Nghiên cứu khả năng điều hòa đáp ứng viêm của wedelolacton từ cây nhọ nồi trong điều trị bệnh nhiễm trùng nặng và choáng nhiễm trùng thông qua thụ thể dectin – 1

Nghiên cứu khả điều hòa đáp ứng viêm Wedelolacton từ nhọ nồi điều trị bệnh nhiễm trùng nặng chống nhiễm trùng thơng qua thụ thể Dectin – Thân Văn Minh Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Khoa Sinh học Luận văn ThS Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm; Mã số: 60 42 30 Ngƣời hƣớng dẫn: TS Trịnh Tất Cƣờng Năm bảo vệ: 2011 Abstract: Tổng quan vai trò dệ thống miễn dịch bảo vệ thể Trình bày khái niệm viêm, nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng nhƣ miễn dịch bẩm sinh vật chủ đáp ứng trình nhiễm vi khuẩn Tìm hiểu nhọ nồi vai trị Wedelolactone qúa trình chống viêm Nghiên cứu khả điều hòa Wedelolactone trình sản xuất cytokine tiền viêm trình tạo phản ứng oxy hóa BMDM thơng qua cấu tử đặc hiệu Dectin-1 Đánh giá hiệu điều trị Wedelolactone chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng gây zymosan Đƣa kết thảo luận: khả sống tế bào không bị ảnh hƣởng Wedelolactone; đánh giá khả zymosan kích thích tế bào BMDM sinh cytokine; Keywords: Sinh học thực nghiệm; Điều trị bệnh; Sinh học; Cây nhọ nồi; Bệnh nhiễm trùng Content Nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng hội chứng lâm sàng đặc trƣng viêm hệ thống nhiễm trùng Ngay điều trị tối ƣu, tỉ lệ tử vong nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng gần 40% Tần suất nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng gia tăng 15 năm gần Tại Mỹ: 750.000 ca/năm; 10 nguyên nhân tử vong thƣờng gặp Mặc dù, nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng đƣợc phát từ 30 năm trƣớc, nhƣng bệnh nhân mắc bệnh có khả tử vong cao Do vậy, việc tìm kiếm phƣơng pháp tá dƣợc chữa bệnh vấn đề cần thiết cấp bách để điều trị hiệu trình viêm hệ thống, hỗ trợ cải thiện đƣợc khả điều trị bệnh nhân bị nhiễm trùng nặng chống nhiễm trùng Cây nhọ nồi (có tên khoa học Eclipta prostrata Eclipta alba) thực vật thuộc họ cúc (Asteraceae) mọc vùng ẩm nhƣ loại cỏ khắp giới Cây nhọ nồi mọc nhiều Ấn Độ, Trung Quốc, Thái Lan, Việt Nam [2] Các hoạt tính dƣợc học Wedelolactone từ nhọ nồi đƣợc chứng minh in vitro in vivo [31] Cho đến nay, nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng nguyên nhân ca tử vong bệnh nhân cần chăm sóc đặc biệt (ICU) Các trƣờng hợp tiếp tục gia tăng rộng khắp giới Tại Việt Nam, nghiên cứu chiết xuất tinh chế xác định hoạt tính sinh học Wedelolactone từ nhọ nồi Việt Nam đƣợc tiến hành Phịng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzym Protein, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội Bƣớc đầu cho thấy tác dụng chất q trình chống viêm Với hoạt tính phịng chống viêm đầy tiêm Wedelolactone, muốn nghiên cứu sâu đặc tính, chế chống viêm khả điều trị bệnh nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng mức độ in vitro in vivo tạo sở cho nghiên cứu khoa học thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng sau này, nhằm đến đích cuối làm thuốc phòng ngừa chữa trị bệnh viêm nhiễm đặc biệt bệnh nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng góp phần vào việc chăm sóc bảo vệ sức khỏe cho cộng đồng Xuất phát từ sơ khoa học thực tiễn tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả điều hòa đáp ứng viêm Wedelolacton từ nhọ nồi điều trị bệnh nhiễm trùng nặng chống nhiễm trùng thơng qua thụ thể Dectin – 1” Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU VAI TRÒ CỦA HỆ THỐNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI BẢO VỆ CƠ THỂ Miễn dịch bẩm sinh miễn dịch đáp ứng hai loại đáp ứng miễn dịch bảo vệ quan trọng động vật có xƣơng sống Miễn dịch đáp ứng bẩm sinh có vai trị nhƣ hàng rào bảo vệ nhƣng lại khả nhận dạng lập lại mầm bệnh trợ giúp đáp ứng miễn dịch đặc hiệu Miễn dịch đáp ứng nhận dạng mầm bệnh dựa vào chọn lọc vùng cụ thể nhờ vô số tế bào lymphocyte mang nhiều thụ thể đặc hiệu kháng nguyên mà cho phép hệ thống miễn dịch nhận dạng kháng nguyên bên xâm nhập vào thể Hệ thống miễn dịch bẩm sinh sử dụng vô số thụ thể để nhận dạng đáp ứng tới mầm bệnh giai đoạn ban đầu thể Quá trình nhận dạng mầm bệnh thụ thể có vai trị vơ quan trọng q trình truyền tín hiệu tới đáp ứng viêm, sản xuất tế bào hiệu tham gia vào trình viêm cục bắt đầu đáp ứng trình miễn dịch đáp ứng Vô số thụ thể nhận dạng mầm bệnh mẫu (PRR) bao gồm thụ thể Toll-like (TLR), lectin, Dectin-1 thụ thể scavenger định tới khả sống xót vật chủ q trình nhận dạng mẫu phân tử mầm bệnh nhƣ vi khuẩn, virut, nấm có cấu trúc giống nhƣ thụ thể riêng biệt đƣợc gọi PAMP (pathogenic associated molecules pattern) Quá trình nhận dạng mầm bệnh q trình thực bào kích thích thực bào hóa, sinh cytokine, chemokine tiền viêm, trí kích thích q trình ban đầu miễn dịch đáp ứng KHÁI NIỆM VIÊM Viêm (inflammation) phần đáp ứng sinh học phức tạp mao mạch với vị trí bị tở n thƣơng th ể bị kích thích mầm bệnh tế bào bị