(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tác động của dịch chiết lá khôi (ardisia gigantifolia stapf ) lên sự biểu hiện của các gen kiểm soát chu kỳ tế bào của tế bào gốc ung thư dạ dày​

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC –––––––––––––––––––– NGUYỄN THỊ HẢI HỒNG NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CỦA DỊCH CHIẾT LÁ KHÔI (ARDISIA GIGANTIFOLIA STAPF.) LÊN SỰ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN KIỂM SOÁT CHU KỲ TẾ BÀO CỦA TẾ BÀO GỐC UNG THƯ DẠ DÀY Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thanh Hương THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nghiên cứu hướng dẫn TS Lê Thị Thanh Hương Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Mọi kết thu không chỉnh sửa, chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Nguyễn Thị Hải Hồng Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com iii LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực đề tài luận văn Khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên Em nhận giúp đỡ nhiệt tình Thầy, Cơ giáo, anh chị kỹ thuật viên cán khoa nhà trường Đầu tiên em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Cô giáo - TS Lê Thị Thanh Hương định hướng khoa học, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt suốt q trình em tiến hành nghiên cứu hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn Thầy Cô cán Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tận tình dạy dỗ, bảo truyền cho em niềm đam mê nghiên cứu khoa học Xin chân thành cảm ơn phận sau đại học nhà trường tạo điều kiện thuận lợi trình em học trường Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (Nafosted) mã số đề tài 108.05-2017.331 Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp nhiệt tình động viên cho em thêm động lực hồn thành tốt q trình học tập nghiên cứu khoa học Thái Nguyên, tháng 11 năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Hải Hồng Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com iv MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ung thư dày tế bào gốc ung thư dày 1.1.1 Ung thư dày 1.1.2 Tế bào gốc tế bào gốc ung thư dày 1.2 Chu kỳ tế bào ung thư 12 1.2.1 Khái quát chung chu kỳ tế bào 12 1.2.2 Rối loạn chu kỳ tế bào ung thư 14 1.2.3 Các gen kiểm soát chu kỳ tế bào 16 1.3 Giới thiệu chung Lá khôi 19 1.3.1 Phân loại đặc điểm 19 1.3.2 Thành phần hóa học Lá khôi 20 1.3.3 Các nghiên cứu tác dụng Lá khôi điều trị ung thư 22 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu nghiên cứu 25 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 25 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu 25 2.4.1 Phương pháp thu thập xác định tên khoa học Lá khôi 25 2.4.2 Phương pháp thu dịch chiết Lá khôi 26 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com v 2.4.3 Phương pháp nuôi cấy tế bào 2D 26 2.4.4 Phương pháp nuôi cấy tế bào 3D 26 2.4.5 Phương pháp phân tích chu kỳ tế bào Flow cytometry 27 2.4.6 Phương pháp phân tích miễn dịch huỳnh quang 27 2.4.7 Phương pháp tách chiết RNA tổng số tổng hợp cDNA 28 2.4.8 Phương pháp phân tích biểu gen Realtime PCR 28 2.4.9 Phương pháp phân tích thống kê 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Kết thu thập xác định tên khoa học thu dịch chiết ethanol Lá khôi 30 3.2 Nuôi cấy tăng sinh tế bào điều kiện nuôi cấy 2D 30 3.3 Nuôi cấy tumorsphere tế bào ung thư dày điều kiện nuôi cấy 3D 31 3.4 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên số lượng kích thước tumorsphere 33 3.5 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên chu kỳ tế bào 32 3.6 Tách chiết RNA tổng số tổng hợp cDNA 34 3.7 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên gen tế bào gốc ung thư 35 3.8 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khơi lên gen kiểm sốt chu kỳ tế bào 38 3.9 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên biểu protein P21 