Nghiên cứu khả năng điều hòa đáp ứng viêm của Wedelolacton từ cây nhọ nồi trong điều trị bệnh nhiễm trùng nặng và choáng nhiễm trùng thông qua thụ thể Dectin – 1

Nghiờn cu kh nng iu hũa ỏp ng viờm ca Wedelolacton t cõy nh ni iu tr bnh nhim trựng nng v choỏng nhim trựng thụng qua th th Dectin Thõn Vn Minh Trng i hc Khoa hc T nhiờn, Khoa Sinh hc Lun ThS Chuyờn ngnh: Sinh hc thc nghim; Mó s: 60 42 30 Ngi hng dn: TS Trnh Tt Cng Nm bo v: 2011 Abstract: Tng quan v vai trũ ca d thng dch i vi bo v c th Trỡnh by khỏi nim viờm, nhim trựng nng v choỏng nhim trựng cng nh dch bm sinh ca vt ch ỏp ng quỏ trỡnh nhim vi khun Tỡm hiu cõy nh ni v vai trũ ca Wedelolactone qỳa trỡnh chng viờm Nghiờn cu kh nng iu hũa ca Wedelolactone quỏ trỡnh sn xut cytokine tin viờm v quỏ trỡnh to phn ng oxy húa BMDM thụng qua cu t c hiu ca Dectin-1 ỏnh giỏ hiu qu iu tr ca Wedelolactone chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng gõy bi zymosan a kt qu v tho lun: kh nng sng ca t bo khụng b nh hng bi Wedelolactone; ỏnh giỏ kh nng zymosan kớch thớch t bo BMDM sinh cytokine; Keywords: Sinh hc thc nghim; iu tr bnh; Sinh hc; Cõy nh ni; Bnh nhim trựng Content Nhim trựng nng v choỏng nhim trựng l hi chng lõm sng c trng bi viờm h thng nhim trựng Ngay c iu tr ti u, t l t vong nhim trựng nng v choỏng nhim trựng gn 40% Tn sut ca nhim trựng nng v choỏng nhim trựng gia tng 15 nm gn õy Ti M: 750.000 ca/nm; l 10 nguyờn nhõn t vong thng gp Mc dự, nhim trựng nng v choỏng nhim trựng ó c phỏt hin t 30 nm trc, nhng cỏc bnh nhõn mc cn bnh ny cú kh nng t vong rt cao Do vy, vic tỡm kim phng phỏp v tỏ dc cha bnh l mt cn thit v cp bỏch iu tr hiu qu quỏ trỡnh viờm h thng, v s h tr ci thin c kh nng iu tr ca bnh nhõn b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng Cõy nh ni (cú tờn khoa hc l Eclipta prostrata hoc Eclipta alba) l thc vt thuc h cỳc (Asteraceae) v mc nhng vựng m nh mt loi c khp th gii Cõy nh ni mc nhiu n , Trung Quc, Thỏi Lan, Vit Nam [2] Cỏc hot tớnh dc hc ca Wedelolactone t nh ni ó c chng minh in vitro v in vivo [31] Cho n nay, nhim trựng nng v choỏng nhim trựng l mt cỏc nguyờn nhõn chớnh ca nhng ca t vong cỏc bnh nhõn cn chm súc c bit (ICU) Cỏc trng hp ny tip tc gia tng rng khp trờn th gii Ti Vit Nam, nghiờn cu chit xut tinh ch v xỏc nh hot tớnh sinh hc ca Wedelolactone t cõy nh ni Vit Nam ó c tin hnh ti Phũng thớ nghim Trng im Cụng ngh Enzym v Protein, Trng i hc Khoa hc T nhiờn H Ni Bc u ó cho thy tỏc dng ca cht ny quỏ trỡnh chng viờm Vi hot tớnh phũng chng viờm y tiờm nng ca Wedelolactone, chỳng