hỏng Quá trình nhằm bảo vệ quan, loại bỏ hay sửa chữa vị trí kích thích bị thƣơng bị lỗi Khi phản ƣ́ng viêm xảy , nhiề u loa ̣i tế bào sẽ đƣơ ̣c hoa ̣t hóa tập trung đến ổ viêm nhƣ các loa ̣i tế bào di chuyể n (migrating cells) gồ m: bạch cầ u đơn nhân , đa nhân , tế bào lympho , tiể u cầ u , tế bào nô ̣i ma ̣c… Các t ế bào này giải phóng hàng loạt chất trung gi an, phầ n lớn là các chấ t p rostaglandins (PG), leukotrienes (LT), histamine, bradykinin, nhân tố hoa ̣t hóa tiể u cầ u interleukin-1 Các chấ t này la ̣i tiế p tu ̣c hoa ̣t hóa các tế bào khác làm giải phóng hàng loa ̣t các enzyme “do ̣n de ̣p” chủ yế u phân giải protein nhƣ các prote inase, interleukin, yếu tố ngoại tử khối u (TNF-α), superoxide, H+, hydroperoxide gây tổ n thƣơng mơ , qua đó khép kín q trình viêm mạn tính Q trình tiết chất trung gian nhƣ làm tăng dòng chảy máu tới vùng bị xâm nhập dẫn tới tƣợng bị đỏ, nóng Một vài chất tiế t làm h ẹp dòng chảy của máu d ẫn tới bị sƣng Khi trình viêm kéo dài dẫn tới hiệu tích lũy trạng thái cân quá trình viêm chi ếm ƣu q trình kháng viêm q trình đơng tụ chiếm ƣu trình phân giải tơ huyết (fibrin) Q trình nghẽn mạch, thiếu máu cục bộ, mơ bị tổn thƣơng hậu tiếp sau dẫn tới viêm nặng choáng viêm, chức đa quan tử vong [23] NHIỄM TRÙNG NẶNG VÀ CHỐNG NHIỄM TRÙNG Nhiễm trùng đƣợc định nghĩa nhƣ phổ điều kiện lâm sàng gây đáp ứng miễn dịch bệnh nhân tới trình nhiễm trùng mà đƣợc đặc trƣng viêm hệ thống q trình đơng tụ [6,7,8] Các bệnh nhân mắc nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng trải qua hai giai đoạn đáp ứng miễn dịch [7] Thời kỳ đầu biểu đáp ứng viêm ạt tới trình nhiễm trùng Hầu hết, cytokine tiền viêm nhƣ TNF, interleukine (IL)-1, IL-6, IL-12, interferon gamma (IFN gamma) Sau đó, thể điều hịa đáp ứng sản xuất cytokine kháng viêm (IL-10), chất ức chế thụ thể TNF, thụ thể IL-1 loại II, IL-1RA (một dạng bất hoạt IL-1) [12] Các lớp đáp ứng viêm hệ thống vật chủ đƣợc bắt đầu số sản phẩm vi khuẩn Những sản phẩm vi khuẩn (vi khuẩn gram âm bao gồm nội độc tố: lipopolysaccharide (LPS), formyl peptides, ngoại độc tố proteases; vi khuẩn gram dƣơng nhƣ ngoại độc tố, siêu kháng nguyên, ngoại độc tố A streptococcal pyrogenic (SpeA), peptidoglycan, axít lipotechoic) số chất vỏ tế bào nấm (zymosan đƣợc phân tách từ Saccharomyces cerevisiae) liên kết thụ thể macrophage vật chủ kích hoạt protein điều hịa (yếu tố nhân Kappa B (NFқB)) [12] Chẳng hạn, thụ thể Toll like (TLR4) nhận dạng LPS, thụ thể Dectin-1 nhận dạng zymosan [8,15] Sau đó, thụ thể chuyển tín hiệu vào tế bào Hiệu tích lũy lớp viêm hệ thống dẫn tới trạng thái cân bằng, với trình viêm chiếm ƣu trình kháng viêm q trình đơng tụ chiếm ƣu q trình phân giải tơ huyết (fibrin) Quá trình nghẽn mạch, thiếu máu cục bộ, mô bị tổn thƣơng hậu tiếp sau dẫn tới nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng, chức đa quan tử vong [23] MIỄN DỊCH BẨM SINH CỦA VẬT CHỦ ĐÁP ỨNG QUÁ TRÌNH NHIỄM VI KHUẨN Hệ thống miễn dịch bẩm sinh bao gồm vô số thành phần khác để chống lại trình xâm nhập vi sinh vật Thứ nhất, chức hàng rào biểu bì thể cản trở trình gây viêm nhiễm mầm bệnh Thứ hai, tế bào phân tử kiểm sốt phá hủy mầm bệnh mà trốn thoát khỏi lớp hàng rào bảo vệ biểu bì để xâm nhập tiếp vào bên Thứ ba hàng rào quan trọng hệ thống bảo vệ miễn dịch bẩm sinh mơ tế bào macrophage truyền tin hiệu bảo vệ tế bào vùng ngoại biên hệ thống bổ thể protein truyền tín hiệu hệ thống miễn dịch bẩm sinh dƣới dạng dịch nằm khoảng không mơ máu Q trình nhận dạng hệ thống miễn dịch loại bỏ mầm bệnh xâm nhập thông qua vô số chế hiệu khác Hệ thống miễn dịch bẩm sinh xem nhƣ có vai trị quan trọng q trình viêm nhiễm 4.1 Các thụ thể nhận dạng mầm bệnh (PRRs) Thụ thể nhận dạng mầm bệnh (PRR, pathogen recognition receptor) đƣợc chia làm ba nhóm bắt nguồn từ vị trí tế bào là: thụ thể huyết phần dịch mô; màng tế bào hay cytoplasm; hay nằm màng dịch tế bào đƣợc xem thụ thể nhận dạng mầm bệnh [19] Mỗi nhóm thụ thể PRR có phối tử đặc hiệu để nhận dạng loại vi sinh vật định [19] Các thụ thể nhận dạng mầm bệnh cách trực tiếp (không thông qua opsonin) gián tiếp (thông qua oposonin) [19] Đối với In vivo, nhiều thụ thể tham gia để nhận dạng vi khuẩn thông qua đa phản ứng đa vị trí Các phần có nguồn gốc từ nấm hay mấm lớn đƣợc nhận PRR giống nhƣ thụ thể TLR, thụ thể mannose, bổ thể (CR3), dectin-1 [20] Quá trình nhận dạng mầm bệnh PRR kích thích q trình sản xuất cytokine chemokine dẫn tới trình hoạt động sinh tế bào khác tham gia tới vị trí trình bị viêm nhiễm Từ đây, dẫn tới phản ứng miễn dịch đáp ứng [12] Fungi Fungi TLR2 TLR6 Fungi Mannose receptor Dectin-1 CR3 CD11b CD18 Hình 1: Các thụ thể RRP nấm nhận dạng phần cacsbon Thụ thể Mannose nhận dạng thành phần mannan; TLR2 TLR6, CR3, dectin-1 nhận dạng β-glucans 4.2 Thụ thể Toll- like (TLR) Thụ thể Toll- like (TLR) protein màng mà nhận dạng phân tử có sẵn mầm bệnh (PAMP) [20] Trong động vật có vú, họ thụ thể TLR bào gồm 10 loại khác