Xác định sự đề kháng kháng sinh và gene độc lực của Clostridium perfringens trong viêm ruột hoại tử trên gà

Bài viết Xác định sự đề kháng kháng sinh và gene độc lực của Clostridium perfringens trong viêm ruột hoại tử trên gà được nghiên cứu với mục tiêu là xác định mức độ hiện diện của Clostridium perfringens đồng thời đánh giá khả năng đề kháng kháng sinh và một số gene độc lực của các chủng C. perfringens phân lập từ gà có triệu chứng lâm sàng của bệnh viêm ruột hoại tử.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 XÁC ĐỊNH SỰ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH VÀ GENE ĐỘC LỰC CỦA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TRONG VIÊM RUỘT HOẠI TỬ TRÊN GÀ Trần Thị Quỳnh Lan1 Đặng Thị Tuyết2 Tóm tắt Mục tiêu nghiên cứu xác định mức độ diện Clostridium perfringens đồng thời đánh giá khả đề kháng kháng sinh số gene độc lực chủng C perfringens phân lập từ gà có triệu chứng lâm sàng bệnh viêm ruột hoại tử (VRHT) Tổng cộng 210 mẫu ruột (130 mẫu lấy từ 13 trại gà thịt 80 mẫu lấy từ sở giết mổ) để phân lập định danh vi khuẩn C perfringens Kiểu hình đề kháng kháng sinh C perfringens xác định kháng sinh đồ gene độc lực xác định kỹ thuật PCR Clostridium spp diện 51,4% (Clostridium spp phát mẫu ruột lấy từ trại lấy sở giết mổ mức 50% 53,75% C perfringens nhiễm mẫu lấy trại mức 7,69% mẫu lấy CSGM mức 6,25% C perfringens đề kháng mức 73 - 100% với nhiều kháng sinh amoxicillin, ampicillin, penicillin, doxycyclin, gentamycin, florfenicol, licomycin-spectinomycin enrofloxacin 100% chủng C perfringens phân lập đề kháng từ loại kháng sinh trở lên ceftiofur kháng sinh hiệu 73% số gốc C perfringens phân lập Clostridium perfringens phân lập thuộc type A (mang gene sinh độc tố alpha) type C (mang gene sinh độc tố alpha beta) diện 26,7 % 6,67 % số gốc phân lập Khơng có gốc vi khuẩn C perfringens mang gene sinh độc tố NetB 60% phân lập C perfringens chưa xác định kiểu gene sinh độc tố Từ khóa: đề kháng kháng sinh, gene độc lực, gốc phân lập, viêm ruột hoại tử IDENTIFICATION OF ANTIBIOTIC RESISTANCE AND VIRULENCE GENES OF CLOSTRIDIUM PERFRINGENS ASSOCIATED WITH NECROTIC ENTERITIS IN BROILER CHICKENS Abstract The aim of study was to identify the level presence of Clostridium perfringens in broiler chicken farms and slaughterhouses) at the same time assess antibiotic resistance and virulence genes of C perfringens isolated from broiler chickens presented clinical signs of necrotic enteritis A total of 210 samples (130 samples from 13 broiler chicken farms and 80 samples from slaughterhouses) were analyzed by isolation and identification process for the presence of C perfringens The antibiotic resistance phenotype of C perfringens was determined by disk diffusion susceptibility testing and PCR technique was applied to detect virulence genes Clostridium spp presented in 51.4% (Clostridium spp isolated from farms and slaughterhouses was present at 50% and 53.75%) C perfringens infected on samples aggregated from poultry farms and slaughterhouses were of 7.69% and 6.25%, respectively The