Độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của cao chiết nấm Cordyceps miltaris

Bài viết Độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của cao chiết nấm Cordyceps miltaris được thực hiện nhằm đánh giá tính an toàn của nấm này, góp phần tạo nguồn dược liệu để sản xuất các sản phẩm có hoạt tính sinh học hỗ trợ điều trị bệnh, làm cơ sở cho các thử nghiệm tiếp theo về tác dụng sinh học của loại nấm dược liệu này.

ACUTE AND SUBCHRONIC ORAL TOXICITY OF Cordyceps miltaris EXTRACT Nguyen Pham Tuan1, Bang Hong Lam2, Nguyen Hoang Nam1, and Nguyen Thi Bao Tran2 An Giang Biotechnology center, Chau Thanh district, An Giang province An Giang University, Viet Nam Nation University, Ho Chi Minh City *Corresponding author: ngphamtuan1983@gmail.com Tel: +84.988202055 Abstract Cordyceps militaris fungal (C Miltaris) is an entomopathogenic fungus with many medicinal values similar to Cordyceps sinensis and has been used for a long time in traditional medicines Studies on “Acute and sub-chronic oral toxicity of Cordyceps miltaris extract" was conducted to evaluate the safety of C Miltaris mushroom cultured on artificial media and was a prerequisite for the production of products capable of supporting and treating diseases C Miltaris mushroom is made by immersion method with ethanol 80% and combined with ultrasound The acute and semi-chronic toxicities of C Miltaris were evaluated by the Litchfield - Wilcoxon‟s method on mice The results of acute toxicity study showed that C Miltaris with the maximum dose in white mice was 16.28 g/kg body weight of mice with a mortality rate of 0% after 72 hours The results of this study showed that, C Miltaris mushroom dose of 1.63 g/kg body weight of mice without any manifestations often about sub-chronic toxicity in mice for 60 days Hematological parameters, histology of liver, kidney mice in the mices test batches are not different compared with the control batch The results of the study showed that C Miltaris mushroom on artificial media is not cause acute and sub-chronic oral toxicity on experiment animals and is a potential source of raw materials for research and applications Keywords: acute toxicity, chronic toxicity, Cordyceps militaris 200 ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN CỦA CAO CHIẾT NẤM Cordyceps miltaris Nguyễn Phạm Tuấn1*, Bằng Hồng Lam2, Nguyễn Hoàng Nam1 Nguyễn Thị Bảo Trân Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang, huyện Châu Thành, tỉnh An Giang Trường Đại học An Giang, Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh *Tác giả liên hệ: ngphamtuan1983@gmail.com Số điện thoại: 0988.202055 Tóm tắt Nấm Cordyceps militaris (C Miltaris) loài nấm ký sinh trùng có giá trị dược liệu q tương tự nấm Cordyceps sinensis sử dụng nhiều y học cổ truyền nhiều năm qua Nghiên cứu “Độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao chiết nấm Cordyceps miltaris” thực nhằm đánh giá tính an tồn nấm C Miltaris nuôi cấy môi trường nhân tạo, làm tiền đề cho q trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh Cao chiết nấm C Miltaris chiết xuất theo phương pháp ngâm dầm với ethanol 80% kết hợp với sóng siêu âm Xác định độc tính cấp bán trường diễn nấm C Miltaris phương pháp Litchfield - Wilcoxon chuột nhắt trắng dòng Swiss Kết nghiên cứu