Ảnh hưởng của thời gian ly trích đến hàm lượng polyphenol, flavonoid và tannin trong dịch chiết bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L. Benn)

Bài viết Ảnh hưởng của thời gian ly trích đến hàm lượng polyphenol, flavonoid và tannin trong dịch chiết bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L. Benn) trình bày khảo sát ảnh hưởng của thời gian ly trích đến hàm lượng polyphenol, flavonoid và tannin trong dịch chiết cây bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L. Benn). Bọ mắm khô được tách chiết bằng phương pháp chiết lỏng - rắn, với dung môi là nước và tỉ lệ nguyên liệu khô/ nước là 1/10 (g/ml), nhiệt độ ly trích là 80o C.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN LY TRÍCH ĐẾN HÀM LƯỢNG POLYPHENOL, FLAVONOID VÀ TANNIN TRONG DỊCH CHIẾT BỌ MẮM (POUZOLZIA ZEYLANICA L BENN) Võ Thị Trà An1*, Nguyễn Thị Lụa1, Đặng Thị Xuân Thiệp1 Lâm Ánh Tuyết1 Tóm tắt Nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng thời gian ly trích đến hàm lượng polyphenol, flavonoid tannin dịch chiết bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L Benn) Bọ mắm khô tách chiết phương pháp chiết lỏng rắn, với dung môi nước tỉ lệ nguyên liệu khô/ nước 1/10 (g/ml), nhiệt độ ly trích 80oC Chỉ tiêu đánh giá hàm lượng polyphenol, flavonoid tannin mốc thời gian ly trích 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 Kết định tính cho thấy có diện polyphenol, flavonoid tannin dịch chiết bọ mắm Kết định lượng cho thấy, hàm lượng polyphenol đạt cao mức (6,20 mg GAE/g DM); hàm lượng flavonoid đạt mức cao 1,5 (2,95 mg QE/g DM) hàm lượng tannin đạt mức cao 2,5 (0,141 g/g DM) Thời gian ly trích ảnh hưởng có ý nghĩa đến hàm lượng polyphenol, flavonoid, ảnh hưởng khơng có ý nghĩa đến hàm lượng tannin dịch chiết bọ mắm Thời gian ly trích khuyến cáo để thu hoạt chất với hàm lượng tối ưu quy trình thời gian hàm lượng hoạt chất thu tối ưu Từ khóa: Flavonoid, pouzolzia zeylanica L Benn, polyphenol, tannin, thời gian ly trích EFFECT OF EXTRACTION TIME ON CONCENTRATION OF POLYPHENOL, FLAVONOID AND TANNIN IN THE EXTRACT OF POUZOLZIA ZEYLANICA L BENN Abstract This study investigated the effect of extraction time on polyphenols, flavonoids and tannins in the extract of Pouzolzia zeylanica L Benn (PZ) Dried PZ is extracted by liquid-solid extraction method, with the solvent being water and the ratio of dry material/water is 1/10 (g/ml), the extraction temperature is 800C The criteria measured are the content of polyphenols, flavonoids and tannins at the time of extraction of 0.5; 1.5; 2; 2.5; 3; 3.5 and hours Qualitative results showed the presence of polyphenols, flavonoids and tannins in the extract of PZ Quantitative results showed that polyphenol content reached the highest level at hours (6.20 mg GAE/g DM); flavonoid content reached the highest level at 1.5 hours (2.95 mg QE/g DM) and tannin content reached the highest level at 2.5 hours (0.141 g/g DM) Extraction time had a significant effect on the content of polyphenols and flavonoids, but had no significant effect on the tannin content in the extract An extraction time