tụi mun nghiờn cu sõu hn na cỏc c tớnh, c ch chng viờm v kh nng iu tr bnh nhim trựng nng v choỏng nhim trựng mc in vitro v in vivo to c s cho cỏc nghiờn cu khoa hc th nghim tin lõm sng v lõm sng sau ny, nhm i n ớch cui cựng lm thuc phũng nga v cha tr cỏc bnh viờm nhim v c bit l bnh nhim trựng nng v choỏng nhim trựng gúp phn vo vic chm súc bo v sc khe cho cng ng Xut phỏt t c s khoa hc thc tin trờn chỳng tụi tin hnh ti: Nghiờn cu kh nng iu hũa ỏp ng viờm ca Wedelolacton t cõy nh ni iu tr bnh nhim trựng nng v choỏng nhim trựng thụng qua th th Dectin Chng 1: TNG QUAN TI LIU VAI TRề CA H THNG MIN DCH I VI BO V C TH Min dch bm sinh v dch ỏp ng l hai loi ỏp ng dch bo v quan trng i vi cỏc ng vt cú xng sng Min dch ỏp ng bm sinh cú vai trũ nh hng ro bo v u tiờn nhng li khụng cú kh nng nhn dng lp li cỏc mm bnh v tr giỳp ỏp ng dch c hiu Min dch ỏp ng nhn dng mm bnh da vo chn lc mt vựng c th nh vụ s cỏc t bo lymphocyte mang rt nhiu th th c hiu khỏng nguyờn m cho phộp h thng dch cú th nhn dng bt k khỏng nguyờn bờn ngoi xõm nhp vo c th H thng dch bm sinh s dng vụ s cỏc th th nhn dng v ỏp ng ti nhng mm bnh giai on ban u ca c th Quỏ trỡnh nhn dng mm bnh ca cỏc th th cú mt vai trũ vụ cựng quan trng quỏ trỡnh truyn tớn hiu ti nhng ỏp ng viờm, sn xut nhng t bo hiu qu mi tham gia vo quỏ trỡnh viờm cc b v bt u nhng ỏp ng ca quỏ trỡnh dch ỏp ng Vụ s cỏc th th nhn dng mm bnh mu (PRR) bao gm th th Toll-like (TLR), lectin, Dectin-1 v cỏc th th scavenger quyt nh ti kh nng sng xút ca vt ch bng quỏ trỡnh nhn dng nhng mu phõn t trờn mm bnh nh vi khun, virut, nm cú cu trỳc ging nh trờn cỏc th th riờng bit c gi l PAMP (pathogenic associated molecules pattern) Quỏ trỡnh nhn dng mm bnh bng quỏ trỡnh thc bo kớch thớch thc bo húa, sinh cytokine, chemokine tin viờm, v thm trớ l kớch thớch quỏ trỡnh ban u ca dch ỏp ng KHI NIM VIấM Viờm (inflammation) l mt phn ỏp ng sinh hc phc ca cỏc mao mch vi cỏc v trớ b tụ n thng trờn c th b kớch thớch bi cỏc mm bnh hay l nhng t bo b hng Quỏ trỡnh ny nhm bo v cỏc c quan, loi b hay sa cha nhng v trớ kớch thớch b thng v b li Khi phan ng viờm xay , nhiờ u loa i tờ bao se c hoa t húa v trung n viờm nh cac loa i tờ bao di chuyờ n (migrating cells) gụ m: bch cõ u n nhõn , a nhõn , cỏc t bo lympho , tiờ u cõ u , tờ bao nụ i ma c Cỏc t bo gii phúng hng lot cỏc cht trung gi an, phõ n ln la cac chõ t p rostaglandins (PG), leukotrienes (LT), histamine, bradykinin, nhõn tụ hoa t hoa tiờ u cõ u v interleukin-1 Cỏc chõ t la i tiờ p tu c hoa t hoa cac tờ bao khac lam giai phong hang loa t cac