TỔNG QUAN
Giới thiệu về acid ascorbic
- Khối lƣợng phân tử: 176,13 g/mol
- Tên khoa học: 5-(1,2-dihydroxyethyl)-3,4-dihydroxy-5H-furan-2-on
- Tên theo IUPAC: 2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone-2,3 enediol
- Tên thông thường: Acid ascorbic, Vitamin C, sinh tố C
- Nhân furan, vòng 5 cạnh có dị tố oxy
- Cầu oxy giữa carbon 1 với 4
- Nhóm dienol ở vị trí 2 với 3
- Dây nhánh mang nhóm alcol ở vị trí 5 và alcol bậc I ở vị trí 6
- 2 carbon bất đối xứng C 4 và C 5
1.2.3 Liên quan giữa cấu trúc và tác dụng [12]
- Dạng đồng phân: Vitamin C là dạng acid L-ascorbic, dạng D không có hoạt tính
- Nhân furan: Có gắn nhóm thế thì bị giảm hoặc mất tác động
- Dây nhánh: Thay 1 trong 2 nhóm alcol bậc I (vị trí 6) hoặc bậc II (vị trí 5) bằng nhóm methyl, vẫn giữ đƣợc hoạt tính
- Nhóm dienol: Tính chất khử mạnh của acid ascorbic phụ thuộc vào nhóm dienol trong phân tử của nó
Vitamin C là một dưỡng chất quan trọng có mặt trong hầu hết các loại rau quả tươi, đặc biệt là trong nước cam, chanh, quít và các loại rau xanh như bông cải xanh, tiêu, khoai tây, rau cải, cà chua, cam, quýt, và bưởi Việc bổ sung vitamin C từ các nguồn thực phẩm này giúp tăng cường sức khỏe và hệ miễn dịch.
Hình 1.1: Vitamin C có trong 1 số loại rau quả
Theo "Bảng thành phần hóa học thức ăn Việt Nam" (NXB Y học - 1972), rau ngót chứa hàm lượng vitamin C cao nhất với 185 mg% trong 100g, tiếp theo là cần tây (150 mg%), rau mùi (140 mg%), và kinh giới (110 mg%) Các loại rau khác như rau đay (77 mg%), súp lơ, rau thơm, su hào, rau diếp, và rau muống cũng có chứa vitamin C Trong số các loại quả, thanh trà đứng đầu với 177 mg%, sau đó là bưởi (95 mg%), thị (81 mg%), ổi (62 mg%), nhãn (58 mg%), đu đủ chín (54 mg%), cùng với quýt, cam, chanh, vải, và dứa.
Bảng 1.1: Hàm lƣợng vitamin C có trong một số loại rau quả
Hầu hết các loài động vật có khả năng tổng hợp đủ lượng vitamin C cần thiết cho cơ thể, vì vậy vitamin này thường được tìm thấy trong các mô của chúng, đặc biệt là trong gan và thận, với nồng độ dao động từ 10-40 mg/100g.
Một số sinh vật (nấm, nấm men, tảo) sản sinh một lƣợng rất nhỏ acid L-ascorbic cần cho quá trình trao đổi chất của chúng
Cho đến nay chƣa tìm thấy acid ascorbic ở vi khuẩn, hình nhƣ chúng không cần loại acid này
Vitamin C đã được sản xuất thương mại bằng cách chiết xuất từ thực vật
Tổng hợp hóa học, bằng con đường lên men và phương pháp hỗn hợp lên men/ tổng hợp hóa học
Các sản phẩm chứa vitamin C chủ yếu được tổng hợp bằng phương pháp hoá học đi từ D-glucose
4 100 Kinh giới 110 10 100 Đu đủ chín 54
- Tinh thể bột trắng hoặc hơi ngà vàng, không mùi, vị chua
- 1 gam hoà tan khoảng 3 ml H 2 O, 30 ml alcol, 100 ml glycerol Không tan trong cloroform, ether, benzen, dầu, chất béo
- Năng suất quay cực: [α]D 20 từ +20,5 o đến +21.5 o (dung dịch vitamin C 10% trong nước ở 20 o C)
- Acid ascorbic có khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại, UV max = 254 nm (E 1% 1cm 695) tại pH= 2; UV max = 265 nm (E 1% 1cm = 940) tại pH= 6,4
Tính hoá học của vitamin C chủ yếu được xác định bởi nhóm chức lacton và các nhóm hydroxyl, nhưng quan trọng nhất là nhóm endiol, nhóm này chịu trách nhiệm cho tính axit và tính khử của acid ascorbic.
Mặc dù vitamin C không chứa nhóm –COOH, nhưng vẫn mang tính axit do hiệu ứng liên hợp của nhóm carboxyl Điều này làm cho nguyên tử H trong nhóm –OH gắn trên carbon có nối đôi trở nên linh động và dễ tách ra, tạo ra tính axit Hơn nữa, khi hòa tan trong nước, một lượng nhỏ vitamin C sẽ bị thủy phân và tạo thành axit.
Có thể định lượng acid ascorbic bằng phương pháp đo kiềm, chỉ thị phenolphthalein, dung môi là nước
Do có tính acid mạnh nên acid ascorbic dễ tan trong các dung dịch kiềm cũng nhƣ carbonat kim loại kiềm
Sắt (II) sulfat và sắt (III) clorid thường được sử dụng làm thuốc thử để định tính acid ascorbic Phương pháp này dựa vào sự thay đổi màu sắc của dung dịch để nhận diện sự hiện diện của acid ascorbic trong mẫu thử.