Chúng có vai trị tới nhận dạng phối tử có nguồn gốc từ mầm bệnh [20] TLR2 nhận dạng lipoproteins gốc đƣờng có gắn lipid(lipoarabinomannan) từ thành tế bào vi khuẩn nấm [13] TLR4 nhận dạng lipopolysaccharide (LPS) từ thành tế bào vi khuẩn gram âm [15] TLR9 nhận dạng deoxycytidylate-phosphate-deoxyguanylate (CpG) có deoxyribonucleic acid (DNA) vi khuẩn [13] Một vi sinh vật đƣợc nhận nhiều TLR Thực tế, tổ hợp TLR tham gia vào đáp ứng viêm macrophage tế bào dendritic sinh trình thể bị nhiễm mầm bệnh [20] TLR bao gồm đoạn nằm bên tế bào đƣợc gọi thụ thể Toll/IL-1 (TIR) Đoạn tƣờng với đoạn TIR khác Những đoạn TIR có chứa phân tử tiếp nối giống nhƣ giống nhƣ yếu tố phân chia tế bào 88 (MyD88), protein nối tiếp có đoạn TIR (TIRAP), mộ đoạn TIR có chứa phần interferon-β (TRIF), phân tử tiếp nối với TRIF (TRAM) [20] Q trình nhận dạng mầm bệnh TLR2 kích thích q trình hoạt động yếu tố hoạt động nhân tế bào NF-kB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells), sản xuất cytokine tiền viêm nhƣ tumor necrosis factor, TNF-α thông qua đoạn TIRAP đoạn MyD88, nhƣng trình nhận dạng TLR4 lại kích thích hoạt động NF-κB thơng qua TIRAP, MyD88 kích thích hoạt động đoạn phiễn mã interferon (IFN) giống nhƣ trình sản xuất IFN kiểu [27] 4.3.Thụ thể Dectin- Quá trình nhiễm nấm kích hoạt q trình hoạt động ban đầu đáp ứng miễn dịch bẩm sinh động vật có vú thơng qua quan cảm ứng trình nhiễm trùng [16] Chất β-glucan thành phần quan trọng vỏ tế bào nấm Tế bào nhận đƣợc thành phần xâm nhập nhờ vao hoạt động thụ thể Dectin-1 Thụ thể nằm màng tế bào có đoạn kiểu C lectin gắn với loại màng kiểu II có đoạn bên cytoplasma tế bào với phần hoạt động dựa vào thụ thể miễn dịch tyrosine [8] Dectin-1 đƣợc biểu dòng tế bào myeloid, monocyte, đại thực bào, tế bào trung tính tế bào tua [16] Cho đến thụ thể Dectin-1 đƣợc hiểu rõ thụ thể biểu mạnh đại thực bào trình thực bào nấm Đặc biệt thụ thể nhận dạng đặc hiệu β-glucan zymosan (một chất có chứa hàm lƣợng lớn β-glucan đƣợc tách chiết từ Sacchomyces) Các đáp ứng thực bào trình nhận dạng vi sinh vật sản xuất cytokine, chemokine, q trình thực bào hóa, giết mầm bệnh sản xuất peptide kháng vi sinh vật, phản ứng oxy hóa (ROS) RNS [16] 4.4 Thụ thể Dectin-1 hoạt động với TLR2 để nhận dạng phối tử có nguồn gốc từ vi sinh vật Zymosan hợp chất mà lƣợng β-glucan thành tế bào Saccharomyces cerevisiae chiếm phần [8,16] Thành phần zymosan có βglucan, mannan, chitin Thành phần đƣợc nhận dạng số thụ thể chẳng hạn nhƣ TLR2, TLR6, Dectin-1, thụ thể mannose, CR3 [16] Chất đƣợc chứng minh kích thích q trình đại thực bào q trình viêm in vivo in vitro [16] Dectin-1 hoạt động với số TLR để nhận dạng nấm [16] Thụ thể với TLR2, Dectin-1 nhận dạng zymosan nấm Candida albicans truyền tín hiệu điều hịa hoạt động yếu tố nhân kích hoạt tế bào T (NFAT) trình sản xuất interleukin (IL)-2, IL-10, IL-12 p70 tế bào dendritic [16, 26] Dectin-1 tham gia vào trình thực bào, hoạt động yếu tố tự phân bào (ERK)1/2 (extracellular signal-regulated kinase), trình sản xuất cytokine tiền viêm với TLR2 để nhận dạng Mycobacterium abscessus [16] Hơn nữa, Dectin-1 tham gia với TLR2 TLR4 đáp ứng miễn dịch bẩm sinh tới nhận Mycobacterium ulcerans để kích thích sinh gốc oxy hóa (ROS) sản xuất chemokines IL-37 kerainocyte ngƣời Do vậy, Dectin-1 thực vai trị hoạt động giống nhƣ thụ thể nhận dạng trình nhiễm nấm mycobacterium [16] Hình 2: Tín hiệu Dectin-1 hợp tác TLR để nhận dạng nấm Dectin-1 nhận dạng nấm để sinh trình enzyme kinsase tyrosine lách (Syk) đoạn protein caspase (CARD)9 CARD9 tác động với B-cell lymphoma-10 (Bcl-10) vùng phiên mã gen lympho (MALT1) để kích thích tạo ROS trình hoạt động NF-κB Quá trình biểu Dectin-1 expression tăng cường trình sản xuất cytokine có mặt TLR2 TLR6 4.5 Glucocorticoid Glucocorticoid đƣợc sử dụng nhƣ chất chống viêm với nhiều chế trình hoạt động [17] Rất nhiều nghiên cứu chứng minh glucocorticoid điều hịa đƣợc chức tế bào viêm, đặc biệt trình phiên mã gen sinh cytokine [11] Hơn nữa, glucocorticoid ức chế q trình sản xuất cytokine tiền viêm nhƣ TNF-α, IL-6, IL-1, làm giảm q trình tiết gốc nito q trình hoạt hóa yếu tố mô tế bào macrophage [22] Do vậy, glucocorticoid đƣợc sử dụng điều trị số bệnh viêm nhiễm bệnh mẫn cảm miễn dịch Nhƣng nữa, chúng có tiềm vơ to lớn hoạt động kháng viêm giảm trình miễn dịch khơng có lợi cho thể [9,17, 21] Nhìn chung, trình viêm hệ thống kiểm soát đƣợc xem nhƣ đặc trƣng nhiễm trùng, triệu chứng viêm cấp tính đƣờng hơ hấp Một chất đƣợc biết Hydrocortisone, glucocorticoid, làm giảm đáng kể mức plasma protein C, phospholipase A2, loại bỏ bớt tế bào neutrophil bệnh nhân bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng [22] Những nghiên cứu gần chất điều hịa hầu hết cytokine tiền viêm [11], bao gồm ức chế cytokine có vai trị quan trọng miễn dịch bẩm sinh nhiễm trùng [22] Hiệu glucocorticoid đƣợc chứng minh bệnh nhiễm trùng nặng nhƣ nhiễm vi khuẩn meningitis, pneumocystis