Nghiên cứu thành phần hóa học từ cặn chiết CH2Cl2 quả cây trâu cổ (ficus pumila l)

TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN HẠNH NGÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CẶN CHIẾT DICHLORMETHANE QUẢ CÂY TRÂU CỔ (Ficus pumila L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sƣ phạm Hóa học Phú Thọ, 2019 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN HẠNH NGÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CẶN CHIẾT DICHLORMETHANE QUẢ CÂY TRÂU CỔ (Ficus pumila L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sƣ phạm Hóa học NGƢỜI HƢỚNG DẪN: TS Triệu Quý Hùng Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng Phú Thọ, 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận cơng trình nghiên cứu khoa học riêng tơi, tơi nỗ lực nghiên cứu q trình học tập làm thí nghiệm trƣờng Đại học Hùng Vƣơng dƣới hƣớng dẫn nhiệt tình tâm huyết TS Triệu Q Hùng Trong q trình viết, tơi tham khảo số tài liệu đƣợc trích dẫn đầy đủ khóa luận Sinh viên Nguyễn Hạnh Ngân ii LỜI CẢM ƠN Đƣợc học tập rèn luyện dƣới giảng đƣờng Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng suốt năm đại học niềm vui tự hào em Trong quãng thời gian đó, em đƣợc trau dồi tích lũy đƣợc nhiều kiến thức nhƣ kỹ cần thiết để phục vụ cơng việc sống Với lịng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lịng kính trọng lời cảm ơn chân thành đến: TS Triệu Quý Hùng - ngƣời thầy tâm huyết trực tiếp hƣớng dẫn, động viên giúp đỡ em nhiều suốt trình thực đề tài nghiên cứu khoa học nhƣ q trình thực khóa luận tốt nghiệp đại học Đồng thời em xin chân thành cảm ơn tới giúp đỡ Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng thầy cô khoa Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện thời gian, vật chất kinh phí hỗ trợ em thực khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, xin bày tỏ lịng cảm ơn tới gia đình, ngƣời thân ủng hộ động viên suốt trình học tập, rèn luyện nghiên cứu Phú Thọ, ngày 02 tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Hạnh Ngân iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT  Các phƣơng pháp sắc ký TLC Thin Layer Chromatography: Sắc ký lớp mỏng CC Column Chromatography: Sắc ký cột  Các phƣơng pháp phổ H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy: Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton 13 C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy: Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon 13 Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer: Phổ DEPT DEPT COSY Correlation Spectroscopy: Phổ tƣơng tác chiều đồng hạt nhân HSQC H-1H Heteronuclear Single Quantum Correlation: Phổ tƣơng tác hai chiều trực tiếp dị hạt nhân HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation: Phổ tƣơng tác đa liên kết hai chiều dị hạt nhân s: singlet (vạch đơn) d: doublet (vạch đôi) dd: double doublet (tách đôi vạch đôi)  Các chữ viết tắt khác TMS Tetramethyl silan CTPT Công thức phân tử  Tên hợp chất đƣợc viết theo nguyên Tiếng Anh iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Độ chuyển dịch hóa học proton 22 Bảng 3.1 Kết phân đoạn thu đƣợc từ cột tổng CH2Cl2 37 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây rù rì Hình 1.2 Cây đa tía Hình 1.3 Quả vả tây Hình 1.4 Cây đa búp