of hours is recommended to obtain the active ingredients with optimal concentrations in this procedure because at this time the concentrations of all three active ingredients obtained were optimum Keywords: Extraction time, flavonoid, pouzolzia zeylanica L Benn, polyphenol, tannin GIỚI THIỆU Bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L Benn) gọi thuốc dịi lồi thân thảo * dễ trồng nước ta Các nghiên cứu gần cho thấy bọ mắm có tác dụng kháng khuẩn với Bộ môn Khoa học Sinh học Thú y, Khoa Chăn nuôi - Thú y, Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh; Tác giả liên hệ: Võ Thị Trà An; Email: an.vothitra@hcmuaf.edu.vn 1029 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 Staphylococcus aureus Escherichia coli (Saha cs., 2012a); kháng nấm Aspergillus niger (Saha cs., 2012b) Bọ mắm có tính giảm sưng, làm lành vết loét nhờ khả làm giảm Interleukin-1 (Yanfen cs., 2013) Bọ mắm có hoạt tính chống oxy hóa mạnh tỷ lệ với hàm lượng phenol toàn phần cao dịch chiết (Li cs., 2011) Huan cs (2010) nghiên cứu chứng minh khả giảm đường huyết Pouzolzia zeylanica chuột Các đặc tính sinh học bọ mắm thảo dược có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học polyphenol, flavonoid tannin (Võ Thị Kiều Ngân cs., 2017; Nguyễn Duy Tân, 2018) Theo Pandey Rizvi (2009), polyphenol có khả loại trừ gốc tự do, tham gia điều biến hoạt động enzyme, có tác dụng chất kháng sinh, chống dị ứng, ngăn ngừa bệnh tiêu chảy, ung thư viêm nhiễm thử nghiệm in vitro Dmitrienko cs (2012) Kannan (2011) cho flavonoid có nhiều hoạt tính sinh học chống oxy hóa, kích thích miễn dịch, chống ung thư; bảo vệ tim, gan, sóng radio lão hóa; chống nghẽn mạch máu, dị ứng, viêm nhiễm virus; ngăn ngừa bệnh đái tháo đường; ức chế phát triển tế bào có ảnh hưởng lên trao đổi chất động vật có vú Do khả tạo tủa với protein nên tannin có tác dụng chữa tiêu chảy, tác dụng chống chảy máu Tannin kết tủa với kim loại nặng alkaloid nên thường dùng để chữa ngộ độc kim loại alkaloid Tannin có tác dụng ức chế sinh ung thư, kích thích hoạt tính enzyme Tannin tham gia vào trình trao đổi chất trình oxy hóa khử Tannin có tác dụng kháng khuẩn nên có tác dụng bảo vệ (Đái Duy Ban, 2008) Dung mơi ly trích thảo dược nước khắc phục nhược điểm dung môi cồn với giá thành rẻ, an tồn sử dụng trực tiếp dịch chiết mà không cần bước loại dung môi Tuy vậy, nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng thời gian, nhiệt độ tách chiết, tỉ lệ nguyên liệu khô/nước đến 1030 hàm lượng hợp chất có hoạt tính sinh học polyphenol, flavonoid tannin dịch chiết bọ mắm dung mơi nước cịn hạn chế Trong đó, việc xác định thời gian ly trích phù hợp yếu tố quan trọng để đưa qui trình tách chiết tối ưu nhằm tránh làm thất hoạt chất sinh học có hiệu kinh tế sản xuất PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Cây bọ mắm tím (Pouzolzia zeylanica L Benn) cung cấp từ nhà vườn quận Bình Thạnh, Thành phố Hồ Chí Minh Bọ mắm sau thu nhận xử lý (loại bỏ cỏ, đất cát, côn trùng ốc), đem phơi nắng khoảng ngày để đạt độ khô Cây cắt nhỏ - cm bảo quản nilon nhiệt độ phịng Cân xác 25 g bọ mắm khơ cho vào bình