antibiotic resistance of C perfringens was ranged from 73% to 100% with many antibiotics such as amoxicillin, ampicillin, penicillin, doxycycline, gentamycin, florfenicol, lincomycin- spectinomycin and enrofloxacin All C perfringens isolates were resistant to more than antibiotics and 73% of C perfringens isolates were sensitive to ceftiofur C perfringens type A (carrying the alpha toxin gene) and C perfringens type C (carrying the alpha and beta toxin) were presented in 26.7% and 6,67 % of isolates No C perfringens isolate was carrying the netB gene and more than 60% of C perfringens isolates could not be determined virulence gene type Key words: Antibiotic resistance, virulence genes, isolate, necrotic enteritis Khoa Chăn nuôi Thú y, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh; Chi cục Thú y Thành phố Hồ Chí Minh; * Tác giả liên hệ: Trần Thị Quỳnh Lan, Email: lan.tranthiquynh@hcmuaf.edu.vn; ĐT: 02838961711 1071 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 ĐẶT VẤN ĐỀ Clostridium perfringens (C perfringens) nhiễm gà liên quan đến nhiều thể bệnh thường xảy trại chăn nuôi đặc biệt sau gà nhiễm cầu trùng kết hợp với yếu tố mở đường liên quan đến thức ăn bệnh cầu trùng So với vi khuẩn đường ruột khác, khả sản xuất đa dạng độc tố yếu tố độc lực quan trọng định type C perfringens đưa đến thể bệnh khác gà (Shojadoost cs., 2012) Viêm ruột hoại tử gà thể bệnh quan trọng thường C perfringens type A type C gây (Svobodova cs., 2007) Kiểm soát bệnh C perfringens nói chung bệnh viêm ruột hoại tử gà nói riêng chủ yếu dùng kháng sinh bổ sung thức ăn, điều giúp hạn chế ca bệnh lâm sàng lại làm tăng thể cận lâm sàng đưa đến giảm sức tăng trưởng tăng tiêu tốn thức ăn (Mot cs., 2014) Mặt khác, sử dụng kháng sinh thức ăn chăn nuôi nguyên nhân gây đề kháng kháng sinh vật nuôi Ngành chăn nuôi Việt Nam thực lộ trình giảm dần tiến tới khơng sử dụng kháng sinh bổ sung thức ăn chăn nuôi năm tới Đây tiền đề để bệnh viêm ruột hoại tử xuất thường xuyên (Gholamiandehkordi, 2009) gây thiệt hại kinh tế cho người chăn ni gia cầm, từ gián tiếp làm tăng nguy gây ngộ độc thực phẩm người sử dụng thịt gà nhiễm khuẩn Tại Việt Nam, nghiên cứu C.perfringens gà chủ yếu ghi nhận tỷ lệ nhiễm Khảo sát Vĩnh Phúc cho thấy tỷ lệ nhiễm C perfringens gà từ - tháng tuổi khoảng 6%, giống gà nhiễm bệnh cao gà Lương Phượng (8,31%), chủng C perfringens phân lập thuộc type A (20%) type C (80%) (Hồng Văn Lân Thanh, 2012) Trong Nha Trang tỷ lệ nhiễm C perfringens gà khỏe mức 50% tỷ lệ diện gà bệnh viêm ruột hoại tử cao với 63,67% (Lại Nhật Linh, 2012) 1072 Những nghiên cứu cho thấy vấn đề cần làm rõ diện C perfringens loại gà nuôi hướng thịt, phân bố type C perfringens gà thịt yếu tố độc lực liên quan đến biểu lâm sàng Mục tiêu nghiên cứu xác định mức độ diện C perfringens đồng thời đánh giá khả đề kháng kháng sinh C perfringens phân lập từ mẫu ruột lấy trại gà thịt sở giết mổ Một số gene sinh độc tố alpha (gene cpa), beta (gene cpb) NetB (gene netB) liên quan đến khả gây bệnh viêm ruột hoại tử gà thịt xác định diện từ chủng C