đỏ Hình 1.5 Cây sung thiên tiên Hình 1.6 Cây vú bị Hình 1.7 Cây đa cừa Hình 1.8 Cây vảy ốc Hình 1.9 Cây Sung vẩy 10 Hình 1.10 Cây Trâu cổ 11 Hình 2.1 Các dung môi phổ biến 16 Hình 2.2 Máy cất quay chân không 17 Hình 2.3 Bình triển khai sắc kí mỏng 17 Hình 2.4 Bộ chƣng cất dung môi 18 Hình 2.5 Máy soi UV 18 Hình 2.6 Minh hoạt sắc ký lớp mỏng 19 Hình 2.7 Minh họa sắc ký cột 21 Hình 2.8 Ví dụ minh họa tách vạch phổ 23 Hình 2.9 Độ chuyển dịch hóa học carbon-13 24 Hình 2.10 Hình ảnh minh họa phổ DEPT 25 Hình 2.11 Hình ảnh minh họa phổ 1H-1H COSY 26 Hình 2.12 Hình ảnh minh họa phổ HSQC 26 Hình 2.13 Hình ảnh minh họa phổ HMBC 27 Hình 2.14 Minh họa phổ EI-MS 28 Hình 2.15 Minh họa phổ ESI-MS 28 Hình 3.1 Mẫu Trâu cổ thu hái 29 Hình 3.2 Mẫu Trâu cổ sau phơi khô mang xay nhỏ 29 Hình 3.3 Hình ảnh ngâm Trâu cổ dung môi n–Hexane 30 Hình 3.4 Quá trình lọc dung dịch qua vải qua giấy lọc 30 vi Hình 3.5 Quay khô dung dịch máy cất quay 31 Hình 3.6 Hình ảnh ngâm Trâu cổ dung môi CH2Cl2 31 Hình 3.7 Cặn CH2Cl2 Trâu cổ 32 Hình 3.8 Hình ảnh ngâm Trâu cổ dung mơi EtOAc 32 Hình 3.9 Sơ đồ ngâm chiết Trâu cổ 33 Hình 3.10 Kết khảo sát TLC cặn chiết CH2Cl2 Trâu cổ 35 Hình 3.11 Bột silica gel cặn chiết CH2Cl2 36 Hình 3.12 Cột tổng silica gel cặn CH2Cl2 37 Hình 3.13 Hình ảnh TLC phân đoạn F1÷F4 38 Hình 3.14 Cột silica gel FPFD F1 39 Hình 3.15 Hình ảnh TLC phân đoạn FPFDF1.1,1.2 40 Hình 3.16 Sơ đồ phân lập hợp chất FPFDC1 41 Hình 3.17 Hình ảnh chất FPFDC1 sắc ký đồ TLC 41 Hình 3.18 Cấu trúc hợp chất FPFDC1 42 Hình 3.19 Phổ ESI-MS FPFDC1 43 Hình 3.20 Phổ 13C-NMR FPFDC1 44 Hình 3.21 Phổ DEPT FPFDC1 45 Hình 3.22 Phổ 1H-NMR FPFDC1 46 Hình 3.23 Phổ 1H-NMR giãn rộng FPFDC1 47 Hình 3.24 Phổ HSQC FPFDC1 48 Hình 3.25 Phổ COSY FPFDC1 49 Hình 3.26 Phổ HMBC FPFDC1 50 Hình 3.27 Tƣơng tác phổ COSY, HMBC FPFDC1 51 vii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý lựa chọn đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chi F.pumila L 1.2 Đặc điểm thực vật Trâu cổ 11 1.3 Các nghiên cứu hóa thực vật chi Ficus 11 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 16 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 16 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phƣơng pháp ngâm chiết 18 2.3.2 Phƣơng pháp sắc ký 19 2.3.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hợp chất thiên nhiên 22 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Quá trình điều chế cặn dịch chiết Dichlormethane Trâu cổ 29 3.2 Quá trình phân lập chất từ dịch chiết CH2Cl2 Trâu cổ 33 3.2.1 Khảo sát thành phần định tính lựa chọn dung mơi 33 3.2.2 Quá trình phân lập chất 35 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất FPFDC1 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 Kết luận 52 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 -1- MỞ ĐẦU Lý lựa chọn đề tài Từ xa xƣa, để tồn đƣợc tự nhiên ngƣời biết tìm kiếm vị thuốc từ cỏ mọc hoang để chữa bệnh Những hiểu biết cỏ có lợi có hại đƣợc truyền miệng, ghi chép, đúc kết thành kinh nghiệm qua nhiều hệ Ngày nay, qua hàng ngàn năm phát triển y học cổ truyền Việt Nam có thuốc dân gian đa dạng phong phú Trong có nhiều thuốc, vị thuốc có tác dụng tốt lâm sàng nhƣng chƣa đƣợc nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dƣợc lý độc tính Chính