Tính khử: Việc oxy hoá acid ascorbic xảy ra ở hai mức độ khác nhau:
- Sự oxy hoá khử thuận nghịch acid ascorbic thành acid dehydroascorbic
Tính chất của acid ascorbic đóng vai trò quan trọng trong tác dụng sinh học của nó, khi tham gia vào các hệ enzym xúc tác cho các quá trình oxy hóa khử trong cơ thể.
- Sự oxy hoá bất thuận nghịch acid ascorbic
Quá trình oxy hoá này tạo ra các sản phẩm nhƣ acid 2,3-diceto gulonic (1), acid dehydroascorbic, furfurol (2), và các sản phẩm không có hoạt tính enzym
Acid ascorbic trong dung dịch dễ bị oxy hóa bởi oxy trong không khí Độ ổn định của dung dịch acid ascorbic giảm theo nồng độ và tăng theo pH Các yếu tố xúc tác quá trình oxy hóa bao gồm ánh sáng, nhiệt độ, chất kiềm, enzym và các kim loại như đồng, sắt.
Vitamin C cần cho sự tạo thành colagen, tu sửa mô trong cơ thể và tham gia trong một số phản ứng oxy hoá khử
Vitamin C đóng vai trò quan trọng trong quá trình chuyển hóa phenylalanin, tyrosin, acid folic, norepinephrin, histamin và sắt, cũng như trong các hệ thống enzym chuyển hóa thuốc Ngoài ra, vitamin C còn tham gia vào việc sử dụng carbohydrate, tổng hợp lipid và protein, hỗ trợ chức năng miễn dịch, tăng cường đề kháng với nhiễm khuẩn, bảo vệ sự toàn vẹn của mạch máu và hỗ trợ hô hấp tế bào.
Vitamin C có tác dụng tăng cường tổng hợp interferon, một chất quan trọng giúp chống lại stress và nâng cao sức đề kháng của cơ thể Ngoài ra, vitamin C còn giảm độ nhạy cảm của cơ thể với histamin, do đó được sử dụng để chống stress, ngăn ngừa nhiễm trùng và giảm triệu chứng dị ứng.
Acid ascorbic bị oxy hóa thành acid dehydroascorbic, một phản ứng oxy hóa khử thuận nghịch Vitamin C đóng vai trò như một đồng yếu tố (cofactor), tham gia vào nhiều phản ứng hóa sinh quan trọng trong cơ thể.
Làm dễ dàng sự chuyển prolin, lysin sang hydroxyprolin và hydroxylysin (trong tổng hợp collagen)
Giúp chuyển acid folic thành acid folinic trong tổng hợp carnitin
Tham gia xúc tác oxy hóa thuốc qua microsom (cytochrom P450) gan
Giúp dopamin hydroxyl hoá thành nor-adrenalin
Giúp dễ hấp thu sắt do khử Fe 3+ thành Fe 2+ ở dạ dày, để rồi dễ hấp thụ ở ruột
Ở mô, Vitamin C giúp tổng hợp collagen, proteoglycan và các thành phần hữu cơ khác ở răng, xương, nội mô mao mạch
Vitamin C có mặt trong thiên nhiên cùng với vitamin P, một loại vitamin có tính chống oxy hóa, giúp bảo vệ Vitamin C Vitamin P không chỉ hỗ trợ Vitamin C trong việc làm bền vững thành mạch mà còn tăng cường sản xuất collagen, ức chế hyaluronidase Ngoài ra, vitamin P còn phối hợp với Vitamin C, Vitamin E, β-caroten và selen để tham gia vào quá trình thanh thải gốc tự do có hại trong cơ thể.
Vitamin C được hấp thụ dễ dàng qua đường uống, tuy nhiên, quá trình hấp thụ này có thể bị hạn chế khi sử dụng liều cao Nghiên cứu cho thấy chỉ khoảng 50% liều 1,5 g vitamin C được hấp thụ ở người bình thường Hấp thụ vitamin C có thể giảm ở những người bị tiêu chảy hoặc bệnh lý về dạ dày - ruột Nồng độ vitamin C bình thường trong huyết tương dao động từ 10 - 20 microgam/ml, và tổng lượng vitamin C dự trữ trong cơ thể ước tính khoảng 1,5 g, với khoảng 30 - 45 mg được luân chuyển hàng ngày Triệu chứng lâm sàng của bệnh scorbut thường xuất hiện rõ ràng sau 3 - 5 tháng thiếu hụt vitamin C.
Phân bố: Vitamin C phân bố rộng rãi trong các mô cơ thể Khoảng 25% vitamin C trong huyết tương kết hợp với protein
Vitamin C được thải trừ qua quá trình oxy hóa thuận nghịch thành acid dehydroascorbic Một phần vitamin C sẽ chuyển hóa thành các hợp chất không có hoạt tính như ascorbic acid - 2 - sulfat và acid oxalic, sau đó được bài tiết qua nước tiểu Khi lượng vitamin C hấp thụ hàng ngày vượt quá 200 mg, cơ thể sẽ nhanh chóng đào thải lượng thừa này ra ngoài dưới dạng không biến đổi.
Vitamin C là một thành phần quan trọng trong hệ thống phòng thủ chống oxy hóa của cơ thể Các chất chống oxy hóa như vitamin E, beta-caroten và vitamin C có khả năng chuyển đổi các tác nhân gây oxy hóa thành những chất vô hại, giúp thải chúng ra ngoài qua nước tiểu.
Vài nét về các chế phẩm chứa vitamin C lưu hành trên thị trường
Theo Bộ Y tế, Việt Nam hiện có 178 doanh nghiệp sản xuất thuốc, bao gồm 98 doanh nghiệp sản xuất thuốc tân dược và 80 doanh nghiệp sản xuất thuốc đông dược, cùng với hơn 300 cơ sở sản xuất thuốc đông dược Thuốc sản xuất trong nước đã đáp ứng 234/314 hoạt chất trong danh mục thuốc thiết yếu và đầy đủ 29 nhóm tác dụng dược lý theo khuyến cáo của Tổ chức Y tế Thế giới Trong số đó, vitamin C là một trong những hoạt chất thuộc nhóm vitamin và các hợp chất vô cơ nằm trong danh mục thuốc thiết yếu, được Ngành Y tế chú trọng trong xuất khẩu, nhập khẩu, sản xuất, phân phối, tồn trữ và sử dụng thuốc an toàn, hợp lý Do đó, chế phẩm vitamin C trên thị trường hiện nay rất đa dạng về xuất xứ, dạng bào chế, hàm lượng và mẫu mã.
Các sản phẩm của các công ty nước ngoài được sản xuất bằng công nghệ hiện đại và đạt tiêu chuẩn chất lượng cao, dẫn đến giá thành cao hơn nhiều so với sản phẩm nội địa Điều này khiến chúng chỉ phù hợp với một nhóm nhỏ khách hàng.
Vitamin C hiện có nhiều dạng bào chế như viên nhộng, viên nén, viên nén bao phim, viên nang, viên ngậm, siro, viên sủi và phóng thích hẹn giờ Trong số đó, acid ascorbic là dạng phổ biến và giá rẻ nhất Các dạng đệm như muối Natri, magnesium, calcium và kali ascorbate được sử dụng chủ yếu để giảm tác động của acid ascorbic lên dạ dày Tuy nhiên, một số dạng này có thể gây ảnh hưởng đến bệnh nhân nhạy cảm với Natri, như những người bị suy thận.
Gần đây, Ester-C, một dạng vitamin C mới, đã xuất hiện trên thị trường Theo các nhà sản xuất, Ester-C được cho là giúp cải thiện khả năng hấp thụ và sử dụng vitamin C trong cơ thể Tuy nhiên, các nghiên cứu hiện tại chưa chứng minh rằng Ester-C hiệu quả hơn so với dạng thông thường Thêm vào đó, giá thành của Ester-C cao gấp ba lần so với vitamin C thông thường.
Nói chung thì dạng đơn giản và kinh tế nhất, phù hợp cho mọi người nhất đơn giản là acid ascorbic
Hàm lượng vitamin C trong các sản phẩm trên thị trường rất đa dạng, dao động từ 100 đến 1000 mg, tùy thuộc vào mục đích sử dụng và nhu cầu của từng đối tượng.
Ngoài các chế phẩm chứa riêng acid ascorbic, còn có những sản phẩm kết hợp giữa acid ascorbic và các hoạt chất khác như bioflavonoid Việc sử dụng vitamin C cùng với bioflavonoid có thể tăng cường khả năng hấp thụ vitamin C, tuy nhiên, điều này chỉ xảy ra khi hàm lượng bioflavonoid trong sản phẩm đạt mức đáng kể, tức là khi hàm lượng bioflavonoid bằng hoặc lớn hơn hàm lượng vitamin C.
Hình 1.2: Một số chế phẩm chứa vitamin C lưu hành trên thị trường
Tổng quan về các phương pháp định lượng vitamin C
Việc phân tích vitamin C trong dƣợc phẩm nói riêng và các chế phẩm chứa vitamin
Vitamin C là yếu tố quan trọng trong việc đánh giá chất lượng sản phẩm ảnh hưởng đến sức khỏe con người Các phương pháp định lượng vitamin C được phân chia thành hai nhóm chính.
Phương pháp cực phổ là một trong những phương pháp hóa lý có ý nghĩa thực tiễn, đặc biệt trong nghiên cứu vitamin C Trong những năm gần đây, phương pháp này đã được phát triển mạnh mẽ và ứng dụng để nghiên cứu acid ascorbic từ góc độ lý thuyết Đồng thời, sắc ký với những kiến thức mới quý giá cũng đã được áp dụng để nghiên cứu acid ascorbic ở dạng kết hợp Ngoài ra, nhiều phương pháp đo màu hiệu quả đều dựa trên phản ứng của acid ascorbic ở dạng oxi hóa.
1.3.1.1 Phương pháp chuẩn độ acid – bazơ: dựa vào tính acid của vitamin C, có thể định lƣợng vitamin C bằng dịch natri hyđroxid NaOH
Axit ascorbic trong dung môi nước là axit phân ly hai nấc với pKa lần lượt là 4,2 và 11,6, tương ứng với sự phân ly H+ của nhóm –OH tại C3 và C2 Axit này dễ dàng phản ứng với dung dịch kiềm để tạo ra muối Để định lượng axit ascorbic, có thể sử dụng phản ứng chuẩn độ nấc 1 với NaOH và chỉ thị phenolphthalein.
