CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.2 Quá trình phân lập các chất từ dịch chiết CH2Cl2 cây Trâu cổ
3.2.1 Khảo sát thành phần định tính và lựa chọn dung môi
+ Triển khai sắc ký lớp mỏng: Lấy một lƣợng nhỏ cặn dịch chiết CH2Cl2
của lá cây Trâu cổ hòa tan trong hỗn hợp CH2Cl2 - n-Hexane. Pha hệ dung
môi (2 mL) rồi đổ vào bình triển khai sắc ký. Sử dụng bản mỏng với kích thƣớc 15 mm x 40 mm. Đƣa chất lên lớp mỏng bằng ống mao quản, cách đáy bản mỏng 5 mm và cách đều hai bên mép bản, để dung môi bay hết rồi đƣa vào bình triển khai. Khi dung môi chạy lên cách mép trên của bản khoảng 2 mm thì lấy bản mỏng ra, sấy để dung môi bay hết.
+ Lập sắc ký đồ: Tiến hành lập sắc ký đồ trong các điều kiện sau: Quan sát dƣới ánh sáng tử ngoại ở bƣớc sóng = 254 nm và 366 nm. Phun thuốc thử Ce(SO4)2, sấy bản mỏng, quan sát dƣới ánh sáng thƣờng.
Mỗi vết tách ra trên bản mỏng có một giá trị Rf khác nhau. Dựa trên sắc ký đồ, phân tích sơ bộ thành phần chiết để biết: Số lƣợng chất có trong cặn chiết, đánh giá sơ bộ khả năng phân tách chất của dung môi trên silica gel.
+ Kết quả sắc ký đồ:
Hệ các dung môi đƣợc triển khai gồm:
(I): EtOAc/n-Hexane (1:9) (II): EtOAc/n-Hexane (1:5) (III): EtOAc/n-Hexane (1:3) (IV): EtOAc/n-Hexane (1:1) (V): EtOAc/n-Hexane (7:3) (VI): EtOAc/n-Hexane (4:1) (VII): Acetone/n-Hexane (1:9) (VIII): MeOH/n-Hexane (1:9)
Các bản mỏng sau khi đƣợc triển khai sắc ký, hiện màu bằng đèn tử ngoại sau đó phun thuốc thử Ce(SO4)2 thu đƣợc kết quả tƣơng ứng nhƣ sau (Hình 3.10):
(I) (II) (III) (IV)
(V) (VI) (VII) (VIII)
Hình 3.10. Kết quả khảo sát TLC cặn chiết CH2Cl2 quả cây Trâu cổ
Kết quả so sánh cho thấy các chất đƣợc khai triển tốt nhất ở hệ dung môi
(II), (V), (VI). Các vệt chất đều hiện màu ở đèn tử ngoại với bƣớc sóng
=366 nm (một số vệt chất hiện màu ở cả bƣớc sóng 254nm) và thuốc thử Ce(SO4)2.
Do đó, lựa chọn hệ dung môi EtOAc/n-Hexane với độ phân cực tăng dần làm dung môi rửa giải cho cột tổng cặn CH2Cl2 của cây Trâu cổ.