việc nghiên cứu để khai thác, kế thừa, ứng dụng phát triển nguồn thực vật làm thuốc vấn đề có ý nghĩa khoa học, kinh tế xã hội lớn nƣớc ta Con đƣờng hữu hiệu để phát chất có hoạt tính tiềm năng, có khả phát triển thành thuốc chữa bệnh cho ngƣời từ hợp chất nhiên nhiên Các phƣơng pháp thƣờng sử dụng cơng nghệ tách chiết, có nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học đƣợc phát sản xuất, phục vụ cho sống ngƣời Với 12.000 loài thực vật phong phú đa dạng, nhiều lồi đƣợc sử dụng thuốc y học cổ truyền cho thấy giá trị to lớn từ nguồn dƣợc liệu thiên nhiên Việt Nam [2] Nhiều loài dƣợc liệu đƣợc dùng làm thuốc nhƣ Lƣợc vàng có tác dụng điều trị bệnh tiểu đƣờng, Cà gai leo có tác dụng hỗ trợ điều trị ung thƣ gan, Trinh nữ hồng cung có tác dụng điều trị u sơ cổ tử cung, Xạ đen có nhiều tác dụng quý giá nhƣ chữa trị số loại bệnh ung thƣ, … Do ngày nhà hóa học hữu tiếp tục nghiên cứu phân lập xác định cấu trúc hợp chất khác từ lồi thực vật có Trâu cổ nhằm làm sáng tỏ thành phần hóa học chúng, định hƣớng khoa học việc sử dụng loài thực vật phát hoạt chất có tác dụng sinh học -42- 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất FPFDC1 Sau tiến hành ngâm chiết mẫu Trâu cổ, sắc kí silica gel nhiều lần kết hợp phƣơng pháp kết tinh phân lập đƣợc hợp chất FPFDC1 Hợp chất FPFDC1 đƣợc đo phổ khối lƣợng, phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Viện Hóa học-Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Từ kiện phổ thu đƣợc so sánh với tài liệu tham khảo cho phép xác định cấu trúc hợp chất FPFDC1 hợp chất triterpenoid -taraxerol acetate Hình 3.18 Cấu trúc hợp chất FPFDC1 Phổ khối lƣợng ESI-MS FPFDC1 cho pic ion phân tử proton hóa [M +H]+ = 469 pic ion giả phân tử [M-CH3COOH+H]+ = 409 phù hợp với CTPT C32H52O2, M=468 -43- Hình 3.19 Phổ ESI-MS FPFDC1 -44- Phân tích phổ 13C-NMR DEPT cho thấy tín hiệu 32 carbon có nhóm methyl, 10 nhóm methylene, nhóm methin, nhóm carbonyl carbon bậc Hình 3.20 Phổ 13C-NMR FPFDC1 -45- Hình 3.21 Phổ DEPT FPFDC1 -46- Hình 3.22 Phổ 1H-NMR FPFDC1 -47- Trên phổ 1H-NMR xuất tín hiệu đặc trƣng nhóm methyl H 0,82 (s); 0,86 (s); 0,88 (s); 0,91 (s) (2 x CH3); 0,96 (s) (2 x CH3) ; 1,09 (s); nhóm acetate (OCOCH3) H 2,04 tín hiệu proton nhóm methin olefinic H 5,53 (dd, J=8,0; 3,0 Hz, H-15) Bên cạnh phổ 1H-NMR cịn có tín hiệu nhóm methin gắn với oxygen đƣợc acetyl hóa C-3 H 4,46 (dd, J=10,0; 5,0 Hz, H-3) Hình 3.23 Phổ 1H-NMR giãn rộng FPFDC1 -48- Phân tích phổ 1H-NMR kết hợp với phổ HSQC FPFD1 cho thấy tín hiệu nhóm methin sp3 liên kết với oxygen H 4,46 (dd, J=10,0; 5,0 Hz, H-3) tƣơng ứng với C 81,0 (C-3) phổ 13C-NMR Liên kết đôi phân tử FPFD1 đƣợc khẳng định tín hiệu nhóm methin olefinic H 5,53 (dd, J=8,0; 3,0 Hz, H-15) C 158,0 (C-14); 116,9 (C-15) Hình 3.24 Phổ HSQC FPFDC1 -49- Phân tích phổ COSY xác định đƣợc chuỗi liên kết H15-H16; H3H2a-H1a; H5-H6b-H7a; H9-H11b-H12b; H21a-H22a Hình 3.25 Phổ COSY FPFDC1 Trên phổ HMBC xác định đƣợc tƣơng tác H-3 với C-23, C-24 nhóm C=O ester chứng tỏ nhóm acetate liên kết với C-3 ; H-23 với C-4, C-24, C-5 chứng tỏ vị trí C-4 gắn với nhóm CH3-23, 24 Các tƣơng tác phổ HMBC đƣợc trình bày hình 3.27 -50- Hình 3.26 Phổ HMBC FPFDC1 -51- Hình 3.27 Tương tác phổ COSY, HMBC FPFDC1 Từ liệu phổ ESI-MS, phổ 