độc tính cấp cho thấy, nấm C Miltaris với liều tối đa chuột nhắt trắng 16,28 g/kg thể trọng chuột có phân suất tử vong 0% sau 72 uống cao chiết ethanol nấm C Miltaris Kết độc tính bán trường diễn, nấm C Miltaris liều 1,63g/kg thể trọng chuột khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng sau 60 ngày cho uống cao chiết Các thông số huyết học, số sinh hóa thuộc chức gan - thận không sai khác với đối chứng Kết nghiên cứu cho thấy, nấm C Miltaris không gây độc tính cấp độc tính bán trường diễn mơ hình động vật thí nghiệm nguồn dược liệu tiềm cho nghiên cứu ứng dụng Từ khóa: Cordyceps militaris, độc tính cấp, độc tính bán trường diễn 201 Mở đầu Nấm dược liệu từ lâu phần quan trọng văn hóa văn minh nhân loại, đặc biệt loài chi Cordyceps đánh giá cao chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học Chi Cordyceps có hai lồi nghiên cứu nhiều có giá trị dược liệu giá trị kinh tế cao (Nguyễn Thị Liên Thương cs., 2016) C Miltaris (thường gọi nấm cam sâu bướm), chứa hợp chất sinh học tương tự C sinensis, dễ dàng ni trồng mơi trường nhân tạo (Dong et al., 2012) Quả thể nấm C Miltaris dùng làm thực phẩm, dùng hầm, súp, trà, nước Đơng Nam Á Hongkong, Đài Loan, Trung Quốc Lượng an toàn 2,5 g/kg thể Quả thể sinh khối nấm sử dụng làm thuốc bồi bổ sức khoẻ nước uống, viên nhộng, rượu, dấm, trà, yogurt, nước chấm (Wang et al., 2006) Các chế phầm từ nấm dùng trì chức thận, phổi, chống lão hóa, điều hịa giấc ngủ, điều trị viêm phế quản mãn tính (Das et al., 2010) Do có giá trị dược liệu, giá trị kinh tế cao việc nuôi trồng nấm C Miltaris quy mơ lớn có tính khả thi, đáp ứng nhu cầu thị trường nước chuyển giao công nghệ cho đơn vị sản xuất, góp phần phát triển kinh tế địa phương Xuất phát từ thực tế nêu trên, nghiên cứu ―Độc tính cấp độc tính bán trƣờng diễn cao chiết nấm Cordyceps miltaris‖ thực nhằm đánh giá tính an tồn nấm này, góp phần tạo nguồn dược liệu để sản xuất sản phẩm có hoạt tính sinh học hỗ trợ điều trị bệnh, làm sở cho thử nghiệm tác dụng sinh học loại nấm dược liệu Nguyên vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên vật liệu Mẫu nấm C Miltaris lưu giữ phịng Thí nghiệm Sinh hóa Trung tâm Cơng nghệ Sinh học tỉnh An Giang Hóa chất thiết bị gồm máy đo quang phổ (Human, Hàn Quốc), máy đông khô chân không (Christ, Đức), máy cô quay chân không (Eyala, Nhật Bản), peptone, MgSO4,… Chuột nhắt trắng chủng, dòng Swiss albino trưởng thành (5 tuần tuổi) cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, ổn định tuần trước thử nghiệm Chuột nuôi lồng nhựa, lồng 10 chuột Chuột nuôi thực phẩm viên (cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang), nước uống đầy đủ Thể tích cho chuột uống 20 mL/kg thể trọng chuột thử nghiệm độc tính cấp đường uống 10 ml/kg thể trọng chuột thử nghiệm độc bán trường diễn Thời gian cho chuột uống thuốc thử nghiệm khoảng - sáng 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Hoạt hóa ni trồng nấm Cordyceps miltaris Giống nấm C miltaris hoạt hóa mơi trường Potato Dextrose Agar (PDA) có bổ sung 1% peptone nhiệt độ 25 0C 5-7 ngày Quy trình ni trồng nấm C militaris mơi trường nhân tạo tiến hành dựa theo phương pháp Lê Văn Vẻ cs (2015), điều chỉnh để phù hợp với điều kiện thí nghiệm: Mơi trường Yeast magnesium Potassium (YMK) sử dụng để nhân giống dịch thể: 20 g/Lglucose; g/L