Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 106 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
106
Dung lượng
2,19 MB
Nội dung
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TP.HCM
BÁO CÁO NGHIỆM THU
THU NHẬNTRỨNGBÒ,HEOĐỂCẢITHIỆNQUYTRÌNHĐÔNGLẠNHTRỨNG
TRONG ĐIỀUKIỆNVIỆTNAM
Mã số: cs.2008.19.
CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI:
ThS. NGUYỄN THỊ THƢƠNG HUYỀN
THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
THÁNG 05/2009
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TP.HCM
BÁO CÁO NGHIỆM THU
THU NHẬN TRỨNGBÒ,HEOĐẺCẢITHIỆNQUYTRÌNHĐÔNGLẠNHTRỨNG
TRONG ĐIỀUKIỆNVIỆTNAM
Mã số:CS.2008.19.
CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI:
ThS. NGUYỄN THỊ THƢƠNG HUYỀN
THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
THÁNG 05/2009
i
NHỮNG NGƢỜI THAM GIA THỰC HIỆN ĐỀ TÀI
STT
Tên ngƣời tham gia
Tên cơ quan
1
ThS. Phạm Văn Phúc
Trƣờng ĐH KHTN TPHCM
2
CN. Đô Ngọc Hân
Trƣờng ĐH KHTN TPHCM
3
CN. Trƣơng Văn Trí
Trƣờng ĐHSP TPHCM
CÁC ĐƠN VỊ PHỐI HỢP
• Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Tp. HCM
• Viện Sinh học Nhiệt đới Tp. HCM
ii
MỤC LỤC
MỤC LỤC ii
DANH MỤC BẢNG v
DANH MỤC HÌNH vi
DANH MỤC BIỂU ĐỒ viii
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix
TÓM TẮT x
PHẦN MỞ ĐẦU 1
1. Tính cấp thiết của đề tài 1
2.Mục tiêu đề tài 2
3. Cách tiếp cận đề tài 2
4. Phƣơng phảp nghiên cứu 3
5. Phạm vi nghiên cứu 3
6. Nội dung nghiên cứu 3
7. Sản phẩm đề tài 3
CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 5
1.1. Tình hình nghiên cứu về đônglạnhtrứng 5
1.1.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nƣớc 5
1.1.2. Tình hình nghiên cứu ở ViệtNam 7
1.2. Sinh lý buồng trứng 8
1.2.1. Quá trình hình thành và phát triển nang trứng 8
1.2.2. Sự hình thành và phát triển của trứng 9
1.2.3. Cấu tạo của trứng 12
1.3. Cơ sở khoa học của đônglạnhtrứng 13
1.3.1. Các phƣơng pháp đônglạnh 13
1.3.2. Chất bảo quản lạnh (Cryoprotective Additive_CPA) 15
1.3.2. 1. Các chất bảo quản thƣờng sử dụng cho phƣơng pháp thủy tinh hóa 15
1.3.2.2. Dung dịch đệm và các đại phân tử 16
iii
1.3.3. Các yếu tổ ảnh hƣởng đến chất lƣợng trứng sau khi bảo quản bằng phƣơng pháp
thủy tinh hóa 18
1.3.3.1. Biến đổi trong tế bào đônglạnh 19
1.3.3.2. Tính an toàn khi đônglạnhtrứng trƣởng thành 21
1.4. Ứng dụng của đônglạnhtrứng 23
1.4.1. Ở ngƣời 23
1.4.2. Ở động vật 24
CHƢƠNG II NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25
2.1. Nội dung 1: Đônglạnhtrứngheo trƣởng thành bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa 25
2.1.1. Thunhận mẫu buồng trứng 25
2.1.2. Thunhận và nuôi trứng Chuẩn bị 26
2.1.3. Đánh giá trứng và lựa chọn trứng chín đểđônglạnh 28
2.1.4. Đônglạnhtrứng bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong vi giọt (PP1) 29
2.1.5. Phƣơng pháp giải đông các vi giọt đƣợc đônglạnh 31
2.1.6. Đônglạnhtrứng bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ (PP2) 33
2.1.7. Đánh giá tỷ lệ sống chết của trứng 35
2.2. Nội dung 2: Đônglạnhtrứng bò trƣởng thành bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa
trong cọng rạ (PP2) 35
2. 2.1. Thunhận mẫu buồng trứng 35