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 KẾT LUẬN 43 KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ALDH : Aldehyde dehydrogenase CDK : Cyclin-dependent kinases CCNE1 : Cyclin E1 CT : Cryptotanshinone cDNA : Complementary DNA DNA : Deoxyribonucleic acid FACS : Fluorescence-activated cell sorting GC : Ung thư biểu mô dày mRNA : RNA thông tin NST : Nhiễm sắc thể PCNA : Proliferating cell nuclear antigen PCR : Polymerase Chain Reaction RNA : Ribonucleic acid SAGA : Spt-Ada-Gcn5-acetyltransferase SSE : Samsoeum TBGUT : Tế bào gốc ung thư TBGUTDD : Tế bào gốc ung thư dày USP22 : Ubiquitin specific peptidase 22 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các pha chu kỳ tế bào 13 Bảng 2.1 Mã số cặp mồi gen 28 Bảng 3.1 Nồng độ RNA từ mẫu đối chứng mẫu xử lý 35 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Số ca ung thư mắc năm 2018 nam Việt Nam Hình 1.2 Cơ chế phân chia tế bào ung thư 16 Hình 3.1 Mẫu Lá khơi 30 Hình 3.2 Ni cấy tăng sinh tế bào MKN45 điều kiện ni cấy 2D 30 Hình 3.3 Ni cấy tumorpshere hình thành từ tế bào gốc 31 Hình 3.4 Dịch chiết Lá khơi tác động lên khả hình thành tumorsphere 32 Hình 3.5 Dịch chiết Lá khơi tác động lên chu kỳ tế bào 33 Hình 3.6 Phổ hấp thụ RNA tổng số tách chiết từ tumorsphere 35 Hình 3.7 Dịch chiết Lá khơi tác động lên biểu gen 36 Hình 3.8 Dịch chiết Lá khơi tác động lên gen 39 Hình 3.9 Dịch chiết Lá khôi tác động lên biểu protein 42 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam nước có đa dạng lồi thực vật, có lồi thực vật làm thuốc Họ Đơn nem (Myrsinaceae) gồm 50 chi khoảng 1.400 loài phân bố rộng rãi khắp giới Trong đó, chi cơm nguội (Ardisia) có khoảng 400 – 500 lồi giới Việt Nam có khoảng 101 lồi [2] Các lồi chi có nhiều tác dụng điều trị bệnh, bảo vệ sức khỏe cho người, điển hình Lá khơi (Ardisia gigantifolia Stapf) Ung thư dày dạng ung thư phổ biến nhất, thống kê dạng ung thư phổ biến thứ nguyên nhân gây tử vong thứ nhóm bệnh ung thư Các tế bào gốc ung thư dày nguyên nhân gây khối u dày Tế bào gốc ung thư dày gọi "tế bào nguồn" ung thư dày, có nguồn gốc chủ yếu từ tế bào gốc tế bào gốc định hướng dày Trong năm gần đây, nhiều nghiên cứu cho thấy ung thư dày bắt nguồn từ tế bào gốc bình thường tế bào trung mơ có nguồn gốc từ tủy xương khối u dày có chứa tế bào gốc ung thư [71] Các khối u bắt nguồn từ tiểu quần thể tế bào gốc ung thư có khả trì phát triển khối u lâu dài, tái phát khối u, kháng apoptosis hóa trị Các nghiên cứu trước rằng, có nhiều hợp chất chiết xuất từ dịch chiết phận Lá khôi ảnh hưởng đến tăng sinh biểu mô tuyến vú, gây độc tế bào dòng tế bào ung thư như: ung thư bàng quang, ung thư biểu mô tế bào gan, ung thư cổ tử cung, [14], [57] Đặc biệt ung thư dày, dịch chiết Lá khơi có khả biệt hố tế bào gốc ung thư dày độc cho tế bào khả ức chế cao phân chia gây apoptosis [7] Tuy nhiên, nghiên cứu ảnh hưởng Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com Lá khơi lên biểu gen kiểm sốt chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày cịn hạn chế Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu tác động dịch chiết Lá khôi (Ardisia gigantifolia Stapf.) lên biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày” Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá tác động dịch chiết Lá khôi lên mức độ biểu gen điều khiển chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày Nội dung nghiên cứu Nội dung 1: Thu thập mẫu Lá khôi tách chiết dịch chiết Lá khôi Nội dung 2: Nuôi cấy spheroid hình thành từ tế bào gốc ung thư dày Nội dung 3: Phân tích ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào phương pháp Realtime PCR Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 40 nghiên cứu tác động Yuanhuacine (YHL-14), thành phần daphnane diterpene ester phân lập từ nụ hoa Daphne genkwa Việc tác động tế bào YHL-14 không gây hiệu rõ rệt trình apoptosis tế bào, gây