cao nấm men; g/L KH2PO4; g/L MgSO4.7H2O nhiệt độ 250C, pH = 6,0, tốc độ lắc 150 vòng/phút, thời gian nhân giống 120 202 Chuẩn bị chất gạo lứt 20 g/keo để nuôi trồng, môi trường lên men Basal medium g/L peptone; g/L K2HPO4; 0,5 g/L MgSO4.7H2O; 10 g/L glucose mg/L vitamin B1 Các keo thí nghiệm chủng 30 mL mơi trường lên men, tiến hành hấp trùng, để nguội chủng 10 mL giống dịch thể nấm C militaris vào môi trường chuẩn bị sẵn Nấm C miltaris ni bình có kích thước × 10 cm với chất keo 25g, chế độ ươm chăm sóc thể theo quy trình Lê Văn Vẻ cs (2015) Các keo nấm ủ 200C 10-12 ngày, tránh ánh sáng để tơ nấm lan kín keo nấm Sau đó, keo nấm ni sốc nhiệt để kích thích tạo thể 250C với chu kỳ chiếu sáng/tối 14/10 (500 lux) 2.2.2 Phƣơng pháp tạo cao chiết từ nấm Cordyceps miltaris Nấm C miltaris nuôi trồng môi trường nhân tạo sau 60 ngày tiến hành thu phần thể phần giá thể Quả thể giá thể nấm C miltaris tiến hành đông khô máy đông khô chân không 96 giờ, nghiền mịn tiến hành trích ly với dung môi ethanol 80%, với tỷ lệ dược liệu dung mơi 1: 10 (v/v) có hỗ trợ sóng siêu âm Sau 72 giờ, tiến hành ly tâm với tốc độ 4.000 vòng phút 20 phút, thu dịch lọc bỏ phần cặn Phần dịch lọc lọc qua giấy lọc có đường kính 0,45 µm thu phần dịch bỏ phần bã Phần dịch tiến hành cô quay chân không để loại bỏ dung môi đông khô máy đông khô chân không thu cao chiết thô Cao chiết bảo quản nhiệt độ -200C 2.2.3 Khảo sát độc tính cấp đƣờng uống cao chiết nấm Cordyceps miltaris Chuột nhắt chia thành lô tương tự, chuột lô nhận liều chất khảo sát Sự đánh giá dựa vào phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) nhận thấy chuột nhóm sau 72 Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống để ghi nhận triệu chứn g bất thường (nếu có) 2.2.4 Khảo sát độc tính bán trƣờng diễn đƣờng uống cao chiết nấm C miltaris Dựa vào kết thử nghiệm độc tính cấp, khảo sát tính an tồn cao chiết nấm C miltaris liều tương ứng với khoảng 10 g dược liệu 1,63 g/kg thể trọng chuột (dựa kết liều Dmax = 16,28 g cao/kg thể trọng chuột Suy liều thử nghiệm tương đối an toàn DS dùng thực nghiệm dược lý 1/5 Dmax 1/10 Dmax Tiến hành thử nghiệm khảo sát độc tính bán trường diễn với liều 1/10 Dmax 1,63 g/kg) Mẫu thử nghiệm pha với nước cất cho chuột nhắt trắng uống với thể tích 10 mL/kg thể trọng chuột, liên tiếp 60 ngày với liều 1,63 g/kg Thực song song với lô chứng (chỉ uống nước cất) Lấy máu tĩnh mạch đuôi chuột xét nghiệm (lấy máu vào buổi sáng trước cho chuột ăn) (Viện Dược liệu, 2006) Chỉ tiêu theo dõi: Theo dõi thể trọng chuột: vào thời điểm trước thử nghiệm, sau tháng sau tháng; Các thông số huyết học (bạch cầu, hồng cầu, tiểu cầu); Các tiêu sinh hóa gan thận chuột (GOT, GPT, creatinin, urea); Trọng lượng tương đối gan, tim, thận 2.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu Số liệu thí nghiệm xử lý thống kê phần mềm Statgraphics plus 16.0 203 Kết thảo luận 3.1 Độc tính cấp đƣờng uống cao chiết nấm Cordyceps miltaris Cao nấm C miltaris khơng độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng, toàn chuột ăn uống sinh hoạt bình thường 72 quan sát Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống không ghi nhận triệu chứng bất thường (Bảng 1) Từ liều tối đa cho uống cao nấm C miltaris chuột nhắt trắng 16,28 g cao/kg thể trọng chuột có phân suất tử