử cao so với lô chứng (p < 0,05) nhiên mức độ tăng nhẹ (0,05) Do đó, chế phẩm NC liều 1980mg/kg khơng ảnh hưởng tới thông số huyết học chuột cống trắng 4.3.2.3 Ảnh hưởng chế phẩm NC chức gan Gan quan lớn thể với nhiều chức đặc biệt quan trọng như: chuyển hóa hóa sinh, tiêu hố khử độc loại bỏ sản phẩm chuyển hóa khỏi thể Nó tham gia vào nhiều hoạt động chức tiết, tổng hợp chuyển hóa Các bệnh lý gan gây tổn thương tế bào gan, gây tình trạng tắc mật suy giảm chức gan Khi gan bị tổn thương làm thay đổi tính thấm màng tế bào, dẫn đến tăng hoạt độ nhiều ezym máu, đặc biệt enzym có nguồn gốc gan Vì để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan, người ta thường định lượng ezym có nguồn gốc từ gan huyết Khi nồng độ enzym tăng chứng tỏ tế bào gan bị tổn thương Trong nghiên cứu nhóm nghiên cứu định lượng AST ALT, enzym sử dụng rộng rãi đánh giá tổn thương tế bào gan Kết cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa thông số ALT, AST lô thử lô chứng giống (p > 0,05), chứng tỏ chế phẩm NC không ảnh hưởng đến tổn thương tế bào gan Ngồi ra, gan có vai lớn chuyển hóa glucid, lipid, protid cho thể Định lượng protein toàn phần, cholesterol, glucose, creatinin máu giúp dánh giá chức chuyển hóa gan Kết cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê thơng số glucose, cholesterol tồn phần, protein toàn phần creatinin huyết lô thử so với lô chứng giống (p>0,05), chứng tỏ chế phẩm NC không ảnh hưởng đến chức chuyển hóa protid, lipid glucid gan Bên cạnh đó, tất cá thể nghiên cứu, khơng quan sát thấy có thay đổi mặt đại thể gan Hình ảnh vi thể gan khơng có khác biệt lơ chứng lô nghiên cứu mức liều 1980 mg/kg Khối lượng gan theo thể chuột tất lơ thử uống NC khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng (p>0,05) Do đó, chế phẩm NC liều 1980mg/kg không ảnh hướng đến chức gan 4.3.2.4 Ảnh hưởng chế phẩm NC chức thận Thận quan nhỏ bé (chiểm khoảng 0,5% trọng lượng thể) lại đảm nhiệm nhiều chức sống thể Khi thuốc vào thể, sau thực chức thận thải trừ thể Tuy nhiên nhu mô thận nhạy cảm với thuốc, thuốc có khả gây độc thận Creatin tổng hợp gan, theo dịng máu tới mơ thối hóa thành creatinin Creatinin lọc hồn tồn qua cầu thận, khơng tái hấp thu tiết ống thận Nồng độ creatinin máu ổn định, không phục thuộc vào thức ăn thay đổi sinh lý khác mà phụ thuộc vào khả lọc cầu thận Việc sử 47 dụng creatinin sở để làm xét nghiệm thăm dò chức lọc cầu thận theo dõi tiến triển chức thận Kết cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa thơng số creatinin lô thử lô chứng (p > 0,05), chứng tỏ khơng có tổn thương từ thận Khối lượng thận theo thể chuột tất lơ thử khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng (p>0,05) Bên cạnh đó, kết giải phẫu đại thể giải phẫu vi thể thận khơng có khác lô chứng lô nghiên cứu hai mức liều Do đó, chế phẩm NC liều 1980mg/kg khơng ảnh hưởng đến chức thận 4.3.2.5 Ảnh hưởng chế phẩm NC đến khối lượng quan Kết nghiên cứu cho thấy tỉ lệ khối lượng quan tim, phổi, tuyến thượng thận tất lơ uống chế phẩm thử khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê với lơ chứng giống (p > 0,05) Tuy nhiên lô cái, có khác biệt có ý nghĩa thống kê lô thử lô chứng tỷ lệ khối lượng lách so với khối lượng toàn thể Tuy nhiên khac biệt nhỏ xảy lơ cái, chưa thể khẳng định biểu độc tính chế phẩm Vậy, chế phẩm NC liểu 1980mg/kg không ảnh hưởng tới khối lượng quan thể Từ kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn, chúng tơi nhận thấy chế phẩm NC khơng thể độc tính sau 28 ngày thử nghiệm 48 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu, nhóm nghiên cứu xin