dừng pha G2/M tế bào T24T HCT116, cho thấy dừng pha G2/M liên quan đến hiệu ứng chống ung thư YHL-14 Do P21 chất ức chế chu kỳ tế bào quan trọng liên quan đến điều hòa chu kỳ tế bào, nên tác dụng YHL-14 biểu P21 biểu yếu tố phiên mã ngược dịng đánh giá tế bào T24T HCT116 Kết sau xử lý YHL-14 12h, biểu protein P21 điều chỉnh tăng đáng kể tế bào T24T HCT116 [69] Năm 2017, tác giả Hyun-Woo Lee cộng chứng minh tác dụng Celastrol, triterpene chiết xuất từ vỏ rễ từ rễ Trypterigium wilfordii bệnh ung thư dày Kết cho thấy, biểu protein liên quan đến chu trình tế bào, P21 P27 tăng lên rõ rệt biểu cyclin D1 giảm tác động celastrol từ nồng độ 0,25 μM đến μM [35] Cũng năm 2017, Bing Hu cộng tìm hiểu hợp chất Teng-Long-Bu-Zhong-Tang công thức thảo dược Trung Quốc để điều trị ung thư biểu mơ đại trực tràng Teng-LongBu-Zhong-Tang có hiệu gây lão hóa tế bào ung thư biểu mơ đại trực tràng, kèm theo điều hòa P21 Trong nghiên cứu này, tác giả đánh giá liệu lão hóa tế bào Teng-Long-Bu-Zhong-Tang có liên quan đến P21 hay khơng, phân tích P21 siRNA cụ thể loại bỏ đáng kể lão hóa tế bào Teng-Long-Bu-Zhong-Tang gây Những quan sát cho thấy lão hóa tế bào Teng-Long-Bu-Zhong-Tang gây phụ thuộc vào P21 Sự biểu P21 giảm cách can thiệp RNA làm suy giảm đáng kể lão hóa tế bào Teng-Long-Bu-Zhong-Tang gây tế bào ung thư đại trực tràng LS174T người [19] Trong nghiên cứu này, kết phân tích cho thấy, biểu mức độ phiên mã gen P27, CCND1, PCNA không chịu ảnh hưởng dịch Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 41 chiết Lá khôi P27 coi chất ức chế khối u chức điều chỉnh chu kỳ tế bào Trong bệnh ung thư, P27 thường bị bất hoạt thơng bị suy yếu sai lệch vị trí [23] Năm 2013, Aeyung Kim cộng nghiên cứu tác động Samsoeum (SSE), công thức thảo dược truyền thống Trung Quốc lên tế bào ung thư Trong trình điều trị SSE sớm, tác giả đưa kết luận rằng, tế bào dừng pha G2/M đồng thời với điều hòa tăng P21 P27 điều hòa giảm cyclin D1 cyclin B1, sau gia tăng tế bào YO-PRO-1 (+) apoptotic [16] Nghiên cứu ảnh hưởng KIOM-C đến biểu protein điều hòa pha G1 P21, P27 cyclin D1 cho thấy điều trị KIOM-C điều chỉnh tăng mức độ chất ức chế kinase phụ thuộc cyclin P21 P27, điều chỉnh giảm mức độ cyclin D1, so với tế bào đối chứng [15] Trong trình phát triển khối u, cyclins loại D đóng vai trị trung tâm q trình chuyển đổi chu kỳ tế bào Các nghiên cứu gần tập trung vào mối tương quan CCND1 bệnh ác tính, ung thư dày ung thư vú Những thay đổi biểu CCND1 quan sát tế bào ung thư gan sau điều trị Quercetin cho kết sau, có ba peptide chứa Leu CCND1 phát điểm MS xấp xỉ 158 Mức độ biểu protein trung bình CCND1 giảm xuống 0,55 sau điều trị Quercetin Mức độ biểu RNA protein CCND1 giảm liên tục tế bào HepG2 tiếp xúc với 50 quercetin 48h [37] 3.9 Ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên biểu protein P21 Sự tăng cường phiên mã gen P21 có ý nghĩa quan trọng hoạt hóa đường tín hiệu lão hóa tế bào Để đánh giá tác động chiết Lá khôi lên biểu P21 mức độ protein, sử dụng phương pháp miễn dịch huỳnh quang với kháng thể đơn dòng kháng P21 Kết thu được, trình bày hình 3.9 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 42 Hình 3.9 Dịch chiết Lá khôi tác động lên biểu protein kiểm soát chu kỳ tế bào P21 Mầu đỏ biểu thị biểu P21, mầu xanh lam biểu thị biểu DAPI (thuốc nhuộm nhân tế bào) Kết hình 3.9 rằng, P21 biểu mạnh nhân tế bào MKN45 xử lý với dịch chiết Lá khôi so với tế bào đối chứng điều thể qua bắt mầu đỏ (hoặc đen trắng pha contrast) với cường độ cao mẫu xử lý so với mẫu đối chứng Kết khẳng định dịch chiết Lá khơi điều hịa tăng mạnh gen P21, gen chủ chốt liên quan đến trình lão hóa tế bào Năm 2014, Yim cộng rằng, việc điều trị Guibitang (một thuốc thảo dược truyền thống) thay đổi biểu protein liên quan đến tiến trình pha G1 Cụ thể, biểu P21 P27 tăng lên, mức cyclin D1 bị giảm Ngược lại, mức độ cyclin B1, điều chỉnh pha