2.6.2.2. Thunhận và nuôi trứng 35
2. 2.3. Đônglạnhtrứng theo phƣơng pháp 2 37
2.3. Nội dung 3: Đônglạnhtrứng bò chƣa trƣởng thành bằng phƣơng pháp
thủy tinh hóa 38
2.3.1.Thu nhận buồng trứng 38
2.3.2.Thu nhậntrứng 38
2.3.3.Đông lạnhtrứng 38
2.3.4. Phƣơng pháp giải đông 39
2.4. Xử lý số liệu 39
CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 40
3.1. Kết quả nội dung 1 40
3.1.1. Kết quả thunhậntrứng 40
iv
3.1.2. Kết quả nuôi trứngtrong ống nghiệm (IVM) 41
3.1.3. Kết quả đônglạnhtrứng bằng PP1 44
3.1.4. Kết quả đônglạnhtrứngheo bằng PP2 48
3.1.5. Kết quả so sánh giữa 2 phƣơng pháp thủy tinh hóa trứngheo 50
3.2. Kết quả nội dung 2 51
3.2.1. Kết quả thunhậntrứng 51
3.2.2. Kết quả nuôi trứng bò 53
3.2.3. Kết quả đônglạnhtrứng bò 55
3.3. Kết quả nội dung 3 57
3.3.1. Kết quả đônglạnhtrứng bằng PP1 57
3.3.2. Kết quả đônglạnhtrứng bằng PP2 59
3.3.3. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò chƣa trƣởng thành theo 2 phƣơng pháp thủy
tinh hóa 61
3.4. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò ở 2 giai đoạn bằng phƣơng pháp thủy tinh
hóa trong cọng rạ 63
3.5. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò và heo đã trƣởng thành bằng PP2 64
CHƢƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65
4.1. Kết luận 65
4.2. Kiến nghị 66
TÀI LIỆU THAM KHẢO 67
PHỤ LỤC 75
v
DANH MỤC BẢNG
Bảng 2.1. Môi trƣờng chuẩn bị thutrứng 27
Bảng 3.1. Kết quả thunhậntrứngheo 40
Bảng 3.2. Kết quả nuôi trứngheo 42
Bảng 3.3. Kết quả đônglạnhtrứngheo bằng PP1 44
Bảng 3.4. Kết quả đônglạnhtrứngheo bằng PP2 48
Bảng 3.5. So sánh kết quả đônglạnhtrứngheo 50
Bảng 3.6. Kết quả thunhậntrứng bò 51
Bảng 3.7. Kết quả nuôi trứng bò 54
Bảng 3.8. Kết quả đônglạnhtrứng bò chín bằng PP2 56
Bảng 3.9. Kết quả đônglạnhtrứng bò bằng PP1 57
Bảng 3.10. Kết quả đônglạnhtrứng bò bằng PP2 59
Bảng 3.11. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò chƣa trƣởng thành 61
Bảng 3.12. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò ở 2 giai đoạn khác nhau 63
Bảng 3.13. So sánh kết quả đônglạnhtrứngbò,heo trƣởng thành bằng PP2 64
vi
DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1. Sự hình thành và phát triển nang trứng 9
Hình 1.2. Cấu trúc của buồng trứng và nang trứng 10
Hình 1.3. Tế bào trứng 12
Hình 1.4. Ảnh hƣởng của tốc độ đônglạnh lên sự hình thành tính thể đá 19
Hình 2.1. Sơ đồ bố trí thí nghiệm nội dung 1 25
Hình 2.2: Mầu buồng trứngheo 26
Hình 2.3. Thao tác chọc hút trứng từ buồng trứng 28
Hình 2.4. Soi tìm và thutrứng bằng hệ thống kính đảo ngƣợc 28
Hình 2.5. Sơ đồ bổ trí đĩa vi giọt đônglạnh 30
Hình 2.6. Cách tạo vi giọt đônglạnh 30
Hình 2.7. Nhỏ trực tiếp vi giọt vào LN
2
31
Hình 2.8. Chuyển vì giọt vào cryotube 31
Hình 2.9. Thao tác đổ vị giọt ra khỏi cryotube 32
Hình 2.10. Sơ đồ bố trí đĩa vi giọt rã đông 32
Hình 2.11. Cọng rạ chứa trứng 33
Hình2.12. Lấy cọng rạ chứa trứng ra khỏi bình nitơ lỏng 34
Hình 2.13. Giải đông cọng rạ trong nƣớc ấm 34
Hình 2.14. Cắt cọng rạ chứa trứng 34
Hình 2.15. Chuyển trứng vào môi trƣờng RĐ 34
Hình 2.16. Sơ đồ bố trí thí nghiệm nội dung 2 35
Hình 2.17. Sơ đồ bố trí thí nghiệm nội dung 3 38
Hình 3.1. Trứngheo đƣợc thunhận từ buồng trứng (X100) 40