vong 0% khơng thể xác định LD50, xác định liều Dmax = 16,28 g cao/kg thể trọng chuột Suy liều thử nghiệm tương đối an tồn DS dùng thực nghiệm dược lý 1/5 Dmax 1/10 Dmax Tiến hành thử nghiệm khảo sát độc tính bán trường diễn với liều 1/10 Dmax 1,63 g/kg (tương ứng với khoảng 10 g dược liệu) Theo phân loại độc tính GHS (Globally Harmonised System for Classification of Chemicals), chất có giá trị LD50 > 5.000 mg/kg khối lượng thể, coi chất gần không độc Theo Kennedy et al (1986) cho rằng, cao chiết có giá trị LD50 cao 5g/kg đường uống xem không độc, nên cao chiết nấm C militaris khơng gây độc tính cấp Thử nghiệm giới hạn chủ yếu sử dụng trường hợp điều tra viên có thơng tin vật liệu thử nghiệm khơng độc hại có độc tính thấp (OECD, 2002) 3.2 Độc tính bán trƣờng diễn đƣờng uống cao chiết nấm Cordyceps miltaris Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn, chuột thử nghiệm chuột đực tuần tuổi, giai đoạn tăng trưởng phát triển để chuyển sang giai đoạn trưởng thành nên thể trọng chuột lô chứng lô uống cao C militaris 1,63 g/kg sau tháng thử nghiệm tăng so với trước thử nghiệm; đồng thời, tăng thể trọng lơ thử nghiệm khơng có khác biệt thống kê so với lô chứng cho thấy cao C militaris không ảnh hưởng đến thể trọng chuột thời gian cho uống Bảng 1: Kết đánh giá hành vi chuột 14 ngày khảo sát sau uống cao nấm Cordyceps miltaris liều Dmax Hệ thống quan Quan sát thử nghiệm Dấu hiệu chung Chuột vận động sinh hoạt ăn uống bình thường lồng ni Hệ thần kinh trung ương hệ Hành vi, vận động thần kinh vận động Khơng ghi nhận trạng thái bị kích động hay phản xạ thăng bằng, ngủ, hôn mê Phản ứng não tủy Không biểu bất thường sống Hệ thần kinh thực Trương lực vật Mắt-mũi Hệ hơ hấp Bình thường Bình thường Đặc tính tốc độ Nhịp thở bình thường, khơng ghi 204 nhận triệu chứng khó thở hay co giật khí quản Hệ tim mạch Dạ dày, ruột Dấu hiệu tim mạch Không ghi nhận triệu chứng bất thường nhịp tim Các triệu chứng Không ghi nhận triệu chứng tiêu chảy, táo bón Hình dáng bụng Khơng ghi nhận triệu chứng đau xoắn bụng Độ màu sắc Phân chuột bình thường phân Cơ quan sinh dục Dương vật Hồng hào trạng thái căng phồng Lông trắng mượt Da lơng Màu, tình trạng Khơng ghi nhận triệu chứng ửng đỏ da hay xù lơng Tình trạng chung Sự tăng trọng Trong ngưỡng sinh lý bình thường Phân tích thơng số huyết học có liên quan đến đánh giá rủi ro thay đổi hệ thống huyết học sinh hóa có giá trị dự báo cao độc tính (Olson et al., 2000) Vì khơng có tác dụng lên mức transaminase creatinine, số tốt cho gan chức thận; điều cho thấy cao C militaris không gây hại cho gan thận thực tế khơng có ảnh hưởng đáng kể đến nồng độ cholesterol huyết tương (Giknis and Clifford, 2008) chức bình thường gan (Hilaly et al., 2004) Trọng lượng chuột lô chứng cho uống nước cất lô thử cho uống cao C militaris thời điểm sau tháng (30,3±1,62 40,40±0,45 g) khác biệt có ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (23,50±0,73 g) Ở thời điểm sau tháng, thể trọng chuột cho uống cao C militaris không khác biệt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (40,80±1,55 g) (Bảng 2) Số lượng hồng cầu lô chứng lô thử uống cao C militaris thời điểm sau tháng khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm Đồng thời, số lượng hồng cầu lô thử nghiệm thời điểm thử nghiệm sau tháng (9,12±0,25 