1.3.1.2 Phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử: dựa vào tính khử của vitamin C
Axit L- ascorbic bị oxi hóa thành axit L- dehydroascorbic theo bán phản ứng oxihóa sau đây ( E 0 = 0,127V ở pH=5)
Quá trình oxy hóa ascorbic xảy ra ở hai mức độ khác nhau:
Sự oxy hóa thuận nghịch của vitamin C thành axit dehydroascorbic là một tính chất quan trọng, góp phần vào tác dụng sinh học của axit ascorbic Tính chất này cho phép vitamin C tham gia xúc tác các quá trình oxy hóa khử trong cơ thể, từ đó hỗ trợ nhiều chức năng sinh lý thiết yếu.
Sự oxy hóa bất thuận nghịch của vitamin C dẫn đến việc hình thành các sản phẩm không có hoạt tính và gây biến màu Phản ứng oxy hóa này diễn ra nhanh chóng khi pH và nhiệt độ của dung dịch tăng Các chất oxy hóa phổ biến được sử dụng để oxy hóa axit ascorbic bao gồm brom, iot và thuốc thử.
Fehling, dung dịch KMnO 4 , dung dịch AgNO 3 , 2,6-diclorophenolindophenol… Phương pháp chuẩn độ được tiến hành bằng cách nhỏ từ từ dung dịch thuốc thử từ
Khi thêm dung dịch NaOH vào dung dịch chứa axit ascorbic trong môi trường phù hợp, điểm tương đương sẽ được xác định thông qua sự chuyển màu của dung dịch nhờ vào chất chỉ thị thích hợp.
Cơ chế phản ứng của phương pháp định lượng vitamin C bằng Iod
+ I 2 +2HI 2HI dùng chỉ thị hồ tinh bột để nhận biết điểm tương đương
Dùng Amonium ceri (IV) sulfat
Cơ chế phản ứng của phương pháp định lượng vitamin C bằng Amonium ceri (IV) sulfat
Dựa vào sự thay đổi màu sắc của dung dịch Ceri để nhận biết
Cơ chế phản ứng của phương pháp định lượng vitamin C bằng 2,6- diclorophenol-indophenol
Acid ascorbic Acid dehydroascorbic Acid dehydroascorbic
Nhận biết điểm tương đương: Xuất hiện màu hồng bền vững
Cực phổ nghiệm là phương pháp đặc trưng để định lượng hàng loạt, trong đó acid ascorbic thể hiện tính chất cực phổ tương tự như các endiol khác với số sóng anot đôi điện tử không thuận nghịch Mặc dù sóng cực phổ của acid dehydroascorbic có tính khử, nhưng nó thấp hơn nhiều so với sóng anot của acid ascorbic Cơ chế này vẫn chưa được làm rõ Tính chất của acid ascorbic trong phương pháp oxi hóa và sự thay đổi thế năng chuẩn theo pH cho thấy dạng endiol có khả năng trao đổi đôi điện tử với điện cực một cách thuận nghịch.
1.3.2.2 Phương pháp quang phổ tử ngoại khả kiến UV- VIS:
Phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến là một công cụ quan trọng trong kiểm nghiệm thuốc, được áp dụng rộng rãi trong các dược điển để thực hiện định tính, định lượng và kiểm tra độ tinh khiết của các thuốc và chế phẩm Độ hấp thụ của mẫu là yếu tố chính trong quá trình phân tích này.
Khi bức xạ đơn sắc đi qua môi trường chứa chất hấp thụ, độ hấp thụ của bức xạ tỷ lệ thuận với nồng độ chất hấp thụ và chiều dày của môi trường hấp thụ Mối quan hệ này được mô tả bởi định luật Lambert – Beer, được thể hiện qua một phương trình cụ thể.
Trong đó: T: độ truyền qua
: cường độ ánh sáng đơn sắc tới
I: cướng độ ánh sáng đơn sắc sau khi đã truyền ua dung dịch
K: hệ số hấp thu phụ thuộc vào λ, thay đổi theo cách biểu thị nồng độ
L: chiều dài của lớp dung dịch C: nồng độ chất tan trong dung dịch b Ứng dụng phổ UV – VIS trong kiểm nghiệm thuốc
Định tính và thử tinh khiết
Định lượng: các phương pháp định lượng
Phương pháp đo phổ trực tiếp cho phép xác định độ hấp thụ D của dung dịch, từ đó tính toán nồng độ C dựa vào giá trị độ hấp thụ riêng có sẵn trong các bảng tra cứu.
D = L C L = 1cm C= Để áp dụng phương pháp này, cần phải chuẩn hóa máy quang phổ cả về bước sóng lẫn độ hấp thụ
Các phương pháp gián tiếp bao gồm phương pháp đường chuẩn, so sánh và thêm chuẩn, tương tự như các phương pháp hóa lý khác Đặc điểm nổi bật của các phương pháp này là khả năng cung cấp kết quả chính xác thông qua việc sử dụng các tiêu chuẩn và so sánh.