pneumonia, typhoid fever, trƣờng hợp nhiễm H5N1 [11] 4.6 ROS p47phox 4.6.1.Gốc oxy hóa ROS ROS (reactive oxygen species) đại diện nhỏ phản ứng oxy hóa, bao gồm superoxide (O2-) anion, hydrogen peroxide (H2O2), peroxyl (ROO-) radical, acid (HOCl), ozone (O3)[14] ROS đƣợc tạo thông qua loạt phản ứng mà bắt đầu trình tạo superoxide [14] Quá trình tạo ROS sinh lý đƣợc xem nhƣ sản phẩm phụ xảy mitochondria, cytochrome P-450, yếu tố tế bào khác [23] ROS tƣơng tác với vơ số phân tử, bao gồm phân tử hữu nhỏ, protein, lipid, carbohydrate nucleic acid [14] Thông qua tƣơng tác, ROS gây thảm họa làm thay đổi chức phân tử đích [14] Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases (Nox) tạo ROS Thực ra, ROS tham gia chế truyền tín hiệu kích thích liên quan tới khả miễn dịch q trình viêm [14] ROS kích thích hoạt động NF-κB Ví dụ, q trình sản xuất TNF-α đƣợc điều hòa đƣờng NF-kB đƣợc kích hoạt ROS tế bào Kuffer, macrophage gan [25] Hơn nƣa, ROS điều hịa hoạt động activator protein-1 (AP-1) (một yếu tố tham gia q trình viêm) thơng qua nhiều chế khác [28] 4.6.2 Vai trị p47phox q trình sinh ROS Nox sản xuất ROS thông qua nhiều tiểu đơn vị bao gồm thành phần điều hòa cytoplasma Rac, p67phox, p47phox, p40phox protein màng flavocytochrome b558, bao gồm tiểu đơn vị gp91phox (Nox2) p22 phox [28] p47phox có vai trị hoạt động Nox [28] Ở trạng thái bất hoạt, p47phox chuyển động tới tiểu đơn vị cytoplasma khác p67phox p40phox Ở trạng thái hoạt động, tiểu đơn vị kết hợp lại chuyển electron màng tế bào đƣợc biết nhƣ gốc oxy hóa (O2-) [10] Nhiều cơng bố p47phox có vai trị quan trọng q trình tạo nên ROS Nó đƣợc biểu tế myeloid, đoạn mô nhƣ bên tai, nơron thần kinh, tế bao gan, phổi [14] O2- Hình 3: Quá trình liên kết để tạo ROS (gốc oxy hóa) Ở trạng thái bất hoạt tế bào, prtotein thuộc cytoplasma bao gồm phức hệ p40phox, p47phox, p67phox, guanosine diphosphate (GDP), không liên kết với dạng cytochrome b558 bao gồm gp91phox (Nox2) protein p22phox Khi trạng thái hoạt động, có thay đổi GDP guanosine-5'-triphosphate (GTP) Ras xem độc tố C3 botulinum dẫn tới kích hoạt Lúc này, p47phox phospho hóa truyền tín hiệu tới làm cho phức hệ p67phox, p40phox chuyển tới màng tế bào plasma Q trình phospho hóa p47phox làm thay đổi cấu trúc dẫn tới tương tác với p22phox Quá trình chuyển tới màng phức hệ p67phox, p40phox làm cho p67phox tương tác với Nox2 Cuối enzym GTP Rac tương tác với Nox2 Phức hệ hoạt động tạo superoxide (O2-) chuyển electron từ NADPH cytoplasma thành oxy hóa ngồi tế bào [14] chống viêm nguyên nhân ca tử vong bệnh nhân cần chăm sóc đặc biệt Các trƣờng hợp tiếp tục gia tăng rộng khắp giới Việt Nam Trong nhiề u trƣờng hơ ̣p , trình bị viêm kéo dài mà không đƣơ ̣c điề u tri ̣kip thời còn dẫn đế n nhƣ̃ng bê ̣nh man tính nguy hiể m nhƣ tim ma ̣ch , tiể u ̣ ̃ đƣờng, thấ p khớp… Việt Nam nƣớc có nguồn tài nguyên sinh vật phong phú, đặc biệt thực vật Theo thống kê Viện Dƣợc liệu tính đến năm 2000, nƣớc ta có gần 4000 loài thực vật, 22 loài tảo 33 loài động vật đƣợc dùng làm thuốc mức độ khác nhau, chƣa kể đến nhiều lồi tảo biển động vật biển đƣợc dùng làm thuốc[2] Các số liệu cho thấy tiềm to lớn nguồn dƣợc liệu Việt Nam sử dụng nghiên cứu sàng lọc để tim nh ững chất có hoạt tính ̀ dƣợc học quý hiếm, có chất chống viêm có hiệu cao mà khơng gây phản ứng phụ Tuy vậy, nói nghiên cứu khoa học cách có hệ thống chi tiết điều tra, khai thác, đánh giá tác dụng sử dụng chất hoạt tính sinh học từ nguồn tài nguyên sinh vật nƣớc để phát triển thành sản phẩm thuốc mới, phục vụ cho bảo vệ chăm sóc sức khỏe cộng đồng hạn chế Trong lĩnh vực nghiên cứu ứng dụng chất kháng viêm, nói chƣa có nghiên cứu sâu nhƣ chƣa có hệ thống mơ hình nghiên cứu đại trình viêm tác dụng chất chống viêm Đây sở để phát triển sản phẩm thuốc thƣơng mại đƣợc thị trƣờng Việt Nam quốc tế Các nghiên cứu viêm đƣợc thực chủ yếu Viện Dƣợc liệu Trung ƣơng, trƣờng Đại học Dƣợc, trƣờng Đại học Y Hà Nội Học viện Quân y 103 Các nghiên cứu nhƣ̃ng sở dừng mức tạo đƣợc mơ hình gây viêm thực nghiệm in vivo cổ điể n nhƣ đã trinh bày ở Cụ thể thí nghiệm đƣợc thực chu ột ̀ thông qua sử dụng chất gây viêm carrageenan để tạo mơ hình viêm cấp dƣới hình thức gây phù bàn chân chuột gây viêm màng bụng chuột sau tiêm chất gây viêm Việc gây viêm mãn tính sử dụng chất amiant để tạo u hạt thể chuột Việc đánh giá tác dụng kháng viêm đƣợc thực cách đo thể tích bàn chân, đo thể tích dịch viêm ổ bụng, đo trọng lƣợng khối u hạt tách ra, đếm số lƣợng bạch cầu so với mẫu đối chứng, từ đánh giá tác dụng kháng viêm chất nghiên cứu Ngoài ra, việc đánh giá tác dụng kháng viêm chủ yếu đƣợc thực với cao chiết thơ thực vật Điển hình nhƣ nghiên cứu của Đă ̣ng Diễm Hồ ng và cô ̣ng sƣ̣ với các dich chiế t rong ̣ tảo biển Việt Nam [1] Nhóm nghiên cứu phát thấy dịch chiết methanol hai loài tảo biển Sargassum swartzii Ulva reticulata thể hiê ̣n hoa ̣t tinh kháng viêm cao ́ mà không gây độc v ới động vật thử nghiệm [1] Hàng loạt nghiên cứu khác thời gian gầ n cũng chỉ sƣ̉ du ̣ng các mô hinh nghiên cƣ́u này để đánh giá tác du ̣ng ̀ kháng viêm dịch chiết thực vật nghiên cứu Ví dụ nhƣ Hà Vân Oanh c ộng (2010) cao lỏng rễ bạch đồng nữ (Clerodendrum chinense) [4], Đỗ Thị Oanh cộng (2010) cao sói r ừng (Sapium sebiferum) [3] hay Nguyễn Thị Bích Hằng (2009) cao lỏng vọng cách (Premna corymbosa) [5] Nhƣ nói rằng, mơ hình nghiên cứu viêm đánh giá tác dụng kháng viêm Việt Nam đơn giản, cổ điể n , tố n nhiề u thời gian thi ếu tin câ ̣y Nhƣ vâ ̣y, thiếu nghiên cứu đại với các mơ hình gây viêm đ ạt chuẩn quốc tế hay nghiên cứu chế kháng viêm thông qua đánh giá ảnh hƣởng chất nghiên cứu lên thụ thể nhƣ TLR, GC, mức độ giải phóng chất trung gian đƣợc tiết trình tiền viêm viêm, tín hiệu gây viêm đặc hiệu Đặc biệt, chƣa có mơ hình sàng lọc in vitro cho phép sàng lọc nhanh, xác hiệu chất kháng viêm từ nguồn nguyên liệu khác CÂY NHỌ NỒI VÀ VAI TRÒ CỦA WEDELOLACTONE TRONG QUÁ TRÌNH CHỐNG VIÊM 7.1 Cây nhọ nồi Thực vật nguồn vô giá sản phẩm dƣợc học Trên giới, thực vật có tính dƣợc học đƣợc sử dụng truyền thống sản xuất loạt hợp chất có nhiều tiềm chữa bệnh Việt Nam, lĩnh vực dƣợc học sản xuất nhiều sản phẩm có nguồn gốc từ thực vật mang dƣợc tính Thực vật làm thuốc góp phần quan trọng điều trị số bệnh thơng qua dƣợc tính quí giá [2] Cây nhọ nồi cỏ mực, hàn liên thảo (danh pháp khoa học: Eclipta alba Hassk, Eclipta prostrata L.) loài thuộc Họ Cúc Cây nhọ nồi cỏ, sống hay nhiều năm, mọc đứng hay mọc bò, cao 30-40cm Thân màu lục đỏ tía, phình lên mấu, có lơng cứng Lá mọc đối, gần nhƣ khơng cuống, mép khía nhỏ; hai mặt có lơng Hoa hình đầu, màu trắng, mọc kẽ thân, gồm hoa hoa lƣỡng tính Quả bế dài 3mm, có 2-3 vảy nhỏ, có cạnh, dẹt Hình 5: Cây nhọ nồi Theo đơng y nhọ nồi chữa can, thận âm hƣ, chứng huyết nhiệt, chứng ho máu, nôn máu, đại tiện tiểu tiện máu, chảy máu cam, chảy máu dƣới da, băng huyết rong huyết, râu tóc sớm bạc, lợi sƣng đau 7.2 Wedelolactone Cây nhọ nồi bao gồm nhiều hợp chất hữu giống nhƣ wedelolactone (I) demethylwedelolactone (II), polypeptide, polyacetylene, dẫn suất thiophene, steroid, triterpene and flavonoid [30] Đặc biệt, Wedelolactone đƣợc biết có loạt hoạt tính sinh học đƣợc sử dụng điều trị bệnh viêm gan, xơ gan, kháng vi khuẩn [30] Ngoài ra, Kobori cộng chứng minh đƣợc vai trò Wedelolactone nhƣ chất ức chế IKK, kinase đóng vai trị quan trọng hoạt động yếu tố NF-κB, cách tác động đến đƣờng photphoryl hóa IκBα [30] Bên cạnh đó, hợp chất hữu tự nhiên bao gồm Wedelolactone số chất từ Wedelia canlendulacea đƣợc sử dụng y học Nam Mỹ giống nhƣ thuốc kháng lại nọc độc rắn [32] Trong y học truyền thống Trung Quốc, Wedelolactone đƣợc sử dụng điều trị bệnh gan, bệnh viêm nhiễm virut [30] Hơn nữa, Wedelolactone có khả giảm phát triển ung thƣ Gần đây, số nghiên cứu cơng bố Wedelolactone có khả ức chế phát triển dòng tế bào ung thƣ tiền liệt tuyến, tuyến yên, hiệu dòng tế bào MDA-MB-23 (tế bào ung thƣ vú) [30] Ngoài ra, đây, hoạt tính Wedelolactone tách chiết từ nhọ nồi đƣợc tiến hành Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym ProteinĐại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội bƣớc đầu có kết đáng quan tâm khả chống viêm Đây sở để tiếp tục nghiên cứu sâu khả phòng chữa bệnh nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng hoạt chất tiềm mơ hình viêm in vitro thơng qua thụ thể Dectin-1 in vivo chuột bị choáng nhiễm khuẩn tiêm zymosan cấu tử đặc hiệu thụ thể Dectin-1, góp phần làm sáng tỏ vai trị hoạt chất Wedelolactone vai trò điều trị chống viêm Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 2.1.1.Động vật thí nghiệm Chuột Swiss đƣợc mua từ Viện vệ sinh dịch tế trung ƣơng Trọng lƣợng chuột từ 1820gram 2.1.2 Hóa chất Wedelolactone đƣợc cung cấp từ Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzym Protein Cấu tử đặc hiệu Dectin-1: zymosan (sigma, Mỹ), ELISA kit IL-6, IL-10, TNF, IL12p40 (BD Bioscience, Mỹ) Kit đếm tế bào sống chết (CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, Mỹ) Laminarin (chất ức chế Dectin-1), Galactan (chất đối chứng dƣơng, Sigma), hóa chất mua hãng Sigma Thuốc chống viêm Desamethasone (một loại thuốc sử dụng chống nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng, Sigma, Mỹ) 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu Tủ ấm CO2, Tủ cấy vô trùng Naure, Máy đọc ELISA(bio-rad, Mỹ), Tủ lạnh: Kính hiển vi soi ngƣợc (Olympus, Nhật), Máy khuấy từ nhiệt (Đức), kính hiển vi laze hội tụ (LSM 510)… dụng cụ thí nghiệm thông thƣờng khác nhƣ: đĩa nuôi cấy 24, 48, 96 giếng (Corning, Mỹ), kim uống, kim tiêm, dao, kéo 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1.Tách chiết macrophage từ tủy xƣơng chuột 2.2.2.