G2/M, không bị ảnh hưởng Guibi-tang [65] CIL-102 hoạt chất dẫn xuất alkaloid Camptotheca acuminata chứng minh rằng, CIL-102 gây dừng chu kỳ tế bào apoptosis tế bào ung thư ruột kết cách điều chỉnh tăng biểu P21 GADD45 cách kích hoạt JNK1/2, NFκB p50 p300 để cung cấp chế cho điều trị CIL-102 việc tạo P21 GADD45 liên kết giảm cdc2/cyclin B [82] P21 giữ vai trị then chốt việc kiểm sốt chu kỳ tế bào Trong nghiên cứu rằng, dịch chiết Lá khôi làm hoạt hóa biểu P21 biểu tăng lên mức độ mRNA protein tế bào, dẫn tới làm dừng chu kỳ tế bào Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã tiến hành thu thập mẫu từ Lá khôi, thuộc chi Ardisia họ Đơn nem phân bố huyện Định Hóa, tỉnh Thái Nguyên Đã thu cao chiết ethanol khơ từ lồi Ardisia gigantifolia với tỷ lệ 12,1% Dịch chiết Lá khơi 75µg/ml ức chế phát triển tumorsphere 3D tế bào ung thư MKN45 Đã tách chiết thành công RNA tổng số từ tumorsphere tế bào MKN45 từ tumorsphere điều kiện xử lý không xử lý với dịch chiết Lá khôi với độ tinh cao hàm lượng tốt Dịch chiết Lá khôi làm dừng chu kỳ tế bào pha G0/G1 Dịch chiết Lá khôi ức chế mạnh biểu số gen chủ chốt tế bào gốc ung thư gồm CD44 SOX2 với mức giảm thiểu 30% 50% Đặc biệt, dịch chiết Lá khơi điều hịa tăng cường biểu gen P21 hai mức độ mRNA protein đồng thời làm giảm mức độ biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào CCNE1 Kết luận chung: Dịch chiết Lá khôi ức chế chu kỳ tế bào thơng qua điều hịa biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào gen đặc trưng tế bào gốc ung thư dày KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu sâu ảnh hưởng dịch chiết Lá khôi lên các đường tín hiệu tế bào gốc ung thư dày Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Quang B (2017), ăNghiờn cu kt qu iu tr ung thư dày 1/3 phẫu thuật triệt cú kt hp húa chtă, Lun ỏn Tin s Y học, Trường Đại học Y Dược Huế Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 1, Nxb Khoa học Kỹ thuật, tr 1276 Nguyễn Nghĩa Thìn (2007), Các phương pháp nghiên cứu thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Văn Hiếu (2010), Ung thư dày, Điều trị phẫu thuật bệnh ung thư, Nxb Y học, tr 256-268 Nguyễn Phú Hùng, Lê Thị Thanh Hương (2018), "Xác định tế bào gốc ung thư dày liệu pháp trúng đích", Tạp chí Y học Việt Nam, tr 116-125 Lê Thị Thanh Hương, Lưu Thị Bình, Diệp Thị Hương Giang, Nguyễn Phú Hùng (2018), "All trans retinoic acid ức chế biểu gen liên quan tới khả tự làm đường tín hiệu phân tử Notch tế bào gốc ung thư dày", Tạp chí Khoa học – Đại học Quốc gia Hà Nội: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, tập 34, số 4, tr 30-36 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 45 Lê Thị Thanh Hương (2015), ăNghiờn cu tớnh a dng ngun cõy thuc c sử dụng cộng đồng dân tộc tỉnh Thỏi Nguyờn nhm bo tn v phỏt trin bn vngă, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyn Phỳc Kiờn (2015), ăỏnh giỏ kt qu phu thuật ung thư dày sớm bệnh viện Việt că, Lun Bỏc s chuyờn khoa cp II, Trng Đại học Y Hà Nội Trần Thị Kim Liên (2002), Thực vật chí Việt Nam, tập 4, Nxb Khoa hc v K thut 10 Vừ Duy Long (2017), ăỏnh giá kết phẫu thuật nội soi điều trị ung th d dy theo giai on I, II, IIIă, Lun án Tiến sĩ Y học, Trường Đại học Y Dược TP H Chớ Minh 11 Lờ Vit Nho (2014), ăNghiờn cứu biểu lộ EGFR, HER2 mối liên quan với lâm sàng, nội soi, mô bệnh học bnh nhõn ung th biu mụ d dyă, Lun ỏn Tiến sĩ Y học, Trường Đại học Y Dược Huế 12 Lê Anh Sơn, Đỗ Thị Hà, Vũ Thị Diệp, Đậu Bá Thìn, Nguyễn Thị Thảo (2017), "Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính chống oxy hóa gây độc tế bào ung thư dịch chiết Lá khơi tía", Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 6, tr 346 - 351 13 ng Vn Thi (2017), ăNghiờn cứu đặc điểm lâm sàng, thương tổn đánh giá kết lâu dài phẫu thuật triệt ung thư phn trờn d dyă, Lun ỏn Tin s Y hc, Trường Đại học Y Dược Huế 14 Trịnh Anh Viên (2017), ăNghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh học số loài Ardisia thuộc họ Myrsinaceae Vit Namă, Lun ỏn Tin s Húa hc, Hc vin Khoa học Cơng nghệ Tài liệu tiếng Anh Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 46 15 Aeyung Kim, Minju Im, Nam-Hui Yim, Taesoo Kim and Jin Yeul Ma (2014), "A Novel Herbal Medicine, KIOM-C, Induces Autophagic and Apoptotic Cell Death Mediated by Activation of JNK and Reactive Oxygen Species in HT1080 Human Fibrosarcoma Cells", PLoS One, (5), pp 98703 16 Aeyung Kim, Nam-Hui Yim, and Jin Yeul Ma (2013), "Samsoeum, a traditional herbal medicine, elicits apoptotic and autophagic cell death by inhibiting Akt/mTOR and activating the JNK pathway in cancer cells", BMC Complement Altern Med, pp 213: 233 17 Ang TL, Fock KM (2014), "Clinical epidemiology of gastric cancer", Singapore Med J, 55 (12), pp 621-628 18 Anita F, Cholewa, John J, Pipoly III, Ricketson (2009), Myrsinaceae Flora of North America, Vol 8, pp 251, 257, 258, 302, 303 19 Bing Hu, Hong-Mei An, Shuang-Shuang Wang, Jia-Lu Zheng, Xia Yan, Xiao-Wei Huang, and Jian-Hui Tian (2017), “Teng-Long-Bu-Zhong-Tang induces P21-dependent cell senescence in colorectal carcinoma LS174T cells via histone acetylation”, J Exp Pharmacol, 9, pp 67–72 20 Bjerknes M1, Cheng H (2002), "Multipotential stem cells in adult mouse gastric epithelium", Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 283(3), pp 767-777 21 Cavaleiro-Pinto M, Peleteiro B, Lunet N, et al (2011), "Helicobacter pylori infection and gastric cardia cancer: systematic review and metaanalysis", Cancer Causes Control, 22 (3), pp 375-387 22 Casamayor M, Morlock R, Maeda H, et al (2018), "Targeted literature review of the global burden of gastric cancer", E Cancer Medical Science, 12, pp 883 23 Chu IM, Hengst L, Slingerland JM (2008), "The Cdk inhibitor P27 in human cancer: prognostic potential and relevance to anticancer therapy", Nat Rev Cancer, pp 253-267 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 47 24 Chao Zhang, Qiang Zhu, Jianzhong Gu, Shan Chen, Qian Li, and Liping Ying (2019), “Down-regulation of CCNE1 expression suppresses cell proliferation and sensitizes gastric carcinoma cells to Cisplatin”, Biosci Rep, 39(6), pp BSR20190381 25 E-Chu Huang, Yi Zhao, Guoxun Chen, Seung Joon Baek, Michael F McEntee, Steven Minkin, John P Biggerstaff and Jay Whelan (2014), "Zyflamend, a polyherbal mixture, down regulates class I and class II histone deacetylases and increases P21 levels in castrate-resistant prostate cancer cells", BMC Complement Altern Med, 14, pp 68 26 Elledge SJ (1996), Cell cycle checkpoints: preventing an identity crisis, 274(5293), pp 1664-1672 27 Emika Ohkoshi and Naoki Umemura (2017), "Induced overexpression of CD44 associated with resistance to apoptosis on DNA damage response in human head and neck squamous cell carcinoma cells", Int J Oncol, 50(2), pp 387–395 28 Ferlay J, Soerjomataram I, Dikshit R, et al (2015), "Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012", Int J Cancer, 136 (5), pp E359-386 29 Ferro A, Morais S, Rota M, et al (2018), "Tobacco smoking and gastric cancer: meta-analyses of published data versus pooled analyses of individual participant data (StoP Project)", Eur J Cancer Prev, 27 (3), pp 197-204 30 Ferro A, Morais S, Rota M, et al (2018), "Alcohol intake and gastric cancer: Meta-analyses of published data versus individual participant data pooled analyses (StoP Project)", Cancer Epidemiol, 54, pp 125-132 31 Gorospe M, Wang X, Holbrook N.J (1998), "P53-dependent elevation of P21 Wafl expression by UV light is mediated through mRNA stabilization and involves a vanadate-sensitive regulatory system", Mol.Cell.Biol, 18, pp 1400-1407 32 Graham V, Khudyakov J, Ellis P, Pevny L (August 2003) "SOX2 functions Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 48 to maintain neural