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, COSY,, HSQC, HMBC so sánh với tài liệu tham khảo [19] cho phép xác định cấu trúc FPFDFC1 -taraxerol acetate -52- KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Kết đề tài khóa luận tốt nghiệp đạt đƣợc mục tiêu đề ra: - Điều chế đƣợc 40,3 gam cặn dịch chiết CH2Cl2 Trâu cổ khảo sát sắc ký mỏng cặn dịch chiết này; lựa chọn đƣợc hệ dung môi EtOAc/n-hexane làm dung môi rửa giải sắc ký cột silica gel để phân tách cặn dịch chiết CH2Cl2 thành phân đoạn khác Đã phân lập đƣợc hợp chất triterpenoid taraxerol acetate (FPFDC1) từ phân đoạn nhỏ cặn chiết CH2Cl2 Trâu cổ phƣơng pháp sắc ký cột silica gel kết tinh - Cấu trúc hợp chất FPFDC1 đƣợc xác định phƣơng pháp phổ cộng hƣởng từ hạt nhân chiều, chiều: 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, COSY, HSQC, HMBC phổ khối lƣợng Kiến nghị - Tiếp tục phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ dịch chiết khác nhƣ MeOH, EtOAc Trâu cổ (Ficus pumila L.) nhằm tìm kiếm hợp chất thiên nhiên có lồi - Khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất phân lập đƣợc từ Trâu cổ - Bán tổng hợp số hợp chất từ Trâu cổ khảo sát hoạt tính sinh học chúng -53- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng-Tập 1, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [2] Nguyễn Văn Hùng (2011), Họ Na (Annonaceae)-Hóa học hoạt tính sinh học lồi Desmos rostrata, Goniothalamus tamirensis, Fissistigma villosissium - Quyển 1, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Hà Nội [3] Triệu Quý Hùng (2014), Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Goniothalamus macrocalyx Ban Goniothalamus gracilipes Ban họ Na (Annonaceae), Luận án Tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học-Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, Hà Nội [4] Đỗ Tất Lợi (2011), Những cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Thời Đại [5] Hoàng Hƣơng Ly (2018), Phân lập xác định cấu trúc hợp chất Triterpenoid từ Trâu cổ (Ficus pumila L.) họ dâu tằm ( Moraceace), Khóa luận tốt nghiệp ngành sƣ phạm hóa học, Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng, Phú Thọ [6] Phạm Thị Oanh, Đỗ Thị Xuyến, Đỗ Văn Hài, Nguyễn Trung Thành (2017), “Ficus squamosa Roxb (Họ Dâu tằm - Moraceae) đƣợc ghi nhận cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 33(3), 94-97 [7] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [8] Trần Quốc Sơn, Đặng Văn Liếu (2013), Giáo tình sở hóa học hữu cơ-Tập 1, NXB Đai học sƣ phạm [9] Đặng Nhƣ Tại, Ngơ Thị Thuận (2010), Hóa học hữu cơ-Tập 1, NXB Giáo dục Việt Nam -54- [10] Đào Thị Hải Yến (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học số phân đoạn dịch chiết n-Hexane Trâu cổ (Ficus pumila L.) họ dâu tằm ( Moraceace) địa bàn tỉnh Phú Thọ, Khóa luận tốt nghiệp ngành sƣ phạm hóa học, Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng, Phú Thọ Tài liệu Tiếng Anh [11] Anshul Chawla, Ramandeep Kaur, Anil Kumar Sharma (2012), “ Ficus carica Linn.: A Review on its Pharmacognostic, Phytochemical and Pharmacological Aspects”, International Journal of Pharmaceutical and Phytopharmacological Research, 1(4), pp215-232 [12] Junichi KITAJIMA, Kaoru KIMIZUKA, Masanobu ARAI and Yasuko TANAKA (1998), “Constituents of Ficus pumila