perfringens phân lập nghiên cứu VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Mẫu lấy 13 trại gà CSGM thuộc TP.HCM số tỉnh phía nam Trại gà khảo sát thuộc khu vực có mật độ chăn ni cao, ni gà thịt thả vườn từ đến tuần tuổi có quy từ 1.000 - 3.000 Gà lấy mẫu có dấu hiệu ủ rũ, xù lơng, giảm ăn, phân sáp phân lỏng (có thể lẫn máu chất nhầy) CSGM lấy mẫu có cơng suất giết mổ khoảng 10.000 gà/đêm Đối với gà trại lấy mẫu ruột mổ khám để quan sát bệnh tích thu thập chất chứa bên ruột Tại CSGM mẫu lấy giai đoạn tách lòng dây chuyền giết mổ lấy phần ruột gà giết mổ Phần ruột sau bảo quản lạnh - 8oC vận chuyển phịng thí nghiệm Mẫu ruột cắt dọc kéo vơ trùng ruột để bộc lộ lịng ruột, sau dùng que tăm bơng vơ trùng cạo lấy hết chất chứa có bên ruột, chất chứa sau đồng NaCl 0,9% ủ mẫu 70oC/15 phút Nuôi cấy phân lập C perfringens thực theo quy trình ni cấy phân lập TCVN 8400:28-2014 kết hợp với quy trình phịng thí nghiệm ISARA (Lyon, Pháp) Phương pháp kháng sinh đồ (Kirby Bauer) dựa phản ứng khuyếch tán thạch Mueller Hinton Agar (CLSI, 2012) sử dụng đánh giá đề kháng kháng sinh HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 C perfringens với 10 loại kháng sinh Đường phân tích điện di gel agarose kính vịng vơ khuẩn gốc vi khuẩn 1,5% dung dịch đệm TBE 0,5X Thời đối chiếu với đường kính vịng vơ khuẩn gian điện di 30 - 35 phút/100V /250mA Hình chuẩn (NCCLS, 1999) để đánh giá mức độ ảnh gel chụp hệ thống Biorad UV đáp ứng vi khuẩn (nhạy cảm, nhạy cảm 2000 trung gian đề kháng) với loại kháng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN sinh Xác định mức độ diện Clostridium Ly trích DNA từ gốc C perfringens với 1ml huyễn dịch vi khuẩn môi trường spp C perfringens Clostridium spp diện mẫu BHI với kit Thermo Scientific GeneJET DNA Phát gen độc lực PCR ruột mức 50% gà trại tương dựa vào đoạn mồi đặc hiệu cho gene cpa (độc đồng với nghiên cứu Mirhosseini (2010) tố alpha) kích thước 402 bp (Osman cs., tác giả ghi nhận có 65,625% 59,375% 2012), gene cpb (độc tố beta) kích thước 236 mẫu phân lập từ gà (2 tuần tuổi tuần tuổi) bp (Osman cs., 2012) cho gen netB (độc có diện Clostridium spp Trong tố NetB) kích thước 384 bp (Tolooe cs., 53,75% mẫu gà lấy CSGM có 2011) Chu trình nhiệt cho gene cpa cpb: diện Clostridium spp Nghiên cứu tiền biến tính 95oC/5 phút trì 72oC/3 cho thấy 46,15% trại khảo sát có phút, khuyếch đại 30 chu kỳ (biến tính 94oC/1 diện C perfringens mẫu phân phút, bắt cặp mồi vào khuôn 55oC/1 phút, lập (Bảng 1) Kết khảo sát thấp kéo dài 72oC/1 phút) Chu trình nhiệt cho so với nghiên cứu thực đàn gene netB: tiền biến tính 94°C/2 phút; 35 chu gà - tuần tuổi châu Âu (73,9% số trại kỳ (94oC/30 giây, 55°C 30 giây, 72°C khảo sát Cộng hòa Czech 90% trại 60 giây kéo dài 72°C 12 khảo sát Ý có diện C perfringens) phút) Sản phẩm PCR sau khuyếch đại (Svobodova cs., 2007) Bảng Tỷ lệ diện Clostridium spp C perfringens Clostridium spp C perfringens Khu vực Số lượng Hiện diện Tỷ lệ (%) Hiện diện Tỷ lệ (%) Trại 13 12 92,31 46,15 Số mẫu 130 65 50 10 7,69 CSGM 2 100 50 Số mẫu 80 43 53,75 6,25 Nghiên cứu cho