đưa số kết luận: Tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm chế phẩm NC - Trên mơ hình gây tăng acid uric cấp kalioxonat chuột nhắt trắng, chế phẩm NC mức liều 600 mg/kg chưa thể tác dụng làm giảm nồng độ acid huyết mức liều 1200 mg/kg làm giảm nồng độ acid huyết so với lơ chứng bệnh - Trên mơ hình đánh giá ảnh hưởng đến hoạt độ enzym xanthin oxidase gan chuột nhắt trắng, mức liều 600 mg/kg 1200 mg/kg chưa thể tác dụng ức chế hoạt độ enzym xanthin oxidase gan chuột Tác dụng chống viêm thực nghiệm chế phẩm NC - Trên mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan, chế phẩm NC mức liều 330 mg/kg làm giảm mức độ phù chân chuột thời điểm sau gây viêm, chế phẩm NC mức liều 660 mg/kg chưa thể tác dụng giảm mức độ phù chân chuột thời điểm sau gây viêm - Trên mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối natri urat chuột cống trắng, chế phẩm NC mức liều 330 mg/kg làm giảm viêm thời điểm sau gây viêm, chế phẩm NC mức liều 660 mg/kg chưa thể tác dụng giảm viêm thời điểm 4, sau gây viêm so với lô chứng bệnh Độc tính chế phẩm NC - Với nghiên cứu độc tính cấp, mẫu thử NC dùng theo đường uống chuột nhắt trắng với liều 37,77 g/kg, liều cao cho chuột uống qua kim đầu tù, khơng thấy thể độc tính cấp chuột nhắt trắng Liều thử độc tính cấp NC gấp khoảng 31 lần liều thể tác dụng hạ acid uric huyết - Với nghiên cứu độc tính bán trường diễn, kết nghiên cứu cho thấy, chế phẩm NC dấu hiệu đáng kể độc tính dùng liều lặp lại 28 ngày chuột cống trắng với mức liều thử 1980 mg/kg/ngày (liều gấp lần liều cao thể tác dụng dược lý) Do không quan sát thấy tác dụng khơng mong muốn suốt q trình thử nghiệm nên mức liều 1980 mg/kg/ngày coi mức liều không quan sát thấy tác dụng không mong muốn liên quan đến việc dùng chế phẩm NC 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Nguyễn Thị Bay (2007), Bệnh học điều trị nội khoa (kết hợp Đông-Tây y), Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 538-546 Bộ môn Dược lực – Trường Đại học Dược Hà Nội (2012), Dược lý học, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2016), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh xương khớp, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2018), Dược thư quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phùng hịa bình, Nguyễn thị thu hiền (2010), Góp phần tìm hiểu tác dụng khơng mong muốn số thuốc có thành phần hóa học saponin anthranoid, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ khóa 2005 – 2010, Trường đại học Dược Hà Nội Ngô Quý Châu (2020), Bệnh gút (Gout – Goutte), Bệnh học nội khoa tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội Hoàng Bảo Châu cộng (1987) Đánh giá tác dụng giảm đau chống viêm Độc hoạt II số bệnh khớp, Thông tin YHCT Việt Nam, số 6, 30 - 35 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Vũ Bình Dương, Nguyễn Hoàng Ngân, Trần Quốc Bảo (2015),"Đánh giá tác động hạ acid uric máu cao lỏng Thống Phong Khang động vật thực nghiệm", Tạp chí Y-Dược học Quân sự, 8, tr.11-16 10 Nguyễn Thùy Dương (2012), Nghiên cứu tác dụng bệnh gút thực nghiệm hy thiêm (Siegesbeckia orientalis L., Asteraceae), Luận án tiến sĩ dược học, Viện Dược liệu 11 Nguyễn Thùy Dương, Nguyễn Thu Hằng, Hoàng Thị Quỳnh (2019), Nghiên cứu tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh gút thực nghiệm viên nang chứa Cần Tây, khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ khóa 2014 – 2029, Trường đại học Dược Hà Nội 12 Nguyễn Thùy Dương, Khổng Thị Hoa, Nguyễn Minh Khởi (2011),"Tác dụng hạ acid uric huyết phân đoạn hy thiêm thực nghiệm", Tạp chí Dược học, 51(9), tr.32-36 