2778 khảo sát công dụng của một số chế phẩm chứa probiotic trên đang lưu hành trên thị trường

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ HÀ PHÚ CƢỜNG KHẢO SÁT CÔNG DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẾ PHẨM CHỨA PROBIOTIC ĐANG LƢU HÀNH TRÊN THỊ TRƢỜNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC THS DƢƠNG THỊ TRÚC LY Cần Thơ – 2015 MỤC LỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Các môi trường sử dụng …………………………………………… PL1 Phụ lục Kết định danh …………………………………………………….PL6 Phụ lục Kết định lượng ……………………………………………….….PL12 Phụ lục Kết theo dõi cân nặng chuột thử nghiệm … ………………… PL14 Phụ lục kết phân tích thống kê mức độ tăng cân chuột……………… ….PL24 i LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến cô Ths Dƣơng Thị Trúc Ly, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn đề tài, tận tình bảo, động viên ln hỗ trợ em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ Môn Vi Sinh hết lịng quan tâm giúp đỡ, ln động viên tạo điều kiện tốt để em hồn thành luận văn thời gian quy định Em xin chân thành cảm ơn thầy Liên Bộ Mơn Hóa Phân Tích - Kiểm Nghiệm - Độc Chất động viên tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Liên Bộ Môn Dƣợc Lý - Dƣợc Lâm Sàng tận tình giúp đỡ, động viên, tạo tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt luận văn Con xin cảm ơn ba mẹ ln động viên, chăm sóc ủng hộ thời gian thực luận văn Em xin chân thành cám ơn anh chị Trần Mộng Tố Tâm (Dƣợc K34), Nguyễn Thanh Nhàn, Nguyễn Phƣơng Thảo, Trần Hữu Trí (Dƣợc K35), chị Sô Hoanh, em Duy, Niệm, Tấn Cƣờng, Ngọc Hiếu giúp đỡ, động viên em suốt thời gian em thực luận văn ii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa công bố cơng trình khác Cần Thơ, ngày… tháng.….năm 2015 Sinh viên Hà Phú Cƣờng iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan probiotic 1.1.1 Lịch sử phát triển probiotic 1.2.2 Định nghĩa probiotic 1.1.3 Các vi sinh vật đƣợc sử dụng làm probiotic 1.1.4 Cơ chế tác dụng probiotic 1.1.4.1 Probiotic cạnh tranh vị trí receptor 1.1.4.2 Probiotic tác động lên hệ thống miễn dịch 1.1.4.3 Probiotic cạnh tranh dinh dƣỡng với vi khuẩn có hại 1.1.4.4 Tạo môi trƣờng acid 1.1.4.5 Sản xuất enzym có lợi 1.1.4.6 Sản xuất chất ức chế 1.1.5 Tác dụng probiotic 1.1.5.1 Điều trị bệnh đƣờng tiêu hóa 1.1.5.2 Tăng cƣờng hệ miễn dịch 11 1.1.5.3 Hỗ trợ hấp thu lactose 11 1.1.5.4 Giảm cholesterol lợi ích bệnh tim mạch 12 1.1.5.5 Khả chống ung thƣ 13 1.1.5.6 Một số tác dụng khác 13 1.1.6 Tính an tồn probiotic 13 iv 1.2 Tổng quan tiêu chảy sử dụng kháng sinh 14 1.2.1 Thành phần vai trò hệ vi khuẩn đƣờng ruột 14 1.2.2 Tiêu chảy sử dụng kháng sinh 16 1.2.3 Probiotic phòng điều trị tiêu chảy kháng sinh 17 1.3 Một số nghiên cứu liên quan 17 1.4 Một số chế phẩm probiotic thị trƣờng 18 1.4.2 Thực phẩm lên men thực phẩm chức 18 1.4.2 Dƣợc phẩm 19 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.1.2 Động vật thí nghiệm 20 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 20 2.1.4 Mơi trƣờng, hóa chất 20 2.1.4.1 Môi trƣờng 20 2.1.4.2 Hóa chất 21 2.1.5 Trang thiết bị, dụng cụ 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Qui trình kiểm nghiệm chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng……… 22 2.2.1.1 Qui trình phân lập 22 2.2.1.2 Qui trình định danh 24 2.2.1.3 Qui trình định lƣợng 26 2.2.1.4 Qui trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 26 2.2.2 Khảo sát công dụng điều trị tiêu chảy số chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng 28 Chƣơng 31 KẾT QUẢ 31 3.1 Kết kiểm nghiệm chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng 31 v 3.1.1 Kết phân lập định danh 31 3.1.2 Kết đinh lƣợng 34 3.1.3 Kết thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 36 3.2 Kết khảo sát công dụng điều trị tiêu chảy số chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng 37 3.2.1 Kết thử nghiệm đợt 37 3.2.2 Kết thử nghiệm đợt 40 Chƣơng BÀN LUẬN 43 4.1 Kết kiểm nghiệm chế chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng 43 4.1.1 Kết phân lập định danh 43 4.1.1.1 Kết phân lập 43 4.1.1.2 Kết định danh 44 4.1.2 Kết định lƣợng 45 4.1.3 Kết thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 45 4.2 Kết khảo sát công dụng điều trị tiêu chảy chế phẩm chứa probiotic lƣu hành thị trƣờng 46 4.2.1 Kết thử nghiệm đợt 46 4.2.2 Kết thử nghiệm đợt 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 Kết luận 54 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt AND Bi B BA Cfu E EMB ELISA GRAS KIA L LAB MRSA MR-VP MSA S Sa SIM TSA PCR Từ nguyên Acid deoxyribose nucleic Bifidobacterium Bacillus Blood agar Colony forming unit Enterococcus Eosin methylene blue Enzyme-linked immuno sorbent assay Generally recognized as safe Kligler’s iron agar Lactobacillus Lactic acid bacteria De Mann-Rogosa-Sharpe agar Methyl red, VogesProskauer Mannitol salt agar Streptococcus Saccharomyces H2S-Indole-Motility Tryptic soy agar Polymerase Chain Reaction Ý nghĩa Vật chất di truyền cấp độ phân tử Chi Bifidobacterium Chi Bacillus Môi trƣờng thạch máu Đơn vị khuẩn lạc Chi Enterococcus Môi trƣờng chọn lọc E.coli Kỹ thuật sinh hóa phát kháng nguyên, kháng thể Nhóm vi sinh vật đƣợc xem nhƣ an Tồn Mơi trƣờng thử khả lên men glucose, lactose Chi Lactobacillus Vi khuẩn sinh acid lactic Môi trƣờng thạch MRS Thử nghiệm MR – VP Môi trƣờng MSA Chi Streptococcus Chi Saccharomyces Môi trƣờng tìm H2S, indol, khả di động Mơi trƣờng thạch casein đậu tƣơng Kỹ thuật PCR vii DANH MỤC BẢNG Bảng Trang Bảng 1.1 Các vi sinh vật đƣợc sử dụng làm probiotic Bảng 1.2 Tóm tắt chế tác dụng chủng probiotic Bảng 2.1 Trang thiết bị dụng cụ sử dụng 21 Bảng 2.2 Điều kiện phân lập dạng khuẩn lạc 22 Bảng 3.1 Kết phân lập định danh 31 Bảng 3.2 Kết định lƣợng 34 Bảng 3.3 Kết thử vi sinh vật gây bệnh 36 Bảng 3.4 Số lƣợng chuột sống số lƣợng chuột tiêu chảy qua ngày giai đoạn I đợt Bảng 3.5 Mức độ tăng cân chuột nhóm giai đoạn I đợt 37 Bảng 3.6 Tỉ lệ chuột chết lô sau ngày điều trị đợt 38 Bảng 3.7 Tỉ lệ chuột hết tiêu chảy lô sau ngày điều trị đợt 39 Bảng 3.8 Tăng cân trung bình ngày ngày điều trị đợt 39 Bảng 3.9 Số lƣợng chuột sống số lƣợng chuột tiêu chảy qua ngày giai đoạn I đợt Bảng 3.10 Mức độ tăng cân chuột nhóm giai đoạn I đợt 40 Bảng 3.11 Tỉ lệ chuột chết lô sau ngày điều trị đợt 41 Bảng 3.12 Tỉ lệ chuột hết tiêu chảy lô sau ngày điều trị đợt 41 Bảng 3.13 Tăng cân trung bình ngày ngày điều trị đợt 42 Bảng 4.1 Bảng thống kê kết phân lập 43 Bảng 4.2 Bảng thống kê kết định danh 44 38 40 viii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Các chế phẩm probiotic thị trƣờng…………… ………………….18 PL-25 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 6.800000 -0.200000 Average 1.133333 -0.040000 Variance 0.298667 0.148000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 3.754667 2.085333 df 1.000000 9.000000 MS 3.754667 0.231704 F 16.204604 Total 5.840000 10.000000 P-value 0.002993 F crit 5.117355 Với F > F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p0,05) F