Đánh giá hoạt tính độc tố Wedelolactone tới khả sống BMDM kít đếm tế bào sống chết 2.2.3 Đánh giá khả sản xuất cytokine ELISA Kit 2.2.4 Phân tích ức chế Wedelolactone q trình tạo phản ứng oxy hóa 2.2.5 Gây nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng chuột tiêm zymosan 2.2.6 Đánh giá hiệu sống xót chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng chuột Wedelolactone 2.2.7 Đánh giá hiệu ức chế trình sinh cytokine huyết Chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng tiêm Wedelolactone 2.2.8 Đánh giá hiệu Wedelolactone Dexamethason điều trị chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng 2.2.9.Phân tích thống kê Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khả sống tế bào không bị ảnh hƣởng bởi Wedelolactone Để khẳng định Wedelolactone có gây độc tố tế bào BMDM hay không, BMDM đƣợc chia vào giếng khác đĩa nuôi tế bào 96 giếng với mật độ 1x 105 Các BMDM đƣợc sử lý với Wedelolactone nồng độ khác nhƣ hình Sau đó, BMDM đƣợc ủ với 10 μl kit đếm tế bào Kết đƣợc Hình 1, tỉ lệ phần trăm BMDMs khơng có khác biệt BMDMs đƣợc sử lý với nồng độ khác Wedelolactone sau 48 Kết này, cho thấy Wedelolactone khơng có khả gây độc với BMDM TỶ LỆ TẾ BÀO SỐNG (%) 100 75 50 25 ĐC 10 20 30 (μg/ml ) Hình 8: Wedelolactone khơng gây độc tế bào BMDM BMDMs ni với mật độ 1×105 tế bào/ giếng Sau 3-4 ngày, tế bào sử lý với Wedelolactone nồng độ 10, 20, 30 μg/ml Các tế bào sống đo kit đếm tế bào Dữ liệu sai số ba thí nghiệm độc lập Đánh giá khả zymosan kích thích tế bào BMDM sinh cytokine Để xác định việc kích thích trình sinh cytokine tiền viêm kháng viêm BMDM zymosan, BMDM sau đƣợc nuôi đĩa 48 giếng với mật độ 1x105 đƣợc ủ với zymosan (100 µg/ml) thời gian khác nhƣ hình Nhƣ vậy, zymosan (100µg/ml) kích thích BMDM, sinh cytokine TNFα , IL 6, IL 12p40, IL-10 tăng dần từ mốc 0h , 4h ,8h , 18h sau bắt đầu giảm Từ kết này, thời gian ủ Zymosan để sinh Cytokine nhiều sau 18 nồng độ cytokine (pg/ml) 15000 nồng độ cytokine (pg/ml) 15000 IL-6 TNF-α 10000 10000 5000 5000 0 12000 18 48 (h) 10000 IL12p40 18 48 (h) IL-10 8000 8000 4000 4000 2000 18 48 (h) 18 48 (h) Hình 9: Zymosan kích thích tế bào BMDM sản xuất cytokine tiền viêm kháng viêm BMDMs từ chuột ủ với zymosan 100 (µg/ml) Dịch tế bào ủ với zymosan thời gian khác 0, 4, 8, 18, 48 đánh giá trình sản xuất cytokine ELISA Các kết biểu sai số ý nghĩa thí nghiệm độc lập Wedelolactone ức chế trình sinh cytokine tiền viêm BMDM đƣợc kích thích bởi zymosan Wedelolactone có khả làm giảm sốt, chống ung thƣ () Tuy nhiên, vai trị q trình truyền tín hiệu viêm gây zymosan chƣa đƣợc chứng minh Để đánh giá hiệu Wedelolactone trình này, BMDM đƣợc ủ với nồng độ khác Wedelolactone 45 phút Sau đó, BMDM đƣợc ủ tiếp với zymosan sau 18 Từ hình 10 cho thấy Wedelolactone ức chế trình sản xuất cytokine tiền viêm TNF, IL-6, IL12p40 Trái lại, protein kháng viêm IL-10 Wedelolactone lại khơng có khả ức chế Từ kết cho thấy với nồng độ nồng độ cytokine (pg/ml) nồng độ cytokine (pg/ml) 15000 IL-6 12000 TNF-α 10000 8000 5000 4000 Hình 10: Wedelolactone ức chế trình sinh cytokine tiền viêm BMDM DM 2.5 DM 10 đƣợc20 µg/ml kích thích zymosan2.5 W 10 20 µg/ml W zymosan zymosan 12000 IL-10 12000 IL-12p40 8000 8000 4000 4000 0 DM 2.5 W 10 20 µg/ml DM 2.5 10 20 µg/ml W zymosan zymosan zymosan Wedelolactone điều hịa q trình sinh cytokine tiền viêm thông qua thụ thể Dectin-1 Thụ thể Dectin-1 tham gia q trình nhận dạng miễn dịch ban đầu nấm thông qua liên kết glucan [59] Do đó, Wedelolactone đƣợc điều tra xem có khả ức chế trình sản xuất cytokine zymosan kích thích Đối với mục đích này, BMDMs đƣợc ủ với số nồng độ tăng dần laminarin, chất có khả ức chế trình hoạt động thụ thể Dectin-1 [27], polysaccharide galactan nồng độ giống nhƣ laminarin sau 45 phút Tiếp theo, tế bào đƣợc ủ với Wedelolactone (hình 11A), Dex (hình 11B) trƣớc ủ với zymosan Tế bào ủ với Laminarin xuất trình sinh cytokine ngƣợc lại với tế bào khơng sử lý với Laminarin hình 11A Các cytokine TNF-α, and IL-6 in BMDMs tăng dần theo nồng độ Laminarin Trái lại, tế bào đƣợc sử lý với polysaccharide galactan cho kết giống nhƣ tế bào đƣợc sử lý với Wedelolactone Giống nhƣ kết Hinh 11A, kết hình 4B cho kết tƣơng tự Những kết gợi ý thụ thể Dectin-1 có vai trị trình Wedelolactone Dex truyền trình ức chế zymosan kích thích sinh cytokine tiền viêm BMDMs A B 4800 4800 3600 3600 2400 2400 1200 1200 8000 8000 IL-6 6000 TNF- ** IL-6 6000 4000 4000 2000 2000 800 800 600 600 400 400 200 200 M ĐC ĐC IL-12p40 M ĐC ĐC lam gal W Dexa Hình 11: Wedolactone Dex điều hịa q trình đáp ứng viêm kích thích zymosan thơng qua thụ thể dectin-1 Wedelolactone điều khiển trình sinh ROS zymosan kích thích thơng qua thụ thể Dectin-1 Zymosan kích thích q trình sản xuất ROS đại thực bào [16] Tuy nhiên, vai trò Wedelolactone q trình sinh ROS zymonsan kích thích BMDB chƣa rõ Để điều tra trình này, BMDMs đƣợc ủ với Laminarin Galactan 60 phút trƣớc ủ với Wedelolactone (20g/ml) Dex (100nM) Sau đó, tế bào đƣợc ủ tiếp với zymosan 30 phút Các tế bào tiếp tục đƣợc ủ với DHE theo nhƣ phần phƣơng pháp Nhƣ Hình 12A, zymosan kích thích tạo ROS, nhiên trình sản xuất ROS bị ức chế tế bào đƣợc ủ với