13 Nguyễn Thùy Dương, Ngô Thanh Hoa, Nguyễn Thị Quý (2020), Đánh giá tác dụng hạ acid uric, chống viêm, giảm đau chế phẩm Gudcare thực nghiệm, khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ khóa 2015 – 2020, Trường đại học Dược Hà Nội 50 14 Nguyễn Thùy Dương, Nguyễn Minh Khởi, Hoàng Kim Huyền (2011), "Tác dụng giảm đau chống viêm phân đoạn n-butanol hy thiêm", Tạp chí Dược học, 51 (11), trang 34-38 15 Đỗ Trung Đàm, Đoàn Thanh Hiền (1996), “Nghiên cứu vai trò thổ phục linh thuốc chữa thấp khớp”, Tạp chí dược học, 8, trang 15-18 16 Mai Văn Điển, Nguyễn Thế Dân (1996),"Ảnh hưởng flavonoid vỏ đậu xanh thay đổi mô học số quan miễn dịch lách, hạch, tuyến ức chuột nhắt trắng sau chiếu xạ liều 7Gy", Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Viện y học cổ truyền Việt Nam, tr.308-311 17 Trình Nhu Hải, Lý Gia Canh (2004), Trung quốc danh phương toàn tập, Nhà xuất Y học, Hà Nội 18 Nguyễn Thu Hằng, Nguyễn Thùy Dương (2014), "Nghiên cứu tác dụng ức chế enzym xanthin oxidase in vitro hạt đậu xanh", Tạp chí nghiên cứu Dược thơng tin thuốc, 2, trang 63-67 19 Trần Lưu Vân Hiền (1998),"Kết nghiên cứu Flavonoid từ Vỏ đậu xanh phương pháp hóa lý kêt phân tích chất hóa học chế phẩm (Vitexin isovitexin)", Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Viện y học cổ truyền Việt Nam 20 Nguyễn Thị Hương (2011), Nghiên cứu thành phần hóa học vỏ hạt đậu xanh (Vigna radiata (L).Wilczeck), họ Đậu (Fabaceae), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ trường Đại học Dược Hà Nội 21 Hoàng Thị Kim Huyền, Brouwers J.R.B.J (2012), Dược lâm sàng, nguyên lý sử dụng thuốc điều trị, trang 459-480 22 Trần Hồng Linh, Vũ Duy Phong, Đào Thị Hoài Thu, Phạm Văn Huấn, Nguyễn Thùy Dương (2021), “Nghiên cứu tác dụng chống viêm độc tính cấp thực nghiệm sản phẩm cao lỏng tiêu viêm HD”, Tạp chí dược liệu, tr.1-7 23 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội 24 Tống Trần Luân (1981) Kết điều trị 64 ca VKDT thuốc thấp khớp II, Thông tin Đông y số 31, 11-14 25 Vĩ Quang Nghiệp (2010) Trung y điều trị 120 bệnh nhân VKDT, Tạp chí Trung y Trung dược, Quyển 23, Kỳ 3, 136 - 137 26 Nguyễn Vĩnh Ngọc (2007), “Điều trị bệnh gout”, Điều trị học nội khoa tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội 27 Trần Đức Phấn (1998), Nghiên cứu hậu di truyền nhiễm độc hóa chất bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu cơ, thăm dị biện pháp khắc phục, Luận án tiến sĩ y học, chuyên ngành Di truyền học trường Đại học Y Hà Nội, tr.141-142 51 28 Đỗ Thị Phương, Phó Đức Thuần (1986), Nhận xét bước đầu hiệu lực an tồn chế phẩm Hy Đan, Tạp chí Dược học năm 1989, tập 195, số 4, 22-25 29 Nguyễn Văn Tâm (2002), Đánh giá tác dụng điều trị viên nang Phong tê thấp bệnh VKDT, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa cấp II, Đại học Y Hà Nội 30 Nguyễn Đức Toàn (2004), Nam y nghiệm phương, Nhà xuất Y học, Hà Nội 31 Nguyễn Ngọc Xuân, Đào Văn Phan, Ostenson CG., Nguyễn Khánh Hoà (2003), “Ảnh hưởng thổ phục linh nồng độ glucose máu insulin máu chuột cống đái tháo đường di truyền chủng GK đảo tuỵ cô lập”, Tạp chí nghiên cứu y học, 26 (6), trang 17-21 Tài liệu tiếng anh 32 Alinda Peckel (2012), “American College of Rheumatology for management of gout” 33 Alinda Peckel (2020), “American College of Rheumatology for management of gout” 34 Bull Drug Ther (2018), "An update on the management of gout", 56 (1), pp 912 35 Chen Y., Li C., Duan S., et al (2019), "Curcumin attenuates potassium oxonate induced hyperuricemia and kidney inflammation in mice", Biomed Pharmacother, 118, pp 109-195 36 Claire Preston (2020), Stockley’s