thấy 7,69% số mẫu phân lập lấy từ trại gà có triệu chứng lâm sàng có diện C perfringens (Bảng 1) Nghiên cứu Cộng hòa Czech Ai Cập mẫu gà khỏe khơng có triệu chứng lâm sàng cho thấy tỷ lệ nhiễm C perfringens mức 18,39% 35,4 %, kết cao so với kết khảo sát (Svobodova cs., 2007; Osman cs., 2012) C perfringens thường diện mức độ thấp gà khoẻ cao gà có triệu chứng lâm sàng điển hình bệnh VRHT Nghiên cứu cho thấy C perfringens diện với tỷ lệ 100% gà thịt gà giống có triệu chứng lâm sàng VRHT (gà ủ rũ, lông xù, tiêu chảy có tổn thương rõ ràng ruột non) (Osman cs., 2012), có trường hợp 75 - 95% gà khảo sát nhiễm C perfringens tỷ lệ nhỏ gà có biểu lâm sàng VRHT (Svobodova cs., 2007) Tỷ lệ C perfringens thấp báo cáo trước nghiên cứu thực trại có quy mô nhỏ (1.000 - 3.000 con) với giống gà ta nội địa, nghiên 1073 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 cứu nước thực trang trại công nghiệp nuôi với số lượng lớn với giống gà công nghiệp nên tốc độ tăng trưởng nhanh khả đề kháng với mầm bệnh Sự diện C perfringens đường ruột chưa đủ để bệnh VRHT phát sinh (ngay vi khuẩn diện với số lượng cao) mà phụ thuộc vào yếu tố độc lực Gà bị VRHT có số lượng C perfringens cao (106 108 CFU/g dịch ruột), gà khỏe mạnh có số lượng C perfringens thấp (100105 CFU/g dịch ruột) (Trích dẫn Timbermont cs., 2011) Mặt khác, 100% trại sử dụng kháng sinh thức ăn nước uống với mục đích tăng trọng phòng bệnh ức chế phát triển hệ vi sinh đường ruột có C perfringens, điều gây khó khăn cho việc phân lập vi khuẩn nên làm giảm tỷ lệ phát C perfringens phân lập mức 6,25% hai CSGM cảnh báo khả lây nhiễm vi khuẩn từ đường ruột sang quầy thịt gà liên quan đến ngộ độc thực phẩm người Mặc dù phát lô gà đưa vào giết mổ thực tế cho thấy nước có quy trình giết mổ đại thường xảy đợt ngộ độc thực phẩm C perfringens (Guran Oksuztepe, 2013; M’Sadeq cs., 2015) 3.1 Khả đề kháng kháng sinh gốc C perfringens phân lập Bảng Đề kháng kháng sinh gốc C perfringens Số mẫu đề kháng/ Tổng số mẫu Tỷ lệ (%) Amoxicillin/Ampicilin/Penicillin 11/11 100 Doxycyclin/Colistin sulfat/Florfenicol 11/11 100 Gentamicin 10/11 91 Lincomycin+ spectinomycin 8/11 73 Enrofloxacin 8/11 73 Ceftiofur 2/11 18 Kháng sinh Các kháng sinh sử dụng xác định đề kháng kháng sinh (amoxicillin, ampicillin, colistin, doxycyclin, enrofloxacin, florfenicol, gentamicin) dùng thường xuyên trại khảo sát với mục đích phịng bệnh bị C perfringens đề kháng mức cao (73 - 100%) Việc sử dụng kháng sinh dựa vào kinh nghiệm người chăn ni mà thiếu chẩn đốn phịng thí nghiệm nguy gây kháng thuốc Chỉ ceftiofur cho thấy hiệu C perfringens tỷ lệ đề kháng mức 18% (Bảng 2) 3.2 Xác định số gene sinh độc tố từ chủng C perfringens phân lập Độc tố C perfringens nguyên nhân gây triệu chứng bệnh tích xâm nhiễm vi khuẩn Có hai nhóm độc tố: độc tố (chủ yếu) độc tố phụ (thứ 1074 yếu) Độc tố gồm độc tố alpha (α), beta (β), ε (epsilon) ι (iota) Những độc tố tác nhân gây chết, hoại tử gà Trong độc tố phụ bao gồm theta (θ), kappa (κ), lambda (λ), mu, nu toxins, neuraminidase, sialidase, enterotoxin, non-alpha-delta-theta