enzyme n de p chu yờ u phõn giai protein nh cac prote inase, cỏc interleukin, yu t ngoi t u (TNF-), cỏc superoxide, H+, hydroperoxide gõy tụ n thng mụ , qua o khep kớn quỏ trỡnh viờm mn tớnh Quỏ trỡnh tit ca cỏc cht trung gian nh trờn lm tng dũng chy ca mỏu ti nhng vựng b xõm nhp v dn ti hin tng b , núng Mt vi cht tiờ t lm h p dũng chy cua mau d n ti b sng Khi quỏ trỡnh viờm keo dai s dn ti hiu qu tớch ly v trng thỏi mt cõn bng qua trỡnh viờm chi m u th hn quỏ trỡnh khỏng viờm v quỏ trỡnh ụng t chim u th hn quỏ trỡnh phõn gii t huyt (fibrin) Quỏ trỡnh nghn mch, thiu mỏu cc b, cỏc mụ b tn thng s l hu qu tip sau dn ti viờm nng v choỏng viờm, mt chc nng ca a c quan v t vong [23] NHIM TRNG NNG V CHONG NHIM TRNG Nhim trựng cú th c nh ngha nh mt ph ca nhng iu kin lõm sng gõy bi ỏp ng dch ca bnh nhõn ti quỏ trỡnh nhim trựng m c c trng bi viờm h thng v quỏ trỡnh ụng t [6,7,8] Cỏc bnh nhõn mc nhim trựng nng v choỏng nhim trựng tri qua hai giai on ỏp ng dch [7] Thi k u s biu hin nhng ỏp ng viờm t ti quỏ trỡnh nhim trựng Hu ht, ú l cỏc cytokine tin viờm nh TNF, interleukine (IL)-1, IL-6, IL-12, v interferon gamma (IFN gamma) Sau ú, c th s iu hũa nhng ỏp ng ny bng sn xut nhng cytokine khỏng viờm (IL-10), cỏc cht c ch ca th th TNF, th th IL-1 loi II, v IL-1RA (mt dng bt hot ca IL-1) [12] Cỏc lp ỏp ng viờm h thng ca vt ch c bt u bng mt s sn phm vi khun Nhng sn phm vi khun (vi khun gram õm bao gm ni c t: lipopolysaccharide (LPS), formyl peptides, ngoi c t v proteases; cỏc vi khun gram dng nh ngoi c t, cỏc siờu khỏng nguyờn, ngoi c t A ca streptococcal pyrogenic (SpeA), peptidoglycan, axớt lipotechoic) v mt s cht ca v t bo nm (zymosan c phõn tỏch t Saccharomyces cerevisiae) liờn kt cỏc th th trờn macrophage ca vt ch v kớch hot nhng protein iu hũa (yu t nhõn Kappa B (NFB)) [12] Chng hn, th th Toll like (TLR4) nhn dng LPS, cũn th th Dectin-1 nhn dng i vi zymosan [8,15] Sau ú, cỏc th th chuyn tớn hiu vo t bo Hiu qu tớch ly ca nhng lp viờm h thng ny dn ti trng thỏi mt cõn bng, cựng vi quỏ trỡnh viờm chim u th hn quỏ trỡnh khỏng viờm v quỏ trỡnh ụng t chim u th hn quỏ trỡnh phõn gii t huyt (fibrin) Quỏ trỡnh nghn mch, thiu mỏu cc b, cỏc mụ b tn thng s l hu qu tip sau dn ti nhim trựng nng v choỏng nhim trựng, mt chc nng ca a c quan v t vong [23] MIN DCH BM SINH CA VT CH P NG QU TRèNH NHIM VI KHUN H thng dch bm sinh bao gm vụ s cỏc thnh phn khỏc chng li quỏ trỡnh xõm nhp ca vi sinh vt Th nht, cỏc chc nng ca hng ro biu bỡ ca c th cú th cn tr quỏ trỡnh gõy viờm nhim ca mm bnh Th hai, cỏc t bo v cỏc phõn