Drug Interactions 12th ed, The Pharmaceutical Press, London 37 Dalbeth N., Merriman T R., Stamp L K (2016), “Gout”, Lancet, 388 (10055), pp 2039-2052 38 de Oliveira E P., Burini R C (2012), “High plasma uric acid concentrations: causes and consequences” Diabetol Metab Syndr, (12), pp.1758-5996 39 Hu Chun, Kitts David D (2004), "Luteolin and luteolin-7-O-glucoside from dandelion flower suppress iNOS and COX-2 in RAW264.7 cells", Molecular and Cellular Biochemistry, 265 (1), pp 107-113 40 Hua S., Zhang Y., Liu J., et al (2018), "Ethnomedicine, Phytochemistry and Pharmacology of Smilax glabra: An Important Traditional Chinese Medicine", Am J Chin Med, 46(2), pp.261-297 41 Huang L., Deng J., Chen G., et al (2019), "The anti-hyperuricemic effect of four astilbin stereoisomers in Smilax glabra on hyperuricemic mice", J Ethnopharmacol, 238, pp.111-777 42 J Morris Christopher (2003), "Carrageenan-Induced Paw Edema in the Rat and Mouse", Inflammation Protocols, pp.115-121 52 43 Jahan R., Al-Nahain A., Majumder S., et al (2014), "Ethnopharmacological Significance of Eclipta alba (L.) Hassk (Asteraceae)", Int Sch Res Notices, pp 385-969 44 Jeon H J., Kang H J., Jung H J., et al (2008), "Anti-inflammatory activity of Taraxacum officinale", J Ethnopharmacol, 115 (1), pp 82-88 45 Jiang J, Xu Q (2003), “Immunomodulatory activity of the aqueous extract from rhizome of Smilax glabra in the later phase of adjuvant-induced arthritis in rats”, Journal of Ethnopharmacology, 85 (1), pp 53-59 46 Lee M H., Graham G G., Williams K M., et al (2008), "A benefit-risk assessment of benzbromarone in the treatment of gout Was its withdrawal from the market in the best interest of patients?", Drug Saf, 31 (8), pp 643-665 47 Lee Suk-Jun, Lee Ji-Hye, Lee Han-Hyung, et al (2011), "Effect of Mung Bean Ethanol Extract on Pro-inflammtory Cytokines in LPS Stimulated Macrophages", J Food Science Biotechnology, 20(2), pp.519-524 48 Lin J K (2007), "Molecular targets of curcumin", Adv Exp Med Biol, 595, pp 227- 243 49 Lu C L, Zhu Y F, Hu M M, et al (2015), "Optimization of astilbin extraction from the rhizome of Smilax glabra, and evaluation of its anti-inflammatory effect and probable underlying mechanism in lipopolysaccharide-induced RAW264.7 macrophages", Molecules, 20(1), pp.625-644 50 Michelle A Fravel, Michael E Ernst (2020), “Gout and hyperuricemia’’, Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach 11th ed, The McGraw-Hill Companies 51 Mouradjian M T., Plazak M E., Gale S E., et al (2020), "Pharmacologic Management of Gout in Patients with Cardiovascular Disease and Heart Failure", American Journal of Cardiovascular Drugs 52 OECD (2002), Test No 420: Acute Oral Toxicity - Fixed Dose Procedure, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD Publishing, Paris 53 OECD (2008), Test No 407: Repeated Dose 28-Day Oral Toxicity Study in Rodents, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD Publishing, Paris 54 Pascart T., Liote F (2019), "Gout: state of the art after a decade of developments”, Rheumatology (Oxford), 58 (1), pp 27-44 55 Ragab Gaafar, Elshahaly Mohsen, Bardin Thomas (2017), "Gout: An old disease in new perspective - A review", Journal of advanced research, 8(5), pp.495-511 53 56 Ragab Gaafar, Elshahaly Mohsen, Bardin Thomas (2017), “Gout: An old disease in new perspective – A review”, Journal of advanced research, (5), pp 495511 57 Richette P., Doherty M., Pascual E., et al (2017), "2020 EULAR evidence-based recommendations for the management of gout", Ann Rheum Dis, 76 (1), pp 2942 58 Robert