Hình 3.2. Trứngheo với sự xuất hiện thể cực thứ nhất 42
Hình 3.3. Trứng sống 46
Hình 3.4. Trứng có tế bào chất phân mảnh 46
Hình 3.5. Trứng chết do tế bào chất co lại 46
vii
Hình 3.6. Trứng bò thunhận từ dịch nang trứng theo phƣơng pháp chọc hút (X40) 51
Hình 3.7. Trứng bò sau khi IVM có lớp cumulus giãn nở (X100) 54
Hình 3.8. Trứng bò sau khi IVM xuất hiện thể cực I (X400) 54
Hình 3.9. Trứng sống sau giải đông (X100) 55
Hình 3.10. Trứng chết sau giải đông 55
viii
DANH MỤC BIỂU ĐỒ
Biểu đồ 3.1. Kết quả thunhậntrứngheo từ buồng trứng 41
Biểu đồ 3.2. Kết quả nuôi trứngheo 42
Biểu đồ 3.3. Kết quả thu hồi trứngheo từ đônglạnh theo PP1 45
Biểu đồ 3. 4. Tỷ lệ sổng, chết của trứngheo so với tổng số trứngthu hồi đƣợc bảo quản theo
PP1 46
Biểu đồ 3.5. Kết quả thu hồi trứng từ đônglạnh theo PP2 49
Biểu đồ 3. 6. Tỷ lệ sống, chết của trứngheo so vói tổng số trứngthu hồi đƣợc bảo quản theo
PP2 49
Biểu đồ 3.7. Kết quả so sánh bảo quản trứngheo theo 2 phƣơng pháp 50
Biểu đồ 3.8. Kết quả thunhậntrứng bò từ mẫu buồng trứng 52
Biểu đồ 3.9. Kết quả nuôi trứng bò 54
Biểu đồ 3.10. Kết quả thu hồi trứng bò chín sau giải đông 56
Biểu đồ 3.11. Tỷ lệ trứng sống, chết so với tồng số trứngthu hồi đƣợc bảo quản theo PP2 57
Biểu đồ 3.12. Kết quả thu hồi trứng chƣa chín đƣợc bảo quản theo PP1 58
Biểu đồ 3.13. Tỷ lệ trứng sống, chết so với tồng số trứngthu hồi đƣợc bảo quản theo PP1 59
Biểu đồ 3.14. Kết quả thu hồi trứng chƣa chín đƣợc bảo quản theo PP2 60
Biểu đồ 3.15. Tỷ lệ trứng sống, chết so với tồng số trứngthu hồi đƣợc bảo quản theo PP2 61
Biểu đồ 3.16. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò chƣa trƣởng thành 62
Biểu đồ 3.17. So sánh kết quả đônglạnhtrứng bò ở 2 giai đoạn khác nhau 63
Biểu đồ 3.18. So sánh kết quả đônglạnhtrứngbò,heo trƣởng thành bằng PP2 64
[...]... cs., 1996) Trên cơ sở đó, chúng tôi mạnh dạn thực hiện đề tài "Thu nhậntrứngbò,heođể cải thiệncảithiện quy trìnhđônglạnhtrứngtrongđiềukiện Việt Nam" 2.Mục tiêu đề tài - Thunhận và nuôi trứngbò,heo đến giai đoạn trƣởng thành (In vitro Maturaration_IVM) - Thử nghiệm khả năng sống của trứngbò,heo trƣởng thành sau khi đônglạnh bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa 3 Cách tiếp cận đề tài • Tiếp... PEG Polyethylene glycol PTN Phòng thí nghiệm PP1 Thủy tinh hóa trong vi giọt PP2 Thủy tinh hoa trong cọng rạ PVP Polyvinylpirrolidone x TÓM TẮT Tên đề tài: "Thu nhậntrứngbò,heođể cải thiệncảithiện quy trìnhđônglạnhtrứngtrongđiềukiện Việt Nam " Mã số: CS.2008.19 Chủ nhiệm đề tài: ThS Nguyễn Thị Thƣơng Huyền Tel.: 0918605081 Email: thuonghuyen78@,yahoo.com; huyenntth@,hcmup.edu.vn Cơ quan chủ... hành thunhận và bảo quản nguồn trứngbò,heothunhận từ lò mổ bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong vi giọt và trong cọng rạ Kết quả sản phẩm Đã bảo quản đƣợc số lƣợng trứng vƣợt với chỉ tiêu đề ra trong thuyết minh: • 71 cọng rạ chứa 386 trứngheo đã IVM • 36 cọng rạ chứa 197 trứng bò đã IVM 4 Mở đầu • 70 cọng rạ chứa 365 trứng bò chƣa trƣởng thành • 305 trứngheo đã IVM trong vi giọt • 477 trứng. .. quan trong và ngoài nƣớc • Tiếp cận với các kỹ thu t hiện