progenitor identity" Neuron, 39 (5), pp 749–765 33 Harvey Lodish, Arnold Berk, S Lawrence Zipursky, Paul Matsudaira, David Baltimore and James Darnell (2000), Molecular Cell Biology, New York: W H Freeman 34 Ho Jeong Lee, Venu Venkatarame Gowda Saralamma, Seong Min Kim, Sang Eun Ha, Suchismita Raha, Won Sup Lee, Eun Hee Kim, Sang Joon Lee, Jeong Doo Heo, and Gon Sup Kim (2018), "Pectolinarigenin Induced Cell Cycle Arrest, Autophagy, and Apoptosis in Gastric Cancer Cell via PI3K/AKT/mTOR Signaling Pathway", Nutrients, 10(8), pp 1043 35 Hyun-Woo Lee, Kenny Seung Bin Jang, Hye Ji Choi, Ara Jo, Jae-Ho Cheong, and Kyung-Hee Chun (2017), "Celastrol inhibits gastric cancer growth by induction of apoptosis and autophagy", BMB Rep, 47(12), pp 697–702 36 Javier Sastre, Jose Angel García-Saenz, and Eduardo Díaz-Rubio (2006), "Treatment of stomach cancer with chemotherapy", World J Gastroenterol, 12(2), pp 204–213 37 Jin Zhou, Lu Li, Li Fang, Hua Xie, Wenxiu Yao, Yiang Zhou, Zhujuan Xiong, Li Wang, Zhixi Li, and Feng Luo (2016), "Quercetin reduces cyclin D1 activity and induces G1 phase arrest in HepG2 cells", Oncol Lett, 12(1), pp 516–522 38 Karimi P, Islami F, Anandasabapathy S, et al (2014), "Gastric cancer: descriptive epidemiology, risk factors, screening, and prevention", Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 23 (5), pp 700-713 39 Kim H S., Park J W., Kwon O K., Kim J H., Oh S R., Lee H K., Bach T T., Quang B H., Ahn K S (2014), Anti-inflammatory activity of a methanol extract from Ardisia tinctoria on mouse macrophages and pawedema Mol Med Rep, 9(4), pp 1388-1394 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 49 40 Lahmidani N MEY, Nourdine Aqodad1, Dafr Allah Benajah1 (2018), "Update on Gastric Cancer Epidemiology and Risk Factors ", Journal of Cancer Therapy 9, pp 242-254 41 Li K, Dan Z, and Nie YQ (2014), "Gastric cancer stem cells in gastric carcinogenesis, progression, prevention and treatment", World J Gastroenterol, 20 (18), pp 5420-5426 42 Lin XJ, Wang CP, Liu XD, et al (2014), "Body mass index and risk of gastric cancer: a meta-analysis", Jpn J Clin Oncol, 44 (9), pp 783-791 43 Lisa Hazard, John O’Connor, and Courtney Scaife (2006), "Role of radiation therapy in gastric adenocarcinoma", World J Gastroenterol, 12(10), pp 1511–1520 44 Lodish H, Berk A, Zipursky SL (2000), Molecular Cell Biology, New York: WH Freeman 45 Lee Yeuan Ting, Dr OonChernEin (2017), Cancer and precision medicine, Scientific-Malaysian 46 Lew DJ, Dulić V, Reed SI (1991) "Isolation of three novel human cyclins by rescue of G1 cyclin (Cln) function in yeast" Cell, 66 (6), pp 1197–1206 47 Liu Yang, Dongdong Fang, Huijun Chen, Yiyu Lu, Zheng Dong, Han-Fei Ding, Qing Jing, Shi-Bing Su, and Shuang Huang (2015), "Cyclindependent kinase is an ideal target for ovary tumors with elevated cyclin E1 expression", Oncotarget, 6(25), pp 20801–20812 48 Liu XH, Tang DE, Dai Y, Gao XJ, Liu LX (2019), "PCNA and GSK3β interact with each other to regulate H1299 lung adenocarcinoma cells apoptosis", Neoplasma, pp 190116N48 49 Lahmidani N MEY, Nourdine Aqodad1, Dafr Allah Benajah1 (2018), "Update on Gastric Cancer Epidemiology and Risk Factors ", Journal of Cancer Therapy 9, pp 242-254 50 Lan Thi Hanh Phi, Yoseph Toni Wijaya, Ita Novita Sari, Ying Gui Yang, Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 50 Yun Kyung Lee, and Hyog Young Kwon (2018), “The anti‐ metastatic effect of ginsenoside Rb2 in colorectal cancer in an EGFR/SOX2 dependent manner”, Cancer Med, 7(11) pp 5621–5631 51 Li-Hua Mu, Yu-Ning Wang, Dong-Xiao Wang, Jing Zhang, Li Liu, XianZhe Dong, Yuan Hu, and Ping Liu (2017), “AG36 Inhibits Human Breast Cancer Cells Proliferation by Promotion of Apoptosis In vitro and In vivo”, Front Pharmacol, 8, pp 15 52 Mu LH, Yan H, Wang YN, Yu TF, Liu P (2019), “Triterpenoid Saponins from Ardisia