- Phải có chất chuẩn để so sánh
- Có thể không cần phải chuẩn máy
1.3.2.3 Phương pháp sắc kí lỏng cao áp hiệu năng cao HPLC: a Nguyên tắc:
Phương pháp HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) là một kỹ thuật phân tích hóa lý, được sử dụng để tách và định lượng các thành phần trong hỗn hợp dựa trên sự khác biệt về ái lực giữa các chất với hai pha không hòa lẫn: pha tĩnh trong cột hiệu năng cao và pha động là dung môi rửa giải Khi dung dịch hỗn hợp được đưa vào cột, các chất sẽ được hấp phụ hoặc phân bố vào pha tĩnh tùy thuộc vào tính chất của cột và chất phân tích Việc bơm dung môi pha động với áp suất cao sẽ khiến các chất di chuyển qua cột với tốc độ khác nhau, dẫn đến sự phân tách rõ ràng giữa các thành phần.
Sau khi các chất rời khỏi cột, chúng sẽ được phát hiện bởi bộ phận gọi là detector và sau đó được chuyển đến bộ xử lý kết quả Kết quả cuối cùng sẽ được hiển thị trên màn hình hoặc in ra máy in.
Quá trình phân tách trong kỹ thuật HPLC diễn ra thông qua sự vận chuyển và phân bố của các chất tan giữa hai pha khác nhau Khi pha động di chuyển với tốc độ nhất định qua cột sắc ký, nó sẽ đẩy các chất tan bị pha tĩnh giữ lại ra khỏi cột Quá trình rửa giải này giúp tách các chất dựa vào bản chất của pha tĩnh, chất tan và dung môi Kết quả của quá trình tách sắc ký được ghi lại dưới dạng sắc đồ.
Hình 1.3: Sơ đồ máy HPLC
1- Bình bơm dung môi 4- Tiêm 7- Phần mềm xử lý
2- Bộ trộn dung môi 5- Cột 8- Máy in
3- Bơm 6- Detector d Định lượng bằng phương pháp HPLC
Tất cả các phương pháp định lượng trong sắc ký đều dựa trên nguyên tắc rằng nồng độ của chất phân tích tỷ lệ thuận với chiều cao hoặc diện tích của peak tương ứng.
Có 4 pháp định lƣợng đƣợc sử dụng trong sắc ký đó là:
Phương pháp chuẩn hóa diện tích
Trong phạm vi của đề tài này, tôi chọn phương pháp chuẩn ngoại là phương pháp định lƣợng vitamin C có trong chế phẩm
NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Các dụng cụ thủy tinh thiết yếu trong phân tích bao gồm ống nghiệm, bình tam giác, bình định mức, buret, pipet, phễu, cốc, đũa thủy tinh và một số dụng cụ cần thiết khác Những dụng cụ này đóng vai trò quan trọng trong việc thực hiện các thí nghiệm và phân tích chính xác trong phòng thí nghiệm.
Các dụng cụ khác: cối chày, quả bóp cao su, bình tia nước cất
Trong lĩnh vực phân tích, các thiết bị và máy móc quan trọng bao gồm cân phân tích, máy đo độ rã, máy đo pH, máy đo quang phổ UV-VIS, và máy sắc kí lỏng cao áp HPLC, cùng với một số thiết bị cần thiết khác.
Essential chemicals for laboratory procedures include standard ascorbic acid, sodium thiosulfate solution, crystalline iodine, pure potassium iodate, sodium hydroxide, silver nitrate solution, acetic acid, hydrochloric acid, nitric acid, disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, phosphoric acid solution, starch indicator, phenolphthalein, and various other necessary reagents.
Chế phẩm vitamin C nội địa có mặt trên thị trường dưới nhiều dạng bào chế phong phú như viên nén, viên nang, dạng sủi, siro, viên ngậm và thuốc tiêm truyền Hàm lượng vitamin C trong các sản phẩm này cũng rất đa dạng, dao động từ 100 đến 1000mg.
Khảo sát tại các nhà thuốc, quầy thuốc và bệnh viện ở Thừa Thiên Huế cho thấy chế phẩm viên nén 500mg và thuốc tiêm 500mg/5ml là những sản phẩm phổ biến nhất trên thị trường.
Trong phạm vi của đề tài này, chúng tôi lựa chọn nghiên cứu một số chế phẩm của đại diện các đơn vị sau:
Bảng 2.1: Chế phẩm chƣa vitamin C viên nén 500mg
STT Cơ sở sản xuất Số đăng kí Lô sản xuất
1 Công ty CPDP TW3 VD – 11170 – 10
2 Công ty CPDP Quảng Bình VD – 12925 – 10
3 Công ty CPDP Đại Uy - Hà Nội 2123/2011/YT –
4 Công Ty CPDP Trung Ƣơng Vidipha VD – 17981 – 12 150613
5 Công ty LDDP Éloge France Viet Nam VD – 7354 - 09
6 Công ty CPDP Euvipharm VD – 8608- 09
Công ty CPDP Cửu Long
Bảng 2.2: Chế phẩm chứa vitamin C dạng thuốc tiêm 500mg/5ml
STT Cơ sở sản xuất Số đăng kí Lô sản xuất
Tuy Hòa Phú Yên Lanocorbic VD – 5800 – 08 010513
Fresenius Kabi Bidiphar VD – 18045 – 12 86GHA131,
4 Công ty cổ phần dƣợc phẩm trung ƣơng Vidipha VD – 10463 - 10 100413
Công ty Laboratoire Aguettant –France VN -14236 -11 T -2282B
2.3 Pha một số dung dịch dùng trong phân tích:[5]
Hòa tan 4,5g NaOH trong 5ml nước, sau đó đậy kín bằng nút cao su và để yên qua đêm Sau khi để yên, gạn lấy phần dung dịch trong ở phía trên và pha loãng với nước không có CO2 cho đủ 1000ml.