Buckingham, William Martindale (2020), Martindale The Complete Drug Reference 40th ed, The Pharmaceutical Press, London 59 Robinson P.C., Horsburgh S (2014), “Gout: joints and beyond, epidemiology, clinical features, treatment and co-morbidities”, Maturitas, 78(4) Pp.245-241 60 Ruoff G., Edwards N, L (2016), “Overview of serum Uric Acid Treatment Targets in gout: Why less Than mg/dL?”, Postgrad Med, 128 (7), pp 706- 715 61 Stamp L K., Chapman P T (2020), "Allopurinol hypersensitivity: Pathogenesis and prevention", Best Pract Res Clin Rheumatol 62 Stavric B., Johnson W.J, Grice H.C (1969), "Uric Acid Nephropathy: An Experimental Model", Experimental Biology and Medicine, 130(2), pp.512-516 63 Thuy Duong Nguyen, Thi Hong Anh Nguyen, Thi Ha Do, Van Thi Hong Tran, Hoang Anh Nguyen (2022) “Anti-inflammatory effect of a triterpenoid from Balanophora laxiflora: results of bioactivity-guided isolation” 64 Vogel Hans Gerhard (2008), Drug Discovery and Evaluation, Springer, pp.11091110 65 Wang C W., Dao R.L., et al (2016), “Immunopathogenesis and risk factors for allopurinol severe cutaneous adverse reactions” Curr Opin Allergy Clin Immunol, 16 (4), pp.339-345 66 Wang J P., Zhou Y M., Ye Y J., et al (2011), "Topical anti-inflammatory and analgesic activity of kirenol isolated from Siegesbeckia orientalis", J Ethnopharmacol, 137(3), pp.1089-1094 67 Wang S Y., Chang H N., Lin K T., et al (2003), "Antioxidant properties and phytochemical characteristics of extracts from Lactuca indica", J Agric Food Chem, 51 (5), pp 1506-1512 68 Winter CA, Risley EA, GW Nuss (1962), "Carrageenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiiflammatory drugs", Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 111(3), pp.544-547 69 Yao Y, Chen F, Wang M, et al (2008), "Antidiabetic activity of Mung bean extracts in diabetic KK-Ay mice", 56 (19), pp 8869-8873 54 70 Yousefi Ghale-Salimi M., Eidi M., Ghaemi N., et al (2018),"Antiurolithiatic effect of the taraxasterol on ethylene glycol induced kidney calculi in male rats", Urolithiasis, 46 (5), pp 419-428 71 Zhao L., Cao L., Zhao T Y., et al (2020), "Cardiovascular events in hyperuricemia population and a cardiovascular benefit-risk assessment of uratelowering therapies: a systematic review and meta-analysis", Chinese Medical Journal, 133 (8), pp 982-993 72 Zhou Q., Su J., et al (2017), “A study comparing the safety and efficacy of febuxostat, allopurinol, and benzbromarone in Chinese gout patients: a retrospective cohort study” Int J Clin Pharmacol Ther 55(2).pp 163-168 55 PHỤ LỤC 1: XÁC NHẬN CƠNG BỐ PHÙ HỢP QUY ĐỊNH AN TỒN THỰC PHẨM PHỤ LỤC 2: BẢN THÔNG TIN CHI TIẾT VỀ SẢN PHẨM BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THU PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ ACID URIC, CHỐNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH TRÊN THỰC NGHIỆM CỦA VIÊN NANG CHỨA THỔ PHỤC LINH, HY THIÊM VÀ MỘT SỐ DƯỢC LIỆU KHÁC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 2022 ... nghiên cứu thực đề tài ? ?Nghiên cứu tác dụng hạ acid uric, chống viêm độc tính thực nghiệm viên nang chứa thổ phục linh, hy thiêm số dược liệu khác? ?? với ba mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng hạ acid. .. phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm Đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn chế phẩm nghiên cứu mơ hình thực nghiệm. .. nhóm nghiên cứu tiến hành thử nghiệm mơ hình kinh điển có khả kết luận thu? ??c có hay khơng có tác dụng hạ acid uric, chống viêm, đồng thời đánh giá độc tính chế phẩm thực nghiệm 4.1 Về tác dụng hạ