gigantifolia and Mechanism on Inhibiting Proliferation of MDA-MB-231 Cells”, Biol Pharm Bull, 42(2), pp 194-200 53 Mu L H., Bai L., Dong X Z., Yan F Q., Guo D H., Zheng X L., Liu P (2014), "Antitumor activity of triterpenoid saponin-rich Adisia gigantifolia extract on human breast adenocarcinoma cells in vitro and in vivo", Biol Pharm Bull, 37(6), pp 1035-1041 54 Mu LH, Huang XW, Guo DH, Dong XZ, Liu P (2013), " A new triterpenoid saponin from Ardisia gigantifolia", J Asian Nat Prod Res, 15(10), pp 1123-1129 55 Mu LH, Huang CL, Zhou WB, Guo DH, Liu P (2013), "Methanolysis of triterpenoid saponin from Ardisia gigantifolia Stapf and structure-activity relationship study against cancer cells", Bioorg Med Chem Lett, 23(22), pp 6073-6078 56 Mu L H., Wei N Y., & Liu P (2012), “Cytotoxic triterpenoid saponins from Ardisia gigantifolia”, Planta Med, 78(6), pp 617-621 57 Mu L.H., Gong Q.Q., Zhao H.X., & Liu P (2010),"Triterpenoid saponins from Ardisia gigantifolia", Chem Pharm Bull (Tokyo), pp 1248-1251 58 Mu LH, Gu YJ, Wang LH, Ma BP, Lu L, Liu P (2015), “Biotransformation on the triterpenoid saponin of Ardisia gigantifolia by Aspergillus avenaceus AS 3.4454", J Asian Nat Prod Res, 17(1), 40-46 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 51 59 Mu LH, Gu YJ, Ma BP, Lu L, Liu P (2015), "Two new triterpenoid saponins obtained by microbial hydrolysis with Alternaria alternata AS 3.6872", Nat Prod Res, 29(7), pp 638-643 60 Naor D, Nedvetzki S, Golan I, Melnik L, Faitelson Y (2002) "CD44 in cancer" Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 39 (6), pp 527–579 61 Nguekeu Y M., Ndontsa B L., Mbouangouere R., Awouafack M.D., Ito T., Tane P., Morita H (2016), “A New Alkenylmethylresorcinol from the Fruits of Ardisia kivuensis, Nat Prod Commun”, 11(5), pp 661-662 62 Nguyen PH, Giraud J, Staedel C, et al (2016), "All-trans retinoic acid targets gastric cancer stem cells and inhibits patient-derived gastric carcinoma tumor growth", Oncogene, 35 (43), pp 5619-5628 63 Nguyen PH, Giraud J, Chambonnier L, et al (2017), "Characterization of Biomarkers of Tumorigenic and Chemoresistant Cancer Stem Cells in Human Gastric Carcinoma", Clin Cancer Res, 23 (6), pp 1586-1597 64 N.J Agnantis, M Bai (2002), Lung and Breast Carcinomas, Molecular Genetics 65 Nam-Hui Yim, Aeyung Kim, Chun Liang, Won-Kyung Cho, and Jin Yeul Ma (2014), "Guibitang, a traditional herbal medicine, induces apoptotic death in A431 cells by regulating the activities of mitogen-activated protein kinases", BMC Complement Altern Med, 14, pp 344 66 Qing-An Jia , Zheng-Gang Ren , Yang Bu , Zhi-Ming Wang , Qiang-Bo Zhang , Lei Liang , Xue-Mei Jiang , Quan-Bao Zhang and Zhao-You Đường (2012), "Herbal Compound “Songyou Yin” Renders Hepatocellular Carcinoma Sensitive to Oxaliplatin through Inhibition of Stemness", Evid Based Complement Alternat Med, 2012, pp 908601 67 Reya T., Morrison S.J., Clarke M.F., Weissman I.L (2001), "Stem cells, cancer, and cancer stem cells", Nature, 414(6859), pp 105-111 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 52 68 Robbins and Cotran; Kumar, Abbas, Fausto (2004) Pathological Basis of Disease, Elsevier 69 Ruowen Zhang, Yulei Wang, Jingxia Li, Honglei Jin, Shaojiang Song, and Chuanshu Huang (2014), "The Chinese Herb Isolate Yuanhuacine (YHL-14) Induces G2/M Arrest in Human Cancer Cells by Up-regulating P21 Protein Expression through an P53 Protein-independent Cascade", J Biol Chem, 289(10), pp 6394–6403 70 Sierra MS, Cueva P, Bravo LE, et al (2016), "Stomach cancer burden in Central and South America", Cancer Epidemiol, 44 Suppl 1, pp S62-S73 71 Shree Ram Singh (2013), " Gastric cancer stem cells: A novel therapeutic target", Cancer Lett, 338(1), pp 110–119 72 Tarek Abbas and Anindya Dutta (2009), "P21 in cancer: intricate networks and multiple activities", Nat Rev Cancer, pp 400–414 