Wedelolactone nhƣng trình bị đảo ngƣợc tế bào đƣợc ủ với Laminarin Tuy nhiên, điều không xảy với tế bào đƣợc ủ với galactan Trên hình 12B, kết tƣơng tự hình 12A thay Wedelolactone Dex Những kết Wedelolactone điều hịa q trình sinh ROS zymosan kích thích BMDM thơng qua thụ thể Dectin-1 A B Zym Zym Quá trình sản xuất ROS(O2-) Quá trình sản xuất ROS(O2) W Dexa *** lam+ gal+ lam+ gal+ W W Dexa Dexa Hình 12: Wedelolactone Dex ức chế q trình sản sinh ROS đƣợc kích thích bởi zymosan thông qua Dectin-1 Wedelolactone bảo vệ chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng gây bởi zymosan Zymosan kích thích q trình viêm cấp tính làm hỏng đa quan mơ hình động vật bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng [23,24] Để đánh giá hiệu điều trị Wedelolactone chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng, chuột đƣợc chia thành nhóm khác (mỗi nhớm 10 con) đƣợc tiêm với Wedelolactone lần lƣợt 10 mg/kg, 20 mg/kg, 30 mg/kg trọng lƣợng thể nhóm đối chứng khơng đƣợc tiêm Wedelolactone Sau 24 giờ, nhóm chuột đƣợc tiêm zymosan (2 mg/g trọng lƣợng thể) Khả chuột sống xót đƣợc tính sau ngày đƣợc tiêm với zymosan Trên hình cho thấy chuột sau ngày khơng nhận đƣợc Wedelolactone chết 100% Tuy nhiên, chuột nhận đƣợc Wedelolactone nồng độ khác khả sống xót tăng dần Ở nồng độ Wedelolactone 20 mg/ml tỉ lệ sống xót gần 40% gần giống nhƣ tỉ lệ chuột sống xót với Wedelolactone 30 mg/ml Từ kết này, cho thấy Wedelolactone cải thiện đƣợc trình điều trị chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm khuẩn nồng độ 20 mg/ml ĐC (n=10) Khả 100 sống 80 xót 60 (%) W= 10 mg/kg (n= 10) 40 P=0.0123* (%) ĐC (n=10) W= 20 mg/ kg (n=10) Khả 100 sống 80 xót(%) 20 40 60 80 100 (h) ĐC (n=10) W= 30 mg/ kg (n=10) 60 60 40 40 20 20 Khả 100 sống 80 xót 20 0 20 40 60 80 100 (h) 20 40 60 80 100 (h) Wedelolactone làm giảm khả sản xuất cytokine chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng IL-6 Nồng độ 2000 TNF- Nồng độ4000 cytokine 1500 (pg/ml) cytokine 3000 (pg/ml) 2000 1000 1000 500 ĐC ĐC W ĐC ĐC W Zym Zym Hình 14: Wedelolactone ức chế trình sinh cytokine tiền viêm chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng Hiệu Wedelolactone Dexamethasone chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng A Khả sống xót 100 (%) ĐC W(20mg/kg) Dex (1mg/kg) 80 60 40 20 0 20 B Nồng độ 40 60 80 100 (h) Nồng độ Cytokine 4000 TNF- cytokine (pg/ml)2000 (pg/ml) 3000 2000 IL-6 1500 1000 1000 500 ĐC ĐC Dex W Zym ĐCĐC Dex W Zym Hình 15: Hiệu điều trị Wedelolactone cao so với Dexamethasone KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KÊT LUẬN Nghiên cứu chứng minh đƣợc vai trò Wedelolactone với nồng độ 20μg/ml q trình kháng viêm thơng qua thụ thể Dectin-1: - Ức chế đƣợc trình sinh cytokine tiền viêm TNF, IL-6, IL12p40 - Ức chế trình sinh gốc oxy hóa Quan trọng hơn, Wedelolactone với nồng độ 20mg/kg trọng lƣợng thể cải thiện đƣợc sống chuột bị nhiễm trùng nặng choáng nhiễm trùng KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu sâu chế chống viêm thử đối tƣợng khác chuột Xác định thêm Wedelolactone có phải cấu tử thụ thể Glucocorticoid hay không References TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Đặng Diễm Hồng, Hoàng Minh Hiền, Nguyễn Minh Thanh, Châu Văn Minh, Nguyễn Trọng Thông (2008) Nghiên cứu khả kháng viêm từ rong tảo biển Việt Nam Tạp chí Hố học 46(5A): 81-90 Đỗ Tất Lợi (2000) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học Hà Nội Đỗ Thị Oanh, Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Thi ̣Bích Hằ ng , Nguyễn Tro ̣ng Thông , Phạm Thị Vân Anh (2010) Nghiên cƣ́u tác du ̣ng chố ng viêm và bảo vê ̣ gan của cao sói rƣ̀ng (Sapium sebiferum) thƣ̣c nghiê ̣m Tạp chí Dược học 50(411): 36-39 Hà Vân Oanh , Phạm Xuân Sinh , Nguyễn Thái An , Nguyễn Tro ̣ng Thông , Phạm Thị Vân Anh (2010) Nghiên cƣ́u tác du ̣ng chố ng viêm cấ p của cao lỏng rễ ba ̣ch đồ ng nƣ̃ (Clerodendrum Chinese var simplex (Mold) SL Chen) thƣ̣c nghiê ̣m Tạp chí Dược học 50(414): 20-23 Nguyễn Thi ̣Bich Hằ ng , Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Tro ̣ng Thông, Phạm Thị Vân Anh, ́ Nguyễn Thi ̣Hoa Hiên (2009) Nghiên cƣ́u tác du ̣ng chố ng viêm của cao lỏng lá vọng cách (Premna corymbosa Rotteneen) thƣ̣c nghiê ̣m Tạp chí Dược học 48(389): 22-24 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Ahn, J Y., Song, J Y., Yun, Y S., Jeong, G., Choi, I.S., et al (2006) Protection of Staphylococcus aureus infected septic mice by suppression of Early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan FEMS Immunology and Medical Microbiology 46: 187-197 Annane, D., Sebille, V., Bellissant, E., the Ger-Inf Study Group (2006) Effects of low dose corticosteroids in septic shock patients with or without early acute respiratory distress syndrome Crit Care Med 34: 22-30 Ariizumi, K., Shen, G.L., Shikano, S., Xu, S., Ritter, R., Kumamoto, T., Edelbaum, D., Morita, A., Bergstresser, P.R., Takashima, A (2000) Identification of a novel, dendritic cell-associated molecule, dectin-1, by subtractive cDNA cloning Journal of Biological Chemistry 275: 2015720167 Attele, A.S., Wu, J.A., Yuan, C.S (1999) Ginseng pharmacology: Multiple constituents and multiple actions Biochemical Pharmacology 58: 1685-1693 10 Babior, B.M (1999) NADPH oxidase: an update Blood 93:146476 11 Bailey, J.M (1991) New mechanisms for effects of anti-inflammatory glucocorticoids Biofactors 3: 97-102 12 Barnes, P.J., Karin, M (1997) Nuclear factor-kappaB: A pivotal transcription factor in chronic inflammatory disease The England new journal of medicine 336: 1066-1071 13 Bauer, S., Kirschning, C.J., Häcker, H., Redecke, V., Hausmann, S., Akira, S., Wagner, H., Lipford, G.B (2001) Human TLR9 confers responsiveness to bacterial DNA via species-specific CpG motif recognition Proc Natl Acad Sci 98: 9237–9242 14 Bedard, K., Krause, K-H (2007) The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology Physiol Rev 87: 245–313 15 Blanqué R, Meakin C, Millet S, Gardner CR (1998) Selective enhancement of LPS-induced serum TNF-alpha production by carrageenan pretreatment in mice General Pharmacology 31(2):301-6 16 Brown GD (2006) Dectin-1: a signaling non-TLR pattern-recognition receptor Nature 6: 33-43 17 Briegel, J., Kellermann, W., Forst, H., Haller, M., Bittl, M., Hoffmann, G.E., et al (1994) Low-dose hydrocortisone infusion attenuates the systemic inflammatory response syndrome The phospholipase A2 study group Clin Invest 72:/782-7 18 Boguski MS (2002) News and views comparative genomics: The mouse that roared Nature 420: 515-516 19 Brown, G.D., Gordon, S (2001) Immune recognition A new receptor for betaglucans Nature 413: 36-37 20 Brown, G.D (2006) Dectin-1: a signaling non-TLR pattern-recognition receptor Natrure 6: 33-43 21 Choi, K.T (2008) Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng C A Meyer Acta Pharmacol Sin 29: 1109–1118 22 Clark, A.R (2007) Anti-inflammatory functions of glucocorticoid-induced genes Molecular and Cellular Endocrinology 275: 79-97 23 Cuzzocrea, S., Di, Paola R., Mazzon, E., Patel, N.S., Genovese, T., Muia, C., Crisafulli, C., Caputi, A.P., et al Thiemermann, C., et al (2006) Erythropoietin reduces the development of nonseptic shock induced by zymosan in mice Critical Care Medicine 34: 1168-1177 24 Cuzzocrea, S., Filippelli, A., Zingarelli, B., Falciani, M., Caputi, A.P., Rossi, F., et al (1997) Role of nitric oxide in a nonseptic shock model induced by zymosan in the rat Shock 7: 351-357 25 Dang, P.M., Stensballe, A., Boussetta, T., Raad, H., Dewas, C., Kroviarski Y, Hayem G, Jensen ON, Gougerot-Pocidalo MA, El-Benna J (2006) A specific p47phox-serine phosphorylated by convergent MAPKs mediates neutrophil NADPH oxidase priming at inflammatory sites Journal of Clinical Investigation 116: 2033-2043 26 Donini, M., Zenaro, E., Tamassia, N., Dusi, S (2007) NADPH oxidase of human dendritic cells: role in Candida albicans killing and regulation by interferons, dectin-1 and CD206 European Journal of Immunology 37: 1194-203 27 Doyle, S., et al (2002) IRF3 mediates a TLR3/TLR4- specific antiviral gene program Immunity 17: 251–263 28 El Benna, J., Faust, L.P., Babior, B.M (1994) The phosphorylation of the respiratory burst oxidase component p47phox during neutrophil activation Phosphorylation of sites recognized by protein kinase C and by prolinedirected kinases Journal of Biological Chemistry 269: 23431-6 29 Goldstein SA, Shemano I, Daweo R, Betler JM (1967) Cotton pellet granuloma pouch method for evaluation anti-inflammatory activity Arc International Pharmcodynamic Therapy 165: 294-301 30 Kobori M (2004) Wedelolactone suppresses LPS-induced caspase-11 expression by directly inhibiting the IKK complex Cell Death and Differentiation 11: 123–130 31 Vane J and Botting R (1987) Inflammation and the mechanism of action of anti-inflammatory drugs The FASEB Journal, 1(2): 89-96 32 Wagner H., et al (1986) Coumestans as the Main Active Principles of the Liver Drugs Eclipta alba and Wedelia calendulacea Planta Med 5: 370-4 Winter CA, Risely EA, Nuss GW (1962) Carregeenan induced edema in hind 33 paw of the rat as assay for anti-inflammatory drugs Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine 111: 544–547 ... ? ?Nghiên cứu khả điều hòa đáp ứng viêm Wedelolacton từ nhọ nồi điều trị bệnh nhiễm trùng nặng chống nhiễm trùng thơng qua thụ thể Dectin – 1? ?? Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU VAI TRÒ CỦA HỆ THỐNG... viêm nặng choáng viêm, chức đa quan tử vong [23] NHIỄM TRÙNG NẶNG VÀ CHỐNG NHIỄM TRÙNG Nhiễm trùng đƣợc định nghĩa nhƣ phổ điều kiện lâm sàng gây đáp ứng miễn dịch bệnh nhân tới trình nhiễm trùng. .. chữa bệnh nhiễm trùng nặng chống nhiễm trùng hoạt chất tiềm mơ hình viêm in vitro thơng qua thụ thể Dectin- 1 in vivo chuột bị choáng nhiễm khuẩn tiêm zymosan cấu tử đặc hiệu thụ thể Dectin- 1, góp