9,94±0,27) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (9,21±0,21 9,76±0,29) thời điểm khảo sát (Bảng 2) Hàm lượng hemoglobin lô chứng lô chuột uống cao C militaris thời điểm sau tháng (15,04 ±0,32 15,69±0,27 (g/dL) khác biệt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (15,09±0,2 15,31±0,24) (g/dL) (Bảng 2) Hàm lượng hematocrit lô chứng uống nước cất lô thử nghiệm uống cao C militaris thời điểm sau tháng (49,01±0,95 51,62±1,01 (Hct) (%)khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (48,80±0,69 50,46±0,97) (Hct) (%) (Bảng 2) 205 Số lượng tiểu cầu lô chứng thời điểm sau tháng (952,40±121,27 923,44±52,80) (103 tế bào/µL) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (919,40 ± 51,26 860,60 ± 98,47 (103 tế bào/µL)) Đồng thời, số lượng tiểu cầu lô thử nghiệm uống cao C militaris giảm, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm sau tháng thử nghiệm (Bảng 2) Số lượng bạch cầu lô chứng lô chuột uống cao C militaris thời điểm sau tháng tăng không đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (10,84±0,81 11,64±0,93) (K tế bào/µL) Số lượng bạch cầu lô chứng lô chuột uống cao C militaris thời điểm sau tháng tăng đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (10,92±1,14 8,75±0,93 (K tế bào/µL) Điều lý giải lấy máu nhiều lần làm cho chế miễn dịch thể tăng làm cho số lượng bạch cầu tăng lên lô chứng lô thử nghiệm Đồng thời, số lượng bạch cầu lô thử nghiệm không khác biệt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 2) Thể tích trung bình hồng cầu lô chứng (51,92±0,59; 53,15±0,78 51,92±0,90) (MCV) (fL) lơ thử khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm trước sau thử nghiệm tháng (51,07±0,73; 53,91±0,75 51,61±1,15 MCV) (fL) (Bảng 2) Thể tích trung bình hồng cầu lơ uống cao C militaris giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm trước thử nghiệm tháng, nằm giới hạn bình thường Chỉ số huyết sắc tố trung bình hồng cầu lô chứng (16,11±0,21; 16,44±0,26 15,76±0,37 (MCH) (pg) lô thử (15,8 ±0,22; 16,52±0,17 15,82 ±0,27 (MCH)n(pg khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm trước sau thử nghiệm tháng (Bảng 2) Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu lô chứng (31,02±0,17; 30,93±0,15 30,35±0,27) (MCHC) (g/dL) lơ thử (31,13±0,31; 30,68±0,34 30,39±0,15 (MCHC) (g/dL) khơng có khác biệt thống kê thời điểm trước sau thử nghiệm tháng (Bảng 2) Bảng 2: Trọng lƣợng thông số huyết học chuột thử nghiệm độc tính bán trƣờng diễn Trọng lượng chuột (g) Liều (g/kg) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 23,50 ± 0,85 27,50 ± 0,96* 40,80 ± 1,55** Cao nấm C miltaris 1,63 23,50 ± 0,73 30,3 ± 1,62* 40,40 ± 0,45 ** Lô (N=10) Số lượng hồng cầu (M/UL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 9,41 ± 0,23 9,21 ± 0,21 9,76 ± 0,29 Cao nấm C 1,63 9,59 ± 0,25 9,12 ± 0,25 9,94 ± 0,27 206 miltaris Huyết sắc tố (g/dL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 15,14 ± 0,3 15,09 ±0,2 15,31 ± 0,24 Cao nấm C miltaris 1,63 15,21 ± 0,38 15,04 ± 0,32 15,69 ± 0,27 Thể tích khối hồng cầu (Hct) (%) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 48,82 ± 1,07 48,80 ± 0,69 50,46 ± 0,97 Cao nấm C miltaris 1,63 48,84 ± 0,97 49,01 ± 0,95 51,62 ± 1,01 Tiểu cầu (103 tế bào/µL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 685,00 ± 42,47 