hemolysin (Elsify, 2015) Tuy nhiên bệnh C perfringens gà thường liên quan đến độc tố alpha (C perfringens type A C) độc tố beta (C perfringens type C) độc tố NetB C perfringens type A sản sinh liên quan đến ca bệnh VRHT gà (Llanco, 2012) Chính lý mà nghiên cứu tập trung phát gene quy định khả sản sinh ba độc tố: alpha (gene cpa), beta (gene cpb) NetB (gene netB) chủng C perfringens phân lập từ ca bệnh nghi VRHT HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 Bảng Sự diện gene độc tố từ gốc C perfringens phân lập Gene Số gốc C perfringens Số gốc mang gene (+) Tỷ lệ (%) gene (+) Tỷ lệ (%) chung Trại CSGM Trại CSGM Trại CSGM cpa 10 40 25 33,33 cpb 10 - 10 - 6,67 netB 10 - - - - - Kết nghiên cứu cho thấy gene cpa quy định khả sinh độc tố alpha xuất với tần suất cao (33,33%) so với hai gene cpb (6,67%) netB (không diện) (Bảng 3) Độc tố alpha sản sinh từ tất chủng C perfringens diện thường xuyên tất C perfringens type A; type A type phổ biến thường phân lập gà khoẻ gà bệnh VRHT (Brady cs., 2010) Tuy nhiên, nghiên cứu số nước Canada, Thuỵ Điển, Ấn Độ, Ai Cập Algeria cho thấy gene cpa thường diện 100% chủng C perfringens phân lập từ gà bệnh VRHT thể lâm sàng (Khairy cs., 2013; Salah-Eldin cs., 2015; Merati cs., 2017) Tỷ lệ diện gene cpa cao so với gene cpb bước đầu cho thấy type A type phổ biến C perfringens phân lập từ gà Gene quy định khả sản sinh độc tố alpha xem yếu tố độc lực bệnh VRHT gà gà nhạy cảm với độc tố alpha khoảng 200 lần độc tố beta epsilon (Khairy cs., 2013) Trong nghiên cứu này, gene cpa phát đồng thời chủng C perfringens phân lập từ gà có biểu cận lâm sàng (4/10 gốc C perfringens) mẫu phân lập từ gà CSGM (1/5 gốc C perfringens) Như diện gene cpa yếu tố độc lực quan trọng bệnh lý VRHT cần có yếu tố mở đường mà quan trọng tổn thương niêm mạc ruột (Llanco cs., 2012) Bảng Hiện diện C perfringens theo khả sinh độc tố (genotype) Type A C Gene Mẫu dương Tỷ lệ (%) cpa 4/15 26,7 cpa + netB - - cpa + cpb 1/15 6,67 6,67% gốc C perfringens mang gene cpb quy định khả sinh độc tố beta đồng thời mang gene cpa quy định khả sinh độc tố alpha, có 26,7% gốc C perfringens thuộc type A 6,67% thuộc type C (Bảng 4) Đây type phổ biến thường liên hệ với VRHT gà (Llanco, 2012; Elsify, 2015) Gốc C perfringens mang gene cpb cpa (type C) phân lập từ gà tuần tuổi với tỷ lệ chết trại khoảng 3%, gà có triệu chứng tiêu chảy (phân lỏng nhầy) Sự diện C perfringens type C có ý nghĩa dịch tễ bệnh VRHT đa số khảo sát nước, type C thường không phát nhiễm gà nhiễm với tỷ lệ thấp so với type A (EI-Jakee cs., 2013) Kết cần ghi nhận tiếp tực khảo sát nghiên cứu để làm sở đánh giá lưu hành type C perfringens chẩn đoán điều trị bệnh VRHT gà 1075 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 Độc tố NetB phát gần chứng minh yếu tố độc lực chìa khố dòng C perfringens gây VRHT gà (Keyburn cs, 2010) Độc tố tạo lỗ thủng làm hư hại màng đôi phospholipid tế bào ruột gây tràn vào ion (Na+, Cl-, Ca2+, dẫn đến ly giải thẩm thấu tế bào Tuy nhiên, diện độc tố NetB thường liên hệ với C perfringens type A 60 - 90% chủng phân