đại: hệ thống máy đônglạnh và giải đông trứng, kỹ thu t vi thao tác, PCR 3 Mở đầu 4 Phƣơng phảp nghiên cứu • Phƣơng pháp trực quan (nghiên cứu trực tiếp): thunhậntrứng và xử lý trứng, đônglạnh trứng, giải đông trứng, kiểm tra, đánh giá tỷ lệ trứng sống sau khi rã đông • Phƣơng pháp tổng họp • Phƣơng pháp so sánh 5 Phạm vi nghiên cứu • Trứng. .. Chọn đƣợc 1189 trứngđể nuôi chín, tỷ lệ chín đạt 65,42 ± 0,79% (779 trứng) ; Có 305 trứng đƣợc đônglạnh theo vi giọt, tỷ lệ sống đạt 46,15 ± 5,63%; 386 trứng đƣợc đônglạnh bằng cọng rạ, tỷ lệ sống đạt 47,54 ± 0,60% Kết quả nội dung 2: Thu đƣợc 909 trứng/ 50 buồng trứng, trung bình đạt 18,55 trứng/ buồng; Chọn đƣợc 684 trứng đem nuôi, tỷ lệ chín đạt 84,92 ± 0,63% (580 trứng) ; Đônglạnh 197 trứng bằng cọng... thƣơng trong cấu trúc và chức năng của trứngTrong đó, tổn thƣơng lạnh và độc tính của các chất bảo quản là những bất lợi chính quy t định đến sự bảo quản trứng thành công Do đó, để sống sau đông lạnh, trứng phải trải qua một chuỗi co và giãn nở thể tích Trứngdễ bị tổn thƣơng bởi quytrìnhđông lạnh: sự hình thành tinh thể đá, thẩm thấu khi loại bỏ chất bảo quản đônglạnh khỏi tế bào Vì vậy, việc đông lạnh. .. Các phương pháp đônglạnhĐônglạnhtrứng là sự bảo quản thành công chức năng bình thƣờng của trứng khi giảm nhiệt độ dƣới mức phản ứng hóa học bình thƣờng xảy ra (từ 37°C, 5%CO2 (điều kiện sinh lý) xuống - 1960c (nhiệt độ không sinh lý)) Đônglạnhtrứng có thể phân loại theo hai cách chung là đônglạnh cân bằng "equilibrium" với phƣơng pháp đônglạnh chậm (slow freezing) hay đônglạnh không cân bằng... gia thế giới 2 Mở đầu chƣa cao (bò 30%, ngƣời 10%,) Chính điều này là làm tốn kém và hạn chế trong công việc của nhiều nƣớc Một trong những tác nhân giới hạn thành công của kỹ thu t đônglạnhtrứng là xảy ra tổn thƣơng lạnhtrong suốt quá trìnhđônglạnhTrứng rất dễ tổn thƣơng khi tiếp xúc với nhiệt độ thấp của quá trìnhđônglạnh và để tránh điều này bằng cách sử dụng phƣơng pháp thủy tinh hóa (Ruffing... Vissan Tp HCM • Trứngheo từ lò mổ Vissan Tp HCM 6 Nội dung nghiên cứu • NỘI DUNG 1 : Đônglạnhtrứngheo trƣởng thành bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong vi giọt (PP1) và trong cọng rạ (PP2) • NỘI DNG 2 : Đônglạnhtrứng bò trƣởng thành bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ (PP2) • NỘI DNG 3 : Đônglạnhtrứng bò chƣa trƣởng thành bằng phƣơng pháp thủy tinh hóa trong vi giọt (PP1) và trong cọng... lệ trứng sống sau giải đông đạt 79,90 ± 2,33% Kết quả nội dung 3: Đônglạnh 477 trứng bằng vi giọt, tỷ lệ trứng sống sau giải đông là 71,92 ± 2,20%; 365 trứngđônglạnh bằng cọng rạ, tỷ lệ trứng sống sau giải đông là 65,31 ± 2,69% Từ khóa: nuôi chín trứng, đônglạnh trứng, thủy tinh hóa xii SUMMARY Project Title: "Collected bovine and porcine oocytes to improve oocyte cryopreserved protocol in Vietnamese . " ;Thu nhận trứng bò, heo để cải
thiện cải thiện quy trình đông lạnh trứng trong điều kiện Việt Nam& quot;.
2.Mục tiêu đề tài
- Thu nhận và nuôi trứng bò,. TP.HCM
BÁO CÁO NGHIỆM THU
THU NHẬN TRỨNG BÒ, HEO ĐỂ CẢI THIỆN QUY TRÌNH ĐÔNG LẠNH TRỨNG
TRONG ĐIỀU KIỆN VIỆT NAM
Mã số: cs.2008.19.
CHỦ