tam giác, bổ sung thêm nước Dùng đũa thủy tinh khuấy để đảm bảo bọ mắm ngâm hoàn toàn nước Thêm nước vào water bath đến vạch 250 ml, cài đặt nhiệt độ 80oC Quan sát đồng hồ nhiệt độ, nhiệt độ nước bể nhiệt độ cài đặt cho bình tam giác vào, dùng kẹp để cố định bình Khi nhiệt độ bình đạt 80oC bắt đầu tính thời gian ly trích Tại thời điểm 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 giờ, bình tam giác lấy Dịch ly trích lọc qua khăn lọc để loại bỏ bã Dịch ly trích (dịch chiết) đưa vào ống nghiệm bảo quản ngăn mát tủ lạnh để tiến hành định tính định lượng Phương pháp định tính (Bảng 1) thực theo mô tả Nguyễn Kim Phi Phụng cs (2007) Tổng hàm lượng polyphenol xác định phương pháp thuốc thử FolinCiocalteu (Hossain cs., 2013) với đường chuẩn acid gallic Hàm lượng flavonoid toàn phần xác định phương pháp Aluminum Chloride colorimetric (AlCl3) (Chang cs., 2002) với đường chuẩn quercetin Hàm lượng tannin xác định qua chuẩn độ dung dịch KMnO4 0,05N với thị màu sulfo-indigocarmine màu vàng kim xuất (TCVN, 2019) HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 Bảng Các phương pháp định tính polyphenol, flavonoid tannin Hợp chất định tính Polyphenol Thực phản ứng dùng để định tính Kết phản ứng Màu dịch chiết chuyển sang màu xanh đen đậm ml dịch chiết + 10 giọt FeCl3 5% ml dịch chiết + Một bột Mg → Lắc Flavonoid Tannin Sau thêm khoảng 10 giọt HCl đậm đặc Dung dịch chuyển sang màu đỏ có sủi bọt ml dịch chiết + giọt FeCl3 1% Dung dịch chuyển sang màu xanh rêu xanh đen đậm Thí nghiệm tiến hành ngẫu nhiên với lần lặp lại Kết tính tốn phần mềm Excel (2010) Minitab 16.2, thể theo dạng trung bình Kết phân tích ANOVA với độ tin cậy 95%, so sánh khác biệt nghiệm thức qua phép thử LSD (Least significant difference test) chuyển sang màu đỏ ống chứa mẫu dịch chiết so với ống đối chứng âm Đối với phản ứng định tính tannin FeCl3 1%, theo nghiên cứu trước, có diện tannin dịch chiết màu dịch chiết chuyển sang màu xanh rêu Tuy nhiên, phản ứng định tính này, màu dịch chiết quan sát có màu xanh đen Điều giải thích ảnh hưởng màu dịch chiết (màu nâu đậm) nên có khác biệt màu sắc Dựa vào thay đổi màu sắc phản ứng, chúng tơi kết luận có diện tannin dịch chiết bọ mắm 3.2 Định lượng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Định tính Qua thí nghiệm với FeCl3 5% dễ dàng quan sát màu dịch chiết bọ mắm chuyển sang màu xanh đen đậm so với ống đối chứng âm nên kết luận dịch chiết có diện polyphenol Hàm lượng polyphenol tổng số Có diện flavonoid mẫu dịch chiết bọ mắm qua phản ứng với bột Hàm lượng polyphenol tổng số trung Mg HCl đậm đặc: dễ dàng quan sát bình dịch chiết bọ mắm mốc thời tượng sủi bọt màu dung dịch gian ly trích thể Bảng Bảng Hàm lượng polyphenol tổng (TPC) thời gian ly trích bọ mắm Tham số thống kê Thời gian ly trích (giờ) 1,5 2,5 0,5 3,5 (mg GAE/g DM) 5,20b 5,29b 5,46b 5,87ab 5,87ab 6,20a 5,71ab 5,65ab SD (mg GAE/g DM) 0,15 0,10 0,27 0,18 0,46 0,13 0,37 0,13 CV (%) 2,91 1,80 4,92 3,06 7,92 2,04 6,51 2,22 P = 0,004 (lặp lại lần) Ghi chú: * Các tham số thống kê (trung bình); SD (Standard deviation - Độ lệch tiêu chuẩn); CV (Coefficience of