Leaves”, Chem Pharm Bull 46(10), 1647-1649 [13] Junichi KITAJIMA, Kaoru KIMIZUKA, and Yasuko TANAKA (1999), “New Dammarane-Type Acetylated Triterpenoids and Their Related Compounds of Ficus pumila Fruit”, Chem Pharm Bull 47(8), 1138-1140 [14] SHUKRANUL MAWA & IKRAM M SAID (2012), Chemical Constituents of Garcinia prainiana Sains Malaysiana, 41(5), pp585– 590 [15] Shukranul Mawa, Ibrahim Jantan and Khairana Husain (2016), “Isolation of Terpenoids from the Stem of Ficus aurantiaca Griff and their Effects on Reactive Oxygen Species Production and Chemotactic Activity of Neutrophils”, Molecules, 21, 9; doi:10.3390/molecules21010009 [16] Consolacion Y Ragasa, Agnes B Alimboyoguen, and Chien-Chang Shen (2014), “Chemical constituents of Ficus nota”, Der Pharma Chemica, 6(4), 98-101 [17] Pham Thi Nhat Trinh, Nguyen Huu An, Pham Ngoc An, Mai Dinh Tri, Cao Van Du, Nguyen Thi Le Thuy, Nguyen Trong Tuan, Vang Thi -55- Kim Thoa, Nguyen Ngoc Tuan & Le Tien Dung (2017), “A new benzofuran derivative from the leaves of Ficus pumila L.”, Natural Product Research, DOI: 10.1080/14786419.2017.1395427 [18] Virgilio D Ebajo Jr, Robert Brkljača, Sylvia Urban, Consolacion Y Ragasa (2015), “Chemical Constituents of Hoya buotii Kloppenb”, Journal of Applied Pharmaceutical Science, Vol 5(11), pp 069-072 [19] Trinh Thi Thuy, Tran Van Sung, Katrin Frank and Ludger Wessjohann (2008) Triterpenes from the roots of Codonopsis pilosula Journal of Chemistry, 46(4), 515-520 [20] https://www2.chemistry.msu.edu/faculty/reusch/orgpage/nmr.htm [21] http://www.magritek.com/wp-content/uploads/2014/05/009-Propylbenzoate-DEPT-60-MHz.jpeg -56- NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN Trong trình thực Khóa luận tốt nghiệp, sinh viên Nguyễn Hạnh Ngân đạt đƣợc nội dung sau: Về tinh thần, thái độ làm việc sinh viên: - Có tinh thần làm việc nghiêm túc, tích cực học hỏi, bố trí thời gian thực thực nghiệm khoa học - Tích cực chủ động học hỏi, tìm đọc tài liệu liên quan đến đề tài Khóa luận tốt nghiệp Những kết đạt KLTN: Kết đề tài khóa luận tốt nghiệp đạt mục tiêu đề ra: - Điều chế đƣợc 40,3 gam cặn dịch chiết CH2Cl2 Trâu cổ Đã phân lập đƣợc hợp chất triterpenoid taraxerol acetate (FPFDC1) từ phân đoạn nhỏ cặn chiết CH2Cl2 Trâu cổ phƣơng pháp sắc ký cột silica gel kết tinh - Xác định cấu trúc hợp chất FPFDC1 phƣơng pháp phổ cộng hƣởng từ hạt nhân chiều, chiều: 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, COSY, HSQC, HMBC phổ khối lƣợng GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS Triệu Quý Hùng Nguyễn Hạnh Ngân ... ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN HẠNH NGÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CẶN CHIẾT DICHLORMETHANE QUẢ CÂY TRÂU CỔ (Ficus pumila L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sƣ phạm Hóa. .. nhiên từ loài thực vật Việt Nam, góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học tạo sở khoa học cho việc sử dụng lồi thảo dƣợc, chúng tơi lựa chọn đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học từ cặn chiết CH2Cl2. .. CH2Cl2 Trâu cổ (Ficus pumila L.)” Mục tiêu đề tài - Điều chế cặn chiết CH2Cl2 Trâu cổ phân lập đƣợc chất từ cặn chiết dichloromethane Trâu cổ - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ cặn chiết