lập từ gia cầm bị VRHT thể lâm sàng điển hình có mang gene netB (Keyburn cs, 2010) Kết nghiên cứu không phát gene netB phù hợp với chủng vi khuẩn C perfringens phân lập từ gà bệnh cận lâm sàng Theo Merati cs (2017), nghiên cứu diện C perfringens gà thịt nghi ngờ bệnh VRHT Algeria 100% (52/52 gốc) C perfringens thuộc type A khơng có chủng dương tính với gene netB Gene netB khơng phát từ chủng C perfringens phân lập ca bệnh VRHT (Llanco cs., 2012) chí gene netB phát gà khoẻ (Abid cs., 2016) Như vậy, diện gene netB có biến động lớn khu vực, cá thể thể bệnh VRHT, vai trị độc tố NetB cịn cần phải tiếp tục nghiên cứu KẾT LUẬN Gà có biểu cận lâm sàng nghi VRHT nhiễm C perfringens mức 7,69% vi khuẩn đề kháng với nhiều loại kháng sinh thông dụng (amoxicillin, ampicillin, penicillin, doxycyclin, gentamycin, flofenicol, lincomycin+ spectinomycin, enrofloxacin) Tỷ lệ diện gene cpa cao so với gene cpb bước đầu cho thấy type A type phổ biến C perfringens phân lập từ gà Gene sản sinh độc tố alpha (type A) tố beta (type C) diện chủng C perfringens phân lập khơng có chủng mang gene sinh độc tố NetB Những nghiên cứu cần định lượng C perfringens diện ruột 1076 xác định thêm diện độc tố khác liên quan đến ca bệnh thể lâm sàng Mặt khác, phương diện bệnh học dịch tễ cần xác định mối tương quan diện C perfringens với yếu tố nguy để góp phần vào cơng tác phịng bệnh Clostridium perfringens chăn ni gà TÀI LIỆU THAM KHẢO Abid S.A., T Azeem, Z I Chaudhary, Mansur-ud-din Ahmad, Z U Rehman and S Umar (2016) Emerging threat of necrotic enteritis in poultry and its control without use of antibiotics J. Anim. Plant. Sci 26(6): 1556-1667 Brady J.,    J.D Hernandez-Doria,  C Bennett,  W Guenter,  J.D House  and  J.C Rodríguez-Lecompte (2010) Toxinotyping of necrotic enteritis producing and commensal isolates of Clostridium perfringens from chickens fed organic diets Avian Pathol 39(6): 475-481 EI-Jakee J., N.S Ata, M.A El Shabrawy and S.M Azza, A Elnaga, R.H Hedia, N.M Shawky and H.M Shawky (2013) Characterization of Clostridium perfringens isolated from poultry Glob Vet 11(1): 88-94 Elsify Ahmed (2015) A review on Clostridium perfringens toxins with special reference to Beta toxin Minufiya Vet J (9): 85-100 Gholamiandehkordi, A (2009) A contribution to the pathogenesis and treatment of Clostridium perfringens associated necrotic enteritis in broilers Faculty of Veterinary Medicine, Ghent University Guran H.S and G Oksuztepe (2013) Detection and typing of Clostridium perfringens from retail chicken meat parts Lett Appl Microbiol.  57(1): 77-82 Hoàng Văn Lân Thanh (2012) Nghiên cứu tình hình bệnh viêm ruột hoại tử đàn gà HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1069-1072 hướng thịt nuôi Vĩnh Phúc Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp, Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội, Việt Nam Keyburn A.L.,  X.X Yan,  T.L Bannam,  F Van Immerseel,  J.I Rood and R.J Moore (2010) Association between avian necrotic enteritis and Clostridium perfringens strains expressing NetB toxin Vet Res 41:21 Khairy