919,40 ± 51,26 860,60 ± 98,47 Cao nấm C miltaris 1,63 853,33 ± 94,90 952,40 ± 121,27 923,44 ± 52,80 Bạch cầu (K tế bào/µL) Chứng - Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Cao nấm C miltaris 1,63 7,96 ± 1,22 10,84 ± 0,81 10,92 ± 1,14* 8,25 ± 0,75 11,64 ± 0,93 8,75 ± 0,93* Thể tích trung bình hồng cầu (MCV) (fL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 51,92 ± 0,59 53,15 ± 0,78 51,92 ± 0,90 Cao nấm C miltaris 1,63 51,07 ± 0,73 53,91 ± 0,75* 51,61 ± 1,15 Huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH)(pg) Trước thử nghiệm 207 Sau tháng Sau tháng Chứng - 16,11 ± 0,21 16,44 ± 0,26 15,76 ± 0,37 Cao nấm C miltaris 1,63 15,88 ± 0,22 16,52 ± 0,17* 15,82 ± 0,27 Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCHC) (g/dL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 31,02 ± 0,17 30,93 ± 0,15 30,35 ± 0,27* Cao nấm C miltaris 1,63 31,13 ± 0,31 30,68 ± 0,34 30,39 ± 0,15 Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,001 Hàm lượng GOT lô chứng (39,60 ± 1,56; 41,10 ± 2,13 35,33 ± 1,61 (IU/L)) lô thử uống cao C militaris liều 1,63 g/kg sau thử nghiệm tháng (49,20 ± 6,09; 42,90 ± 3,21 38,44 ± 3,42 (IU/L)) khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm Hàm lượng GOT lô thử uống cao C militaris liều 1,63 g/kg sau thử nghiệm tháng khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 3) Bảng Các tiêu sinh hóa gan thận chuột thử nghiệm độc tính bán trƣờng diễn Lô (n=10) Liều (g/kg) Hàm lượng GOT (IU/L) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 39,60 ± 1,56 41,10 ± 2,13 35,33 ± 1,61 Cao nấm C miltaris 1,63 49,20 ± 6,09 42,90 ± 3,21 38,44 ± 3,42 Hàm lượng GPT (IU/L) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 56,30 ± 4,50 51,33 ± 3,27 49,33 ± 5,85 Cao nấm C miltaris 1,63 53,10 ± 3,13 48,20 ± 2,80 45,44 ± 2,05 Hàm lượng Protein (g/dL) Trước thử 208 Sau tháng Sau tháng nghiệm Chứng - 3,04 ± 0,11 3,84 ± 0,07** 5,03 ± 0,11** Cao nấm C miltaris 1,63 3,12 ± 0,15 3,97 ± 0,15** 4,96 ± 0,14** Hàm lượng Creatinin (mg/dL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 0,85 ± 0,14 0,55 ± 0,06 0,72 ± 0,03 Cao nấm C miltaris 1,63 0,93 ± 0,05 0,63 ± 0,07* 0,58 ± 0,02**# Hàm lượng Urea (mg/dL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 48,26 ± 1,94 45,26 ± 4,54 51,38 ± 1,64* Cao nấm C miltaris 1,63 42,56 ± 2,13 40,82 ± 2,32 51,27 ± 1,32* Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,001 Hàm lượng GPT lô chứng (56,30±4,50; 51,33±3,27 49,33±5,85 (IU/L)) lô thử uống cao C militaris liều 1,63 g/kg sau thử nghiệm tháng khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (53,10±3,13; 48,20±2,80 45,44±2,05) (IU/L) Hàm lượng GPT lô thử uống cao C militaris liều 1,63 g/kg sau thử nghiệm tháng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 3) Hàm lượng protein lô chứng (3,84±0,07 5,03±0,11) (g/dL) lô thử nghiệm cho uống cao Đông trùng hạ thảo liều 1,63 g/kg sau tháng (3,97±0,15 4,96±0,14) (g/dL) có tăng đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm Đồng thời, hàm lượng protein lô thử nghiệm thời điểm sau tháng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 3) Hàm lượng creatinin lô chuột uống cao C Militaris liều 1,63 g/kg thời điểm trước thí nghiệm, sau tháng (0,93±0,05 0,63±0,07) (mg/dL) khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý thời điểm khảo sát (0,85±0,14 0,55±0,06) (mg/dL) Tuy nhiên thời điểm sau tháng, lô thử uống Đông trùng hạ thảo liều 1,63 g/kg có giảm khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với chứng sinh lý (0,58±0,02 0,72±0,03) (mg/dL) (Bảng 23) Hàm lượng creatinin lô thử nghiệm giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô thử trước thử nghiệm thời điểm sau 209 tháng thử nghiệm Tuy nhiên, hàm lượng creatinin nằm giới hạn bình thường số (0,5-0,8 mg/dL) Hàm lượng urea lô chứng lô thử sau tháng cho uống cao Đông trùng hạ thảo liều 1,63 g/kg khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (45,26±4,54 40,82±2,32) (mg/dL) Hàm lượng urea lô chứng lô thử nghiệm sau tháng cho uống cao C militaris liều 1,63 g/kg có tăng đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm (51,38 ±1,64 51,27±1,32) (mg/dL) Tuy nhiên, giá trị nằm giới hạn bình thường của số Đồng thời, hàm lượng urea lô thử nghiệm thời điểm sau tháng khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 3) Bảng Kết Hàm lƣợng triglycerid, trọng lƣợng tƣơng đối gan, tim, thận chuột uống cao nấm C miltaris sau 60 ngày thử nghiệm Lô (n=10) Liều (g/kg) Hàm lượng Triglycerid (mg/dL) Trước thử nghiệm Sau tháng Sau tháng Chứng - 72,10 ± 4,68 98,50 ± 4,51** 99,56 ± 6,44** Cao C miltaris 1,63 68,10 ± 2,95 86,2 ± 4,54* 106,33 ± 6,60** Trọng lượng tương đối quan gan, tim, thận Gan Tim Thận Chứng - 4,23 ± 0,15 0,40 ± 0,02 0,84 ± 0,04 Cao C miltaris 1,63 3,96 ± 0,16 0,43 ± 0,03 0,87 ± 0,02 Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,001 Hàm lượng triglycerid lô chứng lô thử nghiệm cho uống cao C militaris sau tháng có gia tăng đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm Mặc dù lô chứng (98,50±4,51 99,56±6,44) (mg/dL) lô thử nghiệm thời điểm sau tháng thử nghiệm (86,2±4,54 106,33±6,60) (mg/dL), hàm lượng triglycerid tăng đạt ý nghĩa thống kê so với trước thử nghiệm giới hạn bình thường Đồng thời, hàm lượng triglycerid lô thử nghiệm thời điểm sau tháng khơng có khác biệt thống kê so với lô chứng thời điểm khảo sát (Bảng 4) Phân tích đánh giá phận nội tạng nhóm chuột điều trị với liều cao lơ đối chứng cho thấy kiến trúc bình thường, khơng có thay đổi bất lợi rối loạn hình thái gây cách cho uống cao chiết nấm C militaris sau 60 ngày uống cao chiết (Silva et al., 2011) Liều uống liều 1,63 g/kg chiết nấm C militaris sau 60 liên tiếp không gây độc tính bán trường diễn chuột thử nghiệm thơng số huyết học, tiêu sinh hóa… nằm giới hạn bình thường Theo Giknis and Clifford (2008); khơng có dấu hiệu giải phẫu đáng ý quan sát, 210 định nghĩa mức NOAEL không quan sát (NOAEL) chuột điều kiện thực nghiệm sử dụng Trọng lượng tương đối gan, tim, thận lô chứng (4,23±0,15; 0,40±0,02 0,84±0,04 (g%)) lô uống cao C militaris sau tháng (3,96±0,16; 0,43±0,03 0,87±0,02 (g%) khác biệt đạt ý nghĩa thống kê Sau thời gian tháng cho uống cao C militaris với liều 1,63 g/kg không làm ảnh hưởng lên cấu trúc vi thể gan thận chuột so với lô chứng Kết luận Cao chiết nấm C miltaris an toàn qua thử nghiệm độc tính cấp độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng, với liều lượng chuột nhắt trắng 16,28 g cao/kg thể trọng chuột có phân suất tử vong 0% Cao chiết nấm C miltaris với liều 1,63 g/kg sau tháng cho uống khơng có biểu bất thường thể qua thơng số huyết