crit 5.117355 PL-27 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 3.400000 -0.200000 Average 0.566667 -0.040000 Variance 0.214667 0.148000 Source of Variation Between Groups Within Groups SS 1.003758 1.665333 df 1.000000 9.000000 MS 1.003758 0.185037 F 5.424631 Total 2.669091 10.000000 ANOVA P-value 0.044814 F crit 5.117355 Với F > F crit, mức độ tăng cân lơ thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p0,05) Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 5.400000 0.000000 Average 0.900000 0.000000 Variance 1.564000 3.240000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 2.209091 20.780000 df 1.000000 9.000000 MS 2.209091 2.308889 F 0.956777 Total 22.989091 10.000000 P-value 0.353559 F < F crit, mức độ tăng cân không lô thử lô chứng không khác (p>0,05) F crit 5.117355 PL-29 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 7.000000 -0.200000 Average 1.166667 -0.040000 Variance 0.182667 0.148000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 3.971030 1.505333 df 1.000000 9.000000 MS 3.971030 0.167259 F 23.741767 Total 5.476364 10.000000 P-value 0.000880 F crit 5.117355 Với F > F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p0,05) Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 2.200000 -1.000000 Average 0.366667 -0.200000 Variance 0.486667 0.740000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0.875758 5.393333 df 1.000000 9.000000 MS 0.875758 0.599259 F 1.461400 Total 6.269091 10.000000 F < F crit, mức độ tăng cân lô thử lô chứng không khác (p>0,05) PL-33 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 8.400000 0.100000 Average 1.400000 0.020000 Variance 0.688000 0.067000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 5.193818 3.708000 df 1.000000 9.000000 MS 5.193818 0.412000 F 12.606355 Total 8.901818 10.000000 P-value 0.006211 F crit 5.117355 Với F > F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lơ thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p0,05) Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 4.000000 -1.000000 Average 0.666667 -0.200000 Variance 0.858667 0.740000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 2.048485 7.253333 df 1.000000 9.000000 MS 2.048485 0.805926 F 2.541778 Total 9.301818 10.000000 F < F crit, mức độ tăng cân lô thử lô chứng không khác (p>0,05) PL-35 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Count 6.000000 5.000000 Sum 9.300000 0.100000 Average 1.550000 0.020000 Variance 1.451000 0.067000 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 6.384273 7.523000 df 1.000000 9.000000 MS 6.384273 0.835889 F 7.637705 Total 13.907273 10.000000 P-value 0.021981 F crit 5.117355 Với F > F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lơ thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p0,05) P-value 0.331408 F crit 5.117355 PL-37 Sau ngày điều trị Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 6.000000 5.000000 10.800000 0.100000 1.800000 0.020000 0.208000 0.067000 SS df MS F P-value F crit Between Groups Within Groups 8.641091 1.308000 1.000000 9.000000 8.641091 0.145333 59.457048 0.000030 5.117355 Total 9.949091 10.000000 Column Column ANOVA Source of Variation Với F > F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lơ thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lơ thử cao lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p F crit, mức độ tăng cân lô thử cao lô chứng có ý nghĩa thống kê (p