t kim soỏt hoc phỏ hy cỏc mm bnh m cú th trn thoỏt lp hng ro bo v biu bỡ xõm nhp tip vo bờn Th ba cng l hng ro quan trng nht ca h thng bo v dch bm sinh ú cỏc mụ ca t bo macrophage truyn tin hiu bo v t bo cỏc vựng ngoi biờn v h thng b th ca protein truyn tớn hiu ca h thng dch bm sinh di dng dch nm gia khong khụng ca mụ v mỏu Quỏ trỡnh nhn dng bng h thng dch s loi b cỏc mm bnh xõm nhp thụng qua vụ s c ch hiu qu khỏc H thng dch bm sinh cú th xem nh cú vai trũ quan trng nht quỏ trỡnh viờm nhim 4.1 Cỏc th th nhn dng mm bnh (PRRs) Th th nhn dng mm bnh (PRR, pathogen recognition receptor) c chia lm ba nhúm chớnh bt ngun t v trớ t bo ú l: th th huyt hoc phn dch ca mụ; mng t bo hay cytoplasm; hay nm trờn mng hoc dch t bo c xem l th th nhn dng mm bnh [19] Mi nhúm th th PRR cú cỏc phi t c hiu ca chớnh mỡnh cú th nhn dng mt loi vi sinh vt nht nh [19] Cỏc th th ny cú th nhn dng mm bnh mt cỏch trc tip (khụng thụng qua opsonin) hoc giỏn tip (thụng qua oposonin) [19] i vi In vivo, nhiu th th cú th tham gia nhn dng vi khun thụng qua a phn ng a v trớ Cỏc phn cú ngun gc t nm hay mm ln c nhn bng PRR ging nh th th TLR, th th mannose, b th (CR3), v dectin-1 [20] Quỏ trỡnh nhn dng mm bnh ca PRR kớch thớch quỏ trỡnh sn xut cytokine v chemokine dn ti quỏ trỡnh hot ng v sinh cỏc t bo khỏc tham gia ti v trớ ang quỏ trỡnh b viờm nhim T õy, dn ti nhng phn ng ca dch ỏp ng [12] Fungi Fungi TLR2 TLR6 Fungi Mannose receptor Dectin-1 CR3 CD11b CD18 Hỡnh 1: Cỏc th th RRP i vi nm cú th nhn dng phn cacsbon Th th Mannose nhn dng thnh phn mannan; TLR2 v TLR6, CR3, dectin-1 nhn dng -glucans 4.2 Th th Toll- like (TLR) Th th Toll- like (TLR) l mt protein mng m nhn dng cỏc phõn t cú sn trờn mm bnh (PAMP) [20] Trong ng vt cú vỳ, h th th TLR bo gm ớt nht 10 loi khỏc Chỳng cú mt vai trũ c bn ti nhn dng cỏc phi t cú ngun gc t mm bnh [20] TLR2 cú th nhn dng lipoproteins cỏc gc ng cú gn lipid(lipoarabinomannan) t thnh t bo ca vi khun v nm [13] TLR4 nhn dng lipopolysaccharide (LPS) t thnh t bo ca vi khun gram õm [15] TLR9 cú th nhn dng deoxycytidylate-phosphate-deoxyguanylate (CpG) cú deoxyribonucleic acid (DNA) ca vi khun [13] Mt vi sinh vt cú th c nhn bi rt nhiu TLR Thc t, t hp ca TLR cú th tham gia vo cỏc ỏp ng viờm macrophage hoc t bo dendritic sinh quỏ trỡnh c th b nhim mm bnh [20] TLR bao gm mt on nm bờn t bo c gi l th th Toll/IL-1 (TIR) on ny s tng vi cỏc on TIR khỏc Nhng on TIR cú cha cỏc phõn t tip ni ging nh ging nh yu t phõn chia t bo 88 (MyD88), protein ni tip cú on TIR (TIRAP), m on TIR cú cha phn interferon- (TRIF), v