học, sinh hóa… giới hạn bình thường Lời cảm ơn Nhóm nghiên cứu xin chân thành cảm ơn Sở khoa học công nghệ tỉnh An Giang Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang hỗ trợ tạo điều kiện để nhóm nghiên cứu thực Tài liệu tham khảo Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, NXB Y học, Hà Nội, 7-24 Nguyên Thị Liên Thương, Trịnh Diệp Phương Danh Nguyễn Văn Hiệp 2016 Nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris: đăc điểm sinh học, giá tri dược liệu yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni trồng nấm Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 44: 9-22 Dong, J.Z., Lei, C and Ai, X.R (2012) Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components Applied Biochemistry and Biotechnology 166: 1215-1224 Wang, J.F and Yang, C.Q (2006) Research survey on artificial cultivation and product development of Cordyceps militaris Lishizhen Medicine And Material Medical Research 17: 268-269 Das, S.K., Masuda, M and Mikio, S (2010) Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: current state and prospects Fitoterapia 81: 961-968 Lê Văn Vẻ, Trần Thu Hà, Nguyễn Thị Bích Thùy Ngơ Xn Nghiễn (2015) Bước đầu nghiên cứu công nghệ nuôi trồng Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris L ex Fr.) Việt Nam Tạp chí Khoa học Phát triển, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam, 13 (3): 445-454 Viện Dược Liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, trang 311-320, 355-368, 377-387 211 Chen, X., Liu, H., Wang, J.F and Chen, C.Y (2006) Database of traditional Chinese medicine and its application to studies of mechanism and to prescription validation British Journal of Pharmacology, 149: 1092-1103 Kennedy, G.L., Ferenz, R.L and Burgess, B.A (1986) Estimation of acute oral toxicity in rats by determination of the approximate lethal dose rather than the LD 50 J Appl Toxicol 6: 145-148 OECD (2002) OECD Guidelines for the Testing of Chemicals Section 4: Health Effects Test No 423: Acute Oral Toxicity Acute Toxic Class Method Paris, France: Organization for Economic Cooperation and Development Olson, H., Betton, G., Robinson, D., Thomas, K., Monro, A., Kolaja, G., Lilly, P., Sanders J, Sipes G., Bracken W., Dorato M., Deun K.V., Smith P., Berger B and Heller, A (2000) Concordance of toxicity of pharmaceuticals in humans and in animals Regul Toxicol Pharmacol 32: 56-67 Giknis, M.L.A and Clifford, C.B (2008) Clinical Laboratory Parameters for Crl: WI (Han) Rats Charles River Laboratory, pp 17 Hilaly, J.E., Israili Z.H and Lyoussi B (2004) Acute and Chronic Toxicological Studies of Ajuga Iva in Experimental Animals J Ethnopharmacol, 91 (1) :43-50 212 ... tự nấm Cordyceps sinensis sử dụng nhiều y học cổ truyền nhiều năm qua Nghiên cứu ? ?Độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao chiết nấm Cordyceps miltaris? ?? thực nhằm đánh giá tính an tồn nấm C Miltaris. .. vong 0% sau 72 uống cao chiết ethanol nấm C Miltaris Kết độc tính bán trường diễn, nấm C Miltaris liều 1,63g/kg thể trọng chuột khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng... nghiên cứu ? ?Độc tính cấp độc tính bán trƣờng diễn cao chiết nấm Cordyceps miltaris? ?? thực nhằm đánh giá tính an tồn nấm này, góp phần tạo nguồn dược liệu để sản xuất sản phẩm có hoạt tính sinh học