variance - Hệ số biến động) p tính tốn phần mềm Minitab 16.2; ** Các chữ a, b,c,… xếp phần mềm Minitab 16.2; *** Các trung bình hàng có chữ khác khác biệt có ý nghĩa với p < 0,01; **** GAE: Gallic acid equivalents; DM: Dried material 1031 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TOÀN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 Kết phân tích tổng hàm lượng 0.05) Khi tiếp tục tăng thời gian ly trích lên polyphenol dịch chiết bọ mắm từ 3,5 hàm lượng polyphenol đạt 0,5 đến cho thấy thời gian ly trích có tương ứng 5,71 5,65 mg GAE/g ảnh hưởng đến hàm lượng polyphenol Nhìn DM Hàm lượng polyphenol có giảm nhẹ, chung, hàm lượng polyphenol có xu hướng nhiên thay đổi khơng có ý nghĩa tăng dần theo thời gian ly trích Tuy nhiên, (P ≥ 0,05) Điều giải thích hàm lượng polyphenol tăng đến mức định luật thứ hai Fick khuếch định có xu hướng giảm xuống tán, thời gian chiết tăng hàm lượng Thời gian ly trích cho hàm chất nguyên liệu khuếch tán từ tế bào lượng polyphenol tổng số 6,20 mg GAE/g nhiều (Cracolice Peters, 2009) DM, hàm lượng cao đáng kể so với Hàm lượng flavonoid tổng số hàm lượng polyphenol mức thời gian Hàm lượng flavonoid tổng số trung 0,5; 1,5 giờ, khác biệt có ý nghĩa thống kê với P < 0,01 khơng khác biệt bình dịch chiết bọ mắm mốc thời so với mốc thời gian 2,5 (P > gian ly trích thể Bảng Bảng Hàm lượng flavonoid tổng (TFC) thời gian ly trích bọ mắm Tham số thống kê Thời gian ly trích (giờ) 1,5 2,5 0,5 3,5 (mg QE/g DM) 2,77abc 2,88abc 2,95a 2,93ab 2,85abc 2,82abc 2,70bc 2,69c SD (mg QE/g DM) 0,13 0,04 0,07 0,06 0,11 0,06 0,10 0,07 CV (%) 4,52 1,40 2,38 1,94 3,88 1,97 3,53 2,42 P = 0,007 (lặp lại lần) Ghi chú: * Các tham số thống kê (trung bình); SD (Standard deviation - Độ lệch tiêu chuẩn); CV (Coefficience of variance - Hệ số biến động) p tính tốn phần mềm Minitab 16.2; ** Các chữ a, b,c… xếp phần mềm Minitab 16.2; *** Các trung bình hàng có chữ khác khác biệt có ý nghĩa với p < 0,01;**** QE: Quercetin equivalents Kết thể Bảng cho thấy thời nguyên liệu dung môi tăng lên, gian tách chiết có ảnh hưởng đến hàm lượng lúc hợp chất có khối lượng phân tử flavonoid (p = 0.007) Nhìn chung, hàm lượng lớn ảnh hưởng độ phân cực dung flavonoid có xu hướng tăng theo thời gian mơi trích ly khỏi nguyên liệu, đến thời điểm định lại giảm Tuy hàm lượng hợp chất flavonoid toàn phần nhiên, khác biệt hàm lượng flavonoid thu tăng lên Sau đó, hàm lượng mốc thời gian 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; flavonoid toàn phần khơng tăng lên khơng có ý nghĩa thống kê (P ≥ 0,05) Có mà có xu hướng giảm xuống Nguyên nhân có khác biệt đáng kể TFC thời gian ly trích thể tỷ lệ dung môi nguyên liệu 1,5 3,5 (P < 0,01) chưa đủ để trích ly hồn tồn flavonoid tồn Nghiên cứu Ho cs (2012) phần tác động nhiệt độ giải thích xu hướng thay đổi hàm lượng thời gian dài làm cho số flavonoid flavonoid giai đoạn đầu, thời gian toàn phần nhạy cảm với nhiệt độ bị phân hủy ngắn, nên khả tiếp xúc nguyên liệu làm tính chất Mặt khác, ngun dung mơi ngắn, có hợp chất hữu liệu ngâm dung mơi thời gian có kích thước nhỏ hịa tan vào dung mơi dài trương nở làm bít lỗ thơng màng tế Khi tăng thời gian chiết thời gian tiếp xúc bào, cản trở khả thẩm thấu dung môi 1032 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 vào nguyên liệu nên hiệu suất chiết flavonoid Hàm lượng tannin trung bình tồn phần giảm mốc thời gian thể Bảng Hàm lượng tannin Bảng Hàm lượng tannin (TC) thời gian ly trích bọ mắm Tham số thống kê (g/g DM) SD (g/g DM) CV (%) 0,5 0,076 0,087 Thời gian ly trích (giờ) 1,5 2,5 0,078 0,097 0,141 0,090 3,5 0,072 0,071 0,026 0,016 0,033 0,048 0,023 0,013 0,011 0,017 34,17 18,40 42,21 49,10 16,56 13,93 15,23 24,13 P = 0,08 (lặp lại lần) Ghi chú: * Các tham số thống kê (trung bình); SD (Standard deviation - Độ lệch tiêu chuẩn); CV (Coefficience of variance - Hệ số biến động) p tính tốn phần mềm Minitab 16.2; ** Chữ a xếp phần mềm Minitab 16.2; *** Các trung bình hàng có chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa với p > 0,05 So sánh hàm lượng tannin mốc rằng, thời gian tách chiết có thời gian khảo sát khác biệt ảnh hưởng đáng kể hàm lượng ý nghĩa mặt thống kê (P 0,05) hợp chất có hoạt tính sinh học Hàm lượng tannin tăng từ 0,076 lên 0,087 g/g bọ mắm Hàm lượng polyphenol, flavonoid DM 0,5 giờ, tiếp tục tăng lên 0,097 tannin tăng dần theo thời gian tách chiết, g/g DM đạt độ cực đại 2,5 đến khoảng thời gian định, hợp chất với 0,141 g/g DM Sau mức thời gian này, sinh học bị thối hóa làm giảm giảm xuống hàm lượng tannin tiếp hàm lượng hợp chất tiếp tục tăng thời tục tăng thời gian tách chiết lên Cụ thể, hàm gian chiết Trong đó, hàm lượng polyphenol lượng tannin giảm xuống 0,09; 0,072 đạt cao thời điểm 2,5 với 6,2 mg 0,071 g/g DM 3; 3,5 Có thể số GAE/g DM, hàm lượng flavonoid đạt cao lần lặp lại chưa nhiều nên không thấy rõ khác thời điểm 1,5 với 2,95 mg QE/g biệt thống kê DM, hàm lượng tannin đạt cao thời Nguyễn Duy Tân (2018) định lượng điểm 2,5 với 0,141 g/g DM Với quy tannin dịch chiết nước bọ mắm trình mô tả nghiên cứu này, thời gian ly thuốc thử Follin-Denis cho kết hàm trích thu hoạt chất với hàm lượng tannin 6,43 mg TAE/g DM 40 phút lượng tối ưu Cần tiếp tục nghiên cứu quy Hàm lượng tannin đạt cao khoảng trình ly trích (khuấy đảo) để tăng hiệu suất thời gian 40 phút ngắn so với kết ly trích nghiên cứu 2,5 Sự khác biệt TÀI LIỆU THAM KHẢO nghiên cứu Nguyễn Duy Cracolice, M., Peters, E (2009) Basics of Tân (2018) có khuấy trộn trình introductory chemistry: anactive learning tách chiết, giúp làm tăng hiệu suất tách chiết approach, CA: Brooks/Cole hoạt chất Chang C, Yang M., Wen H and Chem J KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ (2002) Estimation of flavonoid total content in propolis by two complementary Từ kết định tính thu được, colorimetric methods Journal of Food kết luận dịch chiết nước o and Drug Analisis, 10(7): 178-182 80 C bọ mắm có diện polyphenol, flavonoid tannin Nghiên cứu Đái Duy Ban (2008) Các hợp chất thiên 1033 HỘI NGHỊ KHOA HỌC CHĂN NUÔI THÚ Y TỒN QUỐC 2021 - AVS2021: 1029-1034 nhiên có hoạt tính sinh học phịng chống số bệnh cho người vật nuôi Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Dmitrienko, S.G., V.A Kudrinskaya and V.V Pyari (2012) Methods of extraction, preconcentration, and determination of quercetin Journal of Analytical Chemistry, 67 (4): 299-311 Ho, Y.C., H.T Yu and N.W Su (2012) Re-examination of chromogenic quantitative assays for determining flavonoid content Journal of Agricultural and Food Chemistry 60 (10): 2674-2681 Hossain, M.A., AL-Raqmi, K.A.S., AL-Mijizy, Z.H., Weli, A.M and Al-Riyami, Q., 2013 Study of total phenol, flavonoids contents and phytochemical screening of various leaves crude extracts of locally grown Thymus vulgaris Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 3(9): 705-710 Huan Cen, Ping Huizhen, Peng Xiaohong (2010) Effects of Pouzolzia zeylanica on blood sugar in diabetes mellitus mice Journal of Mudanjiang Medical University Kannan, V (2011) Extraction of bioactive compounds from whole red cabbage and beetroot using pulsed electric fields and evaluation of their functionality Food Science and Technology Department, University of Nebraska-Lincoln Li P, Huo L, Su W, Lu R, Deng C, Liu L (2011) Free radical-scavenging capacity, antioxidant activity and phenolic content of Pouzolzia zeylanica Journal of the Serbian Chemical Society, pp.709-717 1034 Nguyễn Duy Tân (2018) Nghiên cứu ảnh hưởng trình thu hoạch chế biến đến hàm lượng chất có hoạt tính sinh học thuốc dòi (Pouzolzia zeylanica L Benn) Luận án Tiến sỹ ngành Công nghệ thực phẩm, Đại học Cần Thơ, Việt Nam Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Pandey, K.B and S.I Rizvi (2009) Current understanding of dietary polyphenols and their role in health and disease Current Nutrition and Food Science 5: 249-263 Saha, D., Paul, S., Chowdhury, S (2012a) Antibacterial activity of ethanol extract of Pouzolzia zeylanica L Benn International Journal of Pharmaceutical Innovations (1): 1-5 Saha, D., Paul, S (2012b) Antifungal activity of ethanol extract of Pouzolzia zeylanica L Benn International Journal of Pharmacy Teaching & Practices, pp 272 Võ Thị Kiều Ngân, Nguyễn Thị Ngọc Mai, Nguyễn Thanh Hoàng, Trần Hồng Đức, Nguyễn Đức Độ (2017) Khảo sát hàm lượng phenolic tổng, flavonoid tổng, hoạt tính chống oxy hóa hoạt tính kháng khuẩn cao chiết ethanol methanol thân rễ bọ mắm (Pouzolzia zeylanica L Benn) Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ, số (2014 - 1), tr 68-75 Yanfen Chen, Kaiying Li, Qi Deng, Xuyang Liu, Zhibin Shen, Libing Guo (2013) Therapeutic effect and mechanism of Pouzolzia zeylanica on skin ulcers in rats Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology  ... biệt bình dịch chiết bọ mắm mốc thời so với mốc thời gian 2,5 (P > gian ly trích thể Bảng Bảng Hàm lượng flavonoid tổng (TFC) thời gian ly trích bọ mắm Tham số thống kê Thời gian ly trích (giờ)... sát bình dịch chiết bọ mắm mốc thời tượng sủi bọt màu dung dịch gian ly trích thể Bảng Bảng Hàm lượng polyphenol tổng (TPC) thời gian ly trích bọ mắm Tham số thống kê Thời gian ly trích (giờ) 1,5... hàm lượng 0.05) Khi tiếp tục tăng thời gian ly trích lên polyphenol dịch chiết bọ mắm từ 3,5 hàm lượng polyphenol đạt 0,5 đến cho thấy thời gian ly trích có tương ứng 5,71 5,65 mg GAE/g ảnh hưởng