phõn t tip ni vi TRIF (TRAM) [20] Quỏ trỡnh nhn dng mm bnh ca TLR2 s kớch thớch quỏ trỡnh hot ng ca yu t hot ng nhõn t bo l NF-kB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells), v sn xut cỏc cytokine tin viờm nh tumor necrosis factor, TNF- thụng qua on TIRAP v on MyD88, nhng quỏ trỡnh nhn dng ca TLR4 li kớch thớch hot ng ca NF-B thụng qua TIRAP, MyD88 v kớch thớch hot ng ca on phin mó ca interferon (IFN) ging nh quỏ trỡnh sn xut IFN kiu [27] 4.3.Th th Dectin- Quỏ trỡnh nhim nm ó kớch hot quỏ trỡnh hot ng ban u ca cỏc ỏp ng dch bm sinh ng vt cú vỳ thụng qua cỏc c quan cm ng i vi quỏ trỡnh nhim trựng [16] Cht -glucan l mt thnh phn quan trng v ca t bo ca nm T bo cú th nhn c thnh phn ny xõm nhp ú l nh vao s hot ng ca th th Dectin-1 Th th ny nm trờn mng t bo cú mt on kiu C lectin gn vi loi mng kiu II v cú mt on bờn cytoplasma ca t bo cựng vi mt phn hot ng da vo th th dch tyrosine [8] Dectin-1 c biu hin trờn cỏc dũng t bo myeloid, monocyte, i thc bo, t bo trung tớnh v t bo tua [16] Cho n th th Dectin-1 ó c hiu rt rừ l mt th th biu hin mnh nht trờn i thc bo quỏ trỡnh thc bo ca nm c bit th th ny cú th nhn dng c hiu i vi -glucan hoc zymosan (mt cht cú cha mt hm lng ln -glucan v c tỏch chit t Sacchomyces) Cỏc ỏp ng thc bo i vi quỏ trỡnh nhn dng vi sinh vt s sn xut cỏc cytokine, chemokine, quỏ trỡnh thc bo húa, git mm bnh bng sn xut cỏc peptide khỏng vi sinh vt, phn ng oxy húa (ROS) v RNS [16] 4.4 Th th Dectin-1 hot ng cựng vi TLR2 nhn dng cỏc phi t cú ngun gc t vi sinh vt Zymosan l mt hp cht m lng -glucan thnh t bo ca Saccharomyces cerevisiae chim phn chớnh [8,16] Thnh phn ca zymosan cú glucan, mannan, v chitin Thnh phn ny c nhn dng bng mt s th th chng hn nh TLR2, TLR6, Dectin-1, th th mannose, v CR3 [16] Cht ny ó c chng minh l kớch thớch quỏ trỡnh i thc bo v quỏ trỡnh viờm c in vivo v in vitro [16] Dectin-1 hot ng cựng vi mt s TLR nhn dng nm [16] Th th ny cựng vi TLR2, Dectin-1 nhn dng zymosan hoc nm Candida albicans truyn tớn hiu iu hũa hot ng ca yu t nhõn kớch hot t bo T (NFAT) v quỏ trỡnh sn xut interleukin (IL)-2, IL-10, v IL-12 p70 t bo dendritic [16, 26] Dectin-1 cng tham gia vo quỏ trỡnh thc bo, hot ng ca yu t t phõn bo (ERK)1/2 (extracellular signal-regulated kinase), v quỏ trỡnh sn xut cỏc cytokine tin viờm cựng vi TLR2 nhn dng Mycobacterium abscessus [16] Hn na, Dectin-1 tham gia cựng vi TLR2 v TLR4 ỏp ng dch bm sinh ti nhn Mycobacterium ulcerans kớch thớch sinh gc oxy húa (ROS) v sn xut chemokines v IL-37 kerainocyte ca ngi Do vy, Dectin-1 thc hin mt vai