E.A., S.M Dorgham, M.A Bakry and A.S Hakim (2013) Molecular diversity of Alpha toxin produced by Clostridium perfringens strains causing avian necrotic enteritis World Appl Sci J 21(1): 15-20 Lại Nhật Linh, 2012 Nghiên cứu lưu hành gen netB chủng Clostridium perfringens  type A gây bệnh viêm ruột hoại tử gà nuôi Thành phố Nha Trang Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Nha Trang, Việt Nam Llanco L.A., V Nakano, A.J.P Ferreira and M.J Avila Campos (2012) Toxinotyping and antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens isolated from broiler chickens with necrotic enteritis Int J Microbiol Res 4(7): 290-294 M’Sadeq S.A., S.B.Wu, M Choct, R Forder and R.A Swick (2015) Use of yeast cell wall extract as a tool to reduce the impact of necrotic enteritis in broilers Poult Sci 94(5): 898 - 905 Mot, D., L Timbermont, F Haesebrouck, R Ducatelle and F Van Immerseel (2014) Progress and problems in vaccination against necrotic enteritis in broiler chickens Avian Pathol 43(4): 290-300 Osman, K.M.,  Y.A Soliman,  Z.M Amin and  M.A Aly (2012) Prevalence of Clostridium perfringens type A isolates in commercial broiler chickens and parent broiler breeder hens in Egypt Rev Sci Tech 31(3): 931- 941 Rachid M., T Soraya and M.A.A Abdel-Fattah (2017) Identication and characterization of Clostridium perfringens isolated from necrotic enteritisin broiler chickens in Tiaret, Western Algeria Kafkas Univ Vet Fak Derg., Veterinary Serum and Vaccine Research Institute 23(4): 595-560 Salah-Eldin A.E.H., E H Fawzy, B.A Aboelmagd, E.A Ragab and B Shaimaa (2015) Clinical and laboratory studies on chicken Isolates of Clostridium Perfringens in El- Behera, Egypt J. World’s Poult Res. 5(2): 21-28 Shojadoost, B.,  A.R.Vince and J.F.  Prescott (2012) The successful experimental induction of necrotic enteritis in chickens by Clostridium perfringens: a critical, review Vet Res 43(1): 74 Svobodova, L., I Steinhauserova and M Nebola (2007) Incidence of Clostridium perfringens in Broiler Chicken in the Czech Republic Acta Vet Brno 76: 25-30 Timbermont L., F Haesebrouck, R Ducatelle and F Van Immerseel (2011) Necrotic enteritis in broilers: an updated review on the pathogenesis Avian Pathology 40(4): 341- 347 Tolooe A.,  B Shojadoost,  S.M Peighambari  and  Y Tamaddon (2011) Prevalence of netB gene among Clostridium perfringens isolates obtained from healthy and diseased chickens J. Anim Vet Adv 10(1): 106-110 1077 ... kháng sinh C perfringens phân lập từ mẫu ruột lấy trại gà thịt sở giết mổ Một số gene sinh độc tố alpha (gene cpa), beta (gene cpb) NetB (gene netB) liên quan đến khả gây bệnh viêm ruột hoại tử gà. .. đợt ngộ độc thực phẩm C perfringens (Guran Oksuztepe, 2013; M’Sadeq cs., 2015) 3.1 Khả đề kháng kháng sinh gốc C perfringens phân lập Bảng Đề kháng kháng sinh gốc C perfringens Số mẫu đề kháng/ ... đường ruột khác, khả sản xuất đa dạng độc tố yếu tố độc lực quan trọng định type C perfringens đưa đến thể bệnh khác gà (Shojadoost cs., 2012) Viêm ruột hoại tử gà thể bệnh quan trọng thường C perfringens