73 Totey S, Totey S, Pal R, Pal R (2009), "Adult stem cells: a clinical update", J Stem Cells, 4(2), pp 105-121 74 Uthman OA, Jadidi E, and Moradi T (2013), "Socioeconomic position and incidence of gastric cancer: a systematic review and meta-analysis", J Epidemiol Community Health, 67 (10), pp 854-860 75 Vermeersch M., Foubert K., da Luz R I., Van Puyvelde L., Pieters L., Cos P., Maes L (2009), “Selective antileishmania activity of 13,28-epoxyoleanane and related triterpene saponins from the plant families Myrsinaceae, Primulaceae, Aceraceae and Icacinaceae” Phytother Res, 23, pp 1404–1410 76 Vinay Kumar Abul Abbas Nelson Fausto Jon Aster (2009), Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease, eBook ISBN 77 Victoria J Gennaro, Timothy J Stanek, Amy R Peck, Yunguang Sun, Feng Wang, Shuo Qie, Karen E Knudsen, Hallgeir Rui, Tauseef Butt, J Alan Diehl, and Steven B McMahon (2018), "Control of CCND1 ubiquitylation by the catalytic SAGA subunit USP22 is essential for cell Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 53 cycle progression through G1 in cancer cells", Proc Natl Acad Sci U S A, 115(40), pp E9298–E9307 78 WHO (2018), "Cancer burden rises to 18.1 million new cases and 9.6 million cancer deaths in 2018" The Global Cancer Observatory 79 WHO (2019), "VietNam sourcer: Globocan 2018", The Global Cancer Observatory 80 Wang LS, JL, ZWZ, et al (2019), "The Chinese Society of Clinical Oncology (CSCO): clinical guidelines for the diagnosis and treatment of gastric cancer", Cancer Communications, 39 (10), pp 1-31 81 Wei Xu , Bisrat G Debeb , Lara Lacerda , Jessica Li and Wendy A Woodward (2011), "Tetrandrine, a Compound Common in Chinese Traditional Medicine, Preferentially Kills Breast Cancer Tumor Initiating Cells (TICs) In Vitro", Cancers (Basel), 3(2), pp 2274–2285 82 Wen-Shih Huang, Yi-Hung Kuo, Hsing-Chun Kuo, Meng-Chiao Hsieh, Cheng-Yi Huang, Ko-Chao Lee, Kam-Fai Lee, Chien-Heng Shen, Shui-Yi Tung, and Chih-Chuan Teng (2017), "CIL-102-Induced Cell Cycle Arrest and Apoptosis in Colorectal Cancer Cells via Upregulation of P21 and GADD45", PLoS One, 12(1), pp e0168989 83 Wen P, Zhang XM, Yang Z, Wang NL, Yao XS (2008), ¨Four new triterpenoid saponins from Ardisia gigantifolia Stapf and their cytotoxic activityă, J Asian Nat Prod Res, 10(9-10), pp 873-880 84 Xu L, Qu YH, Chu XD, et al (2015), "Urinary levels of N-nitroso compounds in relation to risk of gastric cancer: findings from the shanghai cohort study", PLoS One, 10 (2), pp e0117326 85 Ying Zhang, Stephanie M Cabarcas, Ji zheng, Lei sun, Lesley A Mathews, Xiaohu Zhang, Hongsheng Lin, And William L Farrar (2016), “Cryptotanshinone targets tumor-initiating cells through down-regulation of stemness genes expression”, Oncol Lett, 11(6), pp 3803–3812 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com 54 86 Zhen-Fei Wang, Da-Guang Ma, Zhe Zhu, Yong-Ping Mu, Yong-Yan Yang, Li Feng, Hao Yang, Jun-Qing Liang, Yong-Yan Liu, Li Liu, and Hai-Wen Lu (2017), "Astragaloside IV inhibits pathological functions of gastric cancer-associated fibroblasts", World J Gastroenterol, 23(48), pp 8512–8525 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn download by : skknchat@gmail.com ... Stapf. ) lên biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày” Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá tác động dịch chiết Lá khôi lên mức độ biểu gen điều khiển chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày... thể tế bào tế bào gốc ung thư 1.2 Chu kỳ tế bào ung thư 1.2.1 Khái quát chung chu kỳ tế bào Chu kỳ tế bào, hay chu kỳ phân bào, vòng tuần hoàn kiện xảy tế bào từ lần phân bào lần kế tiếp, gen. .. giá tác động dịch chiết Lá khôi lên biểu gen kiểm soát chu kỳ tế bào tế bào gốc ung thư dày RNA tổng số từ tế bào đối chứng không xử lý với dịch chiết Lá khôi tế bào xử lý với dịch Số hóa Trung