trũ hot ng ging nh mt th th chớnh nhn dng quỏ trỡnh nhim nm v mycobacterium [16] Hỡnh 2: Tớn hiu Dectin-1 hp tỏc cựng TLR nhn dng nm Dectin-1 nhn dng nm sinh quỏ trỡnh enzyme kinsase ca tyrosine lỏch (Syk) v mt on protein caspase (CARD)9 CARD9 tỏc ng cựng vi B-cell lymphoma-10 (Bcl-10) v vựng phiờn mó gen ca lympho (MALT1) kớch thớch to ROS v quỏ trỡnh hot ng ca NF-B Quỏ trỡnh biu hin ca Dectin-1 expression tng cng quỏ trỡnh sn xut cytokine s cú mt ca TLR2 v TLR6 4.5 Glucocorticoid Glucocorticoid ó c s dng nh mt cht chng viờm cựng vi rt nhiu c ch quỏ trỡnh hot ng ca nú [17] Rt nhiu nghiờn cu ó chng minh glucocorticoid cú th iu hũa c chc nng ca cỏc t bo viờm, c bit l quỏ trỡnh phiờn mó ca cỏc gen sinh cytokine [11] Hn na, glucocorticoid cú th c ch quỏ trỡnh sn xut cỏc cytokine tin viờm nh TNF-, IL-6, IL-1, v lm gim quỏ trỡnh tit gc nito v quỏ trỡnh hot húa cỏc yu t mụ t bo macrophage [22] Do vy, glucocorticoid ó c s dng iu tr mt s bnh viờm nhim v cỏc bnh mn cm dch Nhng hn na, chỳng cú tim nng vụ cựng to ln hot ng khỏng viờm v gim quỏ trỡnh dch khụng cú li cho c th [9,17, 21] Nhỡn chung, quỏ trỡnh viờm h thng mt kim soỏt c xem nh l cỏc c trng ca nhim trựng, ca triu chng viờm cp tớnh ng hụ hp Mt cht c bit ú Hydrocortisone, l mt glucocorticoid, cú th lm gim i ỏng k mc plasma ca protein C, phospholipase A2, v loi b bt cỏc t bo neutrophil cỏc bnh nhõn b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng [22] Nhng nghiờn cu gn õy cng ch cht ny cú th iu hũa hu ht cỏc cytokine tin viờm [11], bao gm c ch cỏc cytokine cú vai trũ quan trng dch bm sinh v nhim trựng [22] Hiu qu ca glucocorticoid ó c chng minh cỏc bnh nhim trựng nng nh nhim vi khun meningitis, pneumocystis pneumonia, typhoid fever, v nhng trng hp nhim H5N1 [11] 4.6 ROS v p47phox 4.6.1.Gc oxy húa ROS ROS (reactive oxygen species) l mt i din nh ca phn ng oxy húa, bao gm superoxide (O2-) anion, hydrogen peroxide (H2O2), peroxyl (ROO-) radical, acid (HOCl), ozone (O3)[14] ROS c to thụng qua mt lot cỏc phn ng m bt u bng quỏ trỡnh to superoxide [14] Quỏ trỡnh to ROS sinh lý c xem nh sn phm ph xy mitochondria, cytochrome P-450, v cỏc yu t t bo khỏc [23] ROS cú th tng tỏc cựng vi vụ s phõn t, bao gm nhng phõn t hu c nh, protein, lipid, carbohydrate v nucleic acid [14] Thụng qua nhng tng tỏc, ROS cú th gõy thm hoc lm thay i chc nng ca phõn t ớch [14] Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases (Nox) cng to ROS Thc ra, ROS tham gia cỏc c ch truyn tớn hiu kớch thớch liờn quan ti kh nng dch v quỏ trỡnh viờm [14] ROS