Lấy 20ml dung dịch NaOH đã chuẩn bị cho vào bình nón nút mài, sau đó thêm chất chỉ thị phenolphtalein và tiến hành chuẩn độ bằng dung dịch HCl chuẩn 0,1N.
Pha dung dịch đệm sulfat pH = 2
Dung dịch 1: hòa tan 132,1g amonisulfat trong H2O vừa đủ 500ml
Dung dịch 2: thêm từ từ 14ml H 2 SO4 vào khoảng 400ml H 2 O vừa thêm vừa khuấy vừa làm nguội Để dung dịch nguội hoàn toàn, thêm H 2 O vừa đủ 500ml
Trộn dung dịch 1 và 2 đồng thể tích
Cân 3,25g iốt tinh thể và 5,00g KI vào cốc 250ml Thêm 30ml nước H2O và khuấy trong tủ hút cho đến khi tan hoàn toàn Sau đó, thêm khoảng 100ml nước H2O và lọc qua phễu có bông hút nước vào bình định mức 250ml Cuối cùng, tráng cốc bằng 50ml nước.
H 2 O cất và lọc tiếp vào bình định mức này Thêm H 2 O đến vạch, đậy nút, lắc đều
Để tiến hành chuẩn độ, lấy 25ml dung dịch I2 đã pha vào bình nón nút mài, sau đó thêm 30ml nước (H2O) Tiếp theo, chuẩn độ bằng dung dịch Na2S2O3 0,1N cho đến khi dung dịch chuyển sang màu vàng nhạt Cuối cùng, thêm 2ml dung dịch hồ tinh bột và tiếp tục chuẩn độ cho đến khi màu sắc biến mất hoàn toàn.
KIO 3 tinh thể đƣợc sấy ở 130 0 C đến khối lƣợng không đổi
Hòa tan 3,567g KIO 3 chuẩn gốc ở trên vào nước vừa đủ đến 1000ml
Để thực hiện chuẩn độ, lấy 25ml dung dịch KIO3 vừa pha cho vào bình nón nút mài, sau đó thêm 30ml nước (H2O) Tiến hành chuẩn độ bằng dung dịch Na2S2O3 0,1N cho đến khi dung dịch chuyển sang màu vàng nhạt Cuối cùng, thêm 2ml dung dịch hồ tinh bột và tiếp tục chuẩn độ cho đến khi màu sắc biến mất.
Trong nghiên cứu này, các chế phẩm chứa vitamin C được đánh giá theo các tiêu chí quy định trong Dược Điển Việt Nam IV, bao gồm tính chất cảm quan, độ rã của viên nén, độ đồng đều khối lượng của viên nén và viên nang, pH của thuốc tiêm, cùng với các phương pháp định tính Đặc biệt, hàm lượng vitamin C được định lượng thông qua hai phương pháp khác nhau.
- Phương pháp chuẩn độ acid – bazơ: chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1N
Phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử được thực hiện bằng dung dịch I2 0,1N cho các chế phẩm viên nén và viên nang, trong khi dung dịch KIO3 được sử dụng cho các chế phẩm thuốc tiêm.
- Phương pháp quan phổ tử ngoại khả kiến UV – VIS
- Phương pháp sắc kí lỏng cao áp hiệu năng cao HPLC
Viên rắn có hai mặt nhẵn, có thể có rãnh, chữ hoặc ký hiệu trên bề mặt Các cạnh và thành viên của viên phải được giữ nguyên vẹn, không bị gãy vỡ hoặc bở vụn trong quá trình bảo quản, phân phối và vận chuyển.
+ Viên màu trắng hay trắng ngà (đối với viên không bao phim)
+ Viên giữ đƣợc màu bao phim ban đầu (đối với viên có bao phim)
Nang cứng, bột thuốc trong nang màu trắng hoặc trắng ngà, không mùi
Đối với thuốc tiêm: Dung dịch trong, không màu hay màu vàng nhạt
2.3.2 Độ đồng đều khối lƣợng ( đối với viên nén và viên nang)[5]
Cân chính xác 20 viên bất kỳ và xác định khối lƣợng trung bình của viên
Cân từng viên để xác định khối lượng và so sánh với khối lượng trung bình Tính độ lệch phần trăm của khối lượng so với giá trị trung bình, từ đó xác định khoảng giới hạn cho giá trị trung bình.
Cân riêng biệt 20 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lƣợng trung bình
Để xác định khối lượng thuốc trong nang, trước tiên cần cân khối lượng của toàn bộ nang Sau đó, tháo rời hai nửa vỏ nang và lau sạch bằng bông Tiếp theo, cân khối lượng của vỏ nang Khối lượng thuốc trong nang được tính bằng hiệu số giữa khối lượng nang thuốc và khối lượng vỏ nang.
Tiến hành tương tự với 19 đơn vị khác lấy ngẫu nhiên Tính khối lượng trung bình của thuốc trong nang
2.3.3 Độ rã: (đối với viên nén)[5]
Thuốc đƣợc coi là rã, khi đáp ứng một trong những yêu cầu sau:
+ Không còn cắn trên mặt lưới
+ Nếu còn cắn, đấy là khối mềm không có màng nhận thấy rõ, không có nhân khô
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1 Đường chuẩn của dung dịch acid ascorbic:
3.1.1 Đường chuẩn của dung dịch acid ascorbic theo phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến UV – VIS
Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của D và C Nhận xét:
Phương trình hồi quy y = 0.049x – 0.2964 thể hiện mối quan hệ giữa độ hấp thụ (D) và nồng độ (C) Dựa vào phương trình đường chuẩn và giá trị độ hấp thụ D từ các mẫu chế phẩm, chúng ta có thể tính toán nồng độ thực tế của các mẫu này.
Hệ số tương quan R 2 = 0.9828 là khá cao đánh giá mức độ tin cậy của phương pháp
3.1.2 Đường chuẩn của dung dịch acid ascorbic theo phương pháp sắc kí lỏng cao áp hiệu năng cao HPLC
Nồng độ C(ppm) Đường chuẩn của dd acid ascorbic
Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của S peak và C
Phương trình hồi quy y = 45.288x – 57.99 mô tả mối quan hệ giữa diện tích peak (S peak) và nồng độ (C) Dựa vào phương trình chuẩn và giá trị S peak của các mẫu chế phẩm, chúng ta có thể tính toán nồng độ thực của các mẫu.
Hệ số tương quan R 2 = 0.9872 là khá cao đánh giá mức độ tin cậy của phương pháp
3.2 Đánh giá chất lƣợng viên nén 500mg:
3.2.1 Chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP TW3
Quy cách đóng gói: hộp 10 vỉ x 10 viên nén bao phim
Hình 3.3: Viên nén 500mg của CT CPDP TW3
Nồng độ C(ppm) Đường chuẩn của dd acid ascorbic
Lô sản xuất: ằ 3512 (NSX: 12/12/2012, HDS:12/12/2014) ằ 2013(NSX: 11/05/2013, HDS: 11/05/2015) ằ 2713(NSX: 19/07/2013,HDS: 19/07/2015) ằ 2213(NSX: 16/05/2013, HDS: 16/05/2015)
3.2.1.1 Kết quả đánh giá các chỉ tiêu về định tính:
Sau khi đánh giá các chỉ tiêu chất lượng của viên nén 500 mg, bao gồm phản ứng định tính, tính chất cảm quan, độ đồng đều khối lượng và độ rã, chúng tôi đã thu được kết quả được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 3.1: Kết quả các chỉ tiêu về định tính chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP TW3
Tính chất cảm quan Định tính Độ đồng đều khối lƣợng Độ rã
3512 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 8’26’’
2013 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 7’59’’
2713 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 8’22’’
3512 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 8’37’’
Viên thuốc có hình dạng rắn, được bao phim màu cam, với hai mặt nhẵn và có thể có rãnh, chữ hoặc ký hiệu trên bề mặt Cạnh và thành viên của viên thuốc đều lành lặn Tất cả các lô sản xuất 3512, 2013, 2713, 3512 đều đạt yêu cầu về tính chất cảm quan.
Định tính: tất cả các chế phẩm đều có phản ứng định tính đặc trƣng của acid ascorbic
Độ đồng đều khối lượng của các mẫu chế phẩm từ các lô sản xuất phải tuân thủ quy định của DĐVH IV, trong đó không quá hai đơn vị có khối lượng nằm ngoài giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình, với tỷ lệ chênh lệch tối đa là 5% Đồng thời, không được có đơn vị nào có khối lượng vượt gấp đôi giới hạn này.
Tất cả các mẫu chế phẩm từ các lô sản xuất đều có độ rã nhanh hơn nhiều so với tiêu chuẩn DĐVN IV, với viên nén bao phim yêu cầu độ rã dưới 30 phút Mỗi mẫu đều đạt yêu cầu về độ rã, đảm bảo chất lượng sản phẩm.
3.2.1.2 Kết quả đánh giá định lƣợng: Đối với viên nén ta định lượng theo 2 phương pháp:
+ Phương pháp hóa học: Định lượng bằng dung dịch NaOH 0,1 N và dung dịch Iod 0,1 N
+ Phương pháp hóa lý: Định lượng bằng phương pháp qung phổ hấp thu tử ngoại khả kiến UV- VIS và phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC
Bảng 3.2: Kết quả định lƣợng chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT
Phương pháp hóa học Phương pháp hóa lí Chuẩn độ acid - bazơ
Chuẩn độ oxi hóa khử UV - VIS HPLC
Kết quả định lượng hàm lượng vitamin C trong chế phẩm cho thấy sự khác biệt rõ rệt giữa các phương pháp định lượng Phương pháp hóa học cho ra hàm lượng vitamin C cao hơn nhiều so với phương pháp hóa lý Sự chênh lệch này chủ yếu do phương pháp hóa học là phương pháp cổ điển, trong khi đó, kết quả định lượng có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như sai số dụng cụ, sai số trong quá trình pha dung dịch chuẩn và sai số trong thao tác chuẩn độ.
Kết quả từ bảng cho thấy chế phẩm của các lô sản xuất 3512 và 2713 không đạt yêu cầu của DĐVN IV, trong khi hai lô còn lại đáp ứng đúng tiêu chuẩn DĐVN IV với mức đạt từ 95 – 110%.
Tổng hợp kết quả đánh giá chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP TW3
Bảng 3.3: Kết quả đánh giá chất lƣợng chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP TW3
3.1.1 Chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP Quảng Bình
Quy cách đóng gói: hộp 10 vỉ x
Hình 3.4: Viên nén 500mg của CT CPDP Quảng Bình
Lô sản xuất: ằ 11 ( NSX:01/06/2012, HDS: 02/06/2014) ằ 13( NSX: 02/06/2012, HDS: 03/06/2014) ằ 27 ( NSX: 28/06/2013, HDS: 29/06/2015)
3.2.2.1 Kết quả đánh giá các chỉ tiêu về định tính:
Tính chất cảm quan Độ đồng đều khối lƣợng Độ rã Định tính Hàm lƣợng
3512 Đạt Đạt Đạt Đạt Không đạt
2013 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt
2713 Đạt Đạt Đạt Đạt Không đạt
2213 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt
Sau khi đánh giá các chỉ tiêu chất lượng của viên nén 500 mg, bao gồm phản ứng định tính, tính chất cảm quan, độ đồng đều khối lượng và độ rã bằng máy thử độ rã, chúng tôi đã thu được kết quả được trình bày trong bảng 3.4.
Bảng 3.4: Kết quả các chỉ tiêu về định tính chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP Quảng Bình
TÍNH CHẤT CẢM QUAN ĐỘ ĐỒNG ĐỀU
KHỐI LƢỢNG ĐỊNH TÍNH ĐỘ
11 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 13’00’’
13 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 12’50’’
27 Viên bao phim màu cam
Xuất hiện kết tủa xám đen Đạt giới hạn theo phần trăm chênh lệch 13’22’
Viên thuốc có hình dạng rắn, được bao phim màu cam, với hai mặt nhẵn và có thể có rãnh, chữ hoặc ký hiệu trên bề mặt Cạnh và thành viên của viên thuốc đều lành lặn Tất cả các chế phẩm từ ba lô sản xuất 11, 13, và 27 đều đáp ứng yêu cầu về tính chất cảm quan.
Tất cả các chế phẩm đều thể hiện phản ứng định tính đặc trưng của acid ascorbic, cụ thể là sự xuất hiện của kết tủa xám đen khi phản ứng với dung dịch AgNO3.
Độ đồng đều khối lượng của các mẫu chế phẩm trong các lô sản xuất phải tuân thủ quy định của DĐVH IV, với yêu cầu không có quá hai đơn vị có khối lượng nằm ngoài giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình, cụ thể là tỷ lệ chênh lệch không vượt quá 5% Hơn nữa, không được có đơn vị nào có khối lượng vượt gấp đôi giới hạn này.
Tất cả các mẫu chế phẩm từ các lô sản xuất đều có độ rã nhanh hơn nhiều so với yêu cầu của DĐVN IV, với thời gian độ rã của viên nén bao phim dưới 30 phút Mọi mẫu đều đạt tiêu chuẩn về độ rã.
3.2.2.2 Kết quả đánh giá định lƣợng: Đối với viên nén ta định lượng theo 2 phương pháp:
+ Phương pháp hóa học: Định lượng bằng dung dịch NaOH 0,1 N và dung dịch Iod 0,1 N
+ Phương pháp hóa lý: Định lượng bằng phương pháp qung phổ hấp thu tử ngoại khả kiến UV- VIS và phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC
Bảng 3.5: Kết quả đánh giá định lƣợng chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của
Phương pháp hóa học Phương pháp hóa lí Chuẩn độ acid- bazơ
Chuẩn độ oxi hóa khử UV – VIS HPLC
Kết quả định lượng bằng phương pháp hóa học sai số nhiều so với phương pháp hóa lí
Cả 3 lô sản xuất 11, 13, 27 đều đạt yêu cầu về hàm lƣợng theo quy định của DĐVN IV
Tổng hợp kết quả đánh giá chất lƣợng chế phẩm chứa vitamin C dạng viên nén 500mg của CT CPDP Quảng Bình
Bảng 3.6: Kết quả đánh giá chất lƣợng chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của
Tính chất cảm quan Độ đồng đều khối lƣợng Độ rã Định tính Hàm lƣợng
11 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt
13 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt
27 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt
3.2.3 Chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP Đại Uy –Hà Nội
Quy cách đóng gói: hộp 10 vỉ x 10 viên nén bao phim
Số đăng kí: 2123/2011/YT –CNTC
Hình 3.5: Viên nén 500mg của CT CPDP Đại Uy –Hà Nội
Lô sản xuất: ằ 0113( NSX: 03/04/2013, HDS: 03/04/2015) ằ 0212( NSX:02/10/2012 , HDS:02/10/2014)
3.2.3.1 Kết quả đánh giá các chỉ tiêu về định tính:
Sau khi đánh giá các chỉ tiêu chất lượng của viên nén 500 mg, bao gồm phản ứng định tính, tính chất cảm quan, độ đồng đều khối lượng và độ rã được đo bằng máy thử độ rã, chúng tôi đã thu được kết quả chi tiết như trình bày trong bảng 3.7.
Bảng 3.7: Kết quả các chỉ tiêu về định tính chế phẩm chứa vitamin C viên nén 500mg của CT CPDP Đại Uy – Hà Nội
Viên thuốc có hình dạng rắn, được bao phủ bởi lớp phim màu cam, với hai mặt nhẵn Bề mặt viên thuốc có thể có rãnh, chữ hoặc ký hiệu, trong khi các cạnh và thành viên đều nguyên vẹn Cả hai lô sản xuất đều đáp ứng tiêu chuẩn về tính chất cảm quan.