kớch thớch hot ng ca NF-B Vớ d, quỏ trỡnh sn xut ca TNF- c iu hũa bng ng NF-kB c kớch hot bi ROS t bo Kuffer, macrophage gan [25] Hn na, ROS cú th iu hũa hot ng activator protein-1 (AP-1) (mt yu t tham gia quỏ trỡnh viờm) thụng qua nhiu c ch khỏc [28] 4.6.2 Vai trũ ca p47phox quỏ trỡnh sinh ROS Nox sn xut ROS thụng qua rt nhiu tiu n v ca nú bao gm cỏc thnh phn iu hũa cytoplasma l Rac, p67phox, p47phox, p40phox v cỏc protein mng flavocytochrome b558, bao gm tiu n v gp91phox (Nox2) v p22 phox [28] p47phox cú vai trũ c bn i vi hot ng ca Nox [28] trng thỏi bt hot, p47phox chuyn ng ti cỏc tiu n v cytoplasma khỏc l p67phox v p40phox trng thỏi hot ng, cỏc tiu n v ny s kt hp li v chuyn electron ngoi mng t bo c bit nh cỏc gc oxy húa (O2-) [10] Nhiu cụng b ó ch p47phox cú mt vai trũ quan trng i vi quỏ trỡnh to nờn ROS Nú c biu hin cỏc t myeloid, cỏc on mụ nh bờn tai, nron thn kinh, cỏc t bao gan, phi [14] O2- Hỡnh 3: Quỏ trỡnh liờn kt to ROS (gc oxy húa) trng thỏi bt hot ca t bo, cỏc prtotein thuc cytoplasma bao gm phc h p40phox, p47phox, v p67phox, v guanosine diphosphate (GDP), khụng liờn kt vi dng cytochrome b558 bao gm gp91phox (Nox2) v protein p22phox Khi trng thỏi hot ng, cú s thay i ca GDP i vi guanosine-5'-triphosphate (GTP) trờn Ras c xem nh l c t C3 botulinum dn ti kớch hot Lỳc ny, p47phox c phospho húa v truyn tớn hiu ti v lm cho phc h p67phox, p40phox c chuyn ti trờn mng t bo plasma Quỏ trỡnh phospho húa ca p47phox s lm thay i cu trỳc dn ti tng tỏc vi p22phox Quỏ trỡnh chuyn ti mng ca phc h p67phox, p40phox s lm cho p67phox tng tỏc vi Nox2 Cui cựng enzym GTP trờn Rac tng tỏc cựng vi Nox2 Phc h c hot ng v to superoxide (O2-) bng chuyn electron t NADPH cytoplasma thnh oxy húa ngoi t bo [14] choỏng viờm l mt cỏc nguyờn nhõn chớnh ca nhng ca t vong cỏc bnh nhõn cn chm súc c bit Cỏc trng hp ny tip tc gia tng rng khp c trờn th gii v Vit Nam Trong nhiờ u trng h p , quỏ trỡnh b viờm keo di m khụng c iờ u tri kip thi dõn n nhng bờ nh man tinh nguy hiờ m nh tim ma ch , tiờ u ng, thõ p khp Vit Nam cng l nc cú ngun ti nguyờn sinh vt rt phong phỳ, c bit v thc vt Theo thng kờ ca Vin Dc liu thỡ tớnh n nm 2000, nc ta cú gn 4000 loi thc vt, 22 loi to v trờn 33 loi ng vt c dựng lm thuc cỏc mc khỏc nhau, ú l cha k n nhiu loi to bin v ng vt bin cng cú th c dựng lm thuc[2] Cỏc s liu trờn õy cho thy tim nng to ln ca ngun dc liu Vit Nam cú th s dng cỏc nghiờn cu sng lc tim nh ng cht cú hot tớnh dc hc quý him, ú cú cỏc cht chng viờm mi cú hiu qu cao m khụng gõy cỏc phn ng ph Tuy vy, cú th núi cỏc nghiờn cu khoa hc mt cỏch cú h thng v chi tit v iu tra, khai thỏc, ỏnh giỏ tỏc dng v s dng cỏc cht hot tớnh sinh hc t ngun ti nguyờn sinh vt nc phỏt trin thnh cỏc sn phm thuc mi, phc v cho bo v v chm súc sc khe cng ng cũn rt hn ch Trong lnh vc nghiờn cu v ng dng cỏc cht khỏng viờm, cú th núi rng chỳng ta cha cú cỏc nghiờn cu sõu cng nh cha cú cỏc h thng v mụ hỡnh nghiờn cu hin i v quỏ trỡnh viờm v tỏc dng ca cht chng viờm õy chớnh l c s phỏt trin cỏc sn phm thuc cú th thng mi c trờn th trng Vit Nam v quc t Cỏc nghiờn cu v viờm c thc hin ch yu Vin Dc liu Trung ng, cỏc trng i hc Dc, trng i hc Y H Ni v Hc vin Quõn y 103 Cỏc nghiờn cu nhng c s ny mi ch dng mc to c mụ hỡnh gõy viờm thc nghim in vivo cụ iờ n nh a trin h bay trờn C th l cỏc thớ nghim c thc hin trờn chu t thụng qua s dng cht gõy viờm carrageenan to mụ hỡnh viờm cp di hỡnh thc gõy phự bn chõn chut v gõy viờm mng bng chut sau tiờm cht gõy viờm ny Vic gõy viờm tớnh s dng cht amiant to u ht c th chut Vic ỏnh giỏ tỏc dng khỏng viờm c thc hin bng cỏch o th tớch bn chõn, o th tớch dch viờm bng, o trng lng u ht tỏch ra, m s lng bch cu so vi mu i chng, t ú ỏnh giỏ tỏc dng khỏng viờm ca cỏc cht nghiờn cu Ngoi ra, vic ỏnh giỏ tỏc dng khỏng viờm cng ch yu c thc hin vi cỏc cao chit thụ ca thc vt in hỡnh nh cỏc nghiờn cu cua ng Diờm Hụ ng va cụ ng s vi cac dich chiờ t rong to bin Vit Nam [1] Nhúm nghiờn cu ó phỏt hin thy dch chit methanol ca hai loi to bin l Sargassum swartzii v Ulva reticulata thờ hiờ n hoa t tin h khang viờm cao m khụng gõy c v i ng vt th nghim [1] Hng lot cỏc nghiờn cu khỏc thi gian gõ n õy cung chi s du ng cac mụ hin h nghiờn cu anh gia tac du ng khỏng viờm ca cỏc dch chit thc vt nghiờn cu Vớ d nh H Võn Oanh v c ng s (2010) trờn cao lng ca r cõy bch ng n (Clerodendrum chinense) [4], Th Oanh v cng s (2010) trờn cao soi r ng (Sapium sebiferum) [3] hay Nguyn Th Bớch Hng (2009) trờn cao lng lỏ vng cỏch (Premna corymbosa) [5] Nh vy cú th núi rng, mụ hỡnh nghiờn cu viờm v ỏnh giỏ tỏc dng khỏng viờm Vit Nam hin l n gin, cụ iờ n , tụ n nhiờ u thi gian v thi u tin cõ y Nh võ y, chỳng ta cũn thiu cỏc nghiờn cu hin i vi cac mụ hỡnh gõy viờm t chun quc t hay nghiờn cu c ch khỏng viờm thụng qua ỏnh giỏ nh hng ca cht nghiờn cu lờn cỏc th th nh TLR, GC, mc gii phúng cỏc cht trung gian c tit quỏ trỡnh tin viờm v viờm, cỏc tớn hiu gõy viờm c hiu c bit, cho n chỳng ta cha cú mụ hỡnh sng lc in vitro cho phộp sng lc nhanh, chớnh xỏc v hiu qu cỏc cht khang viờm mi t cỏc ngun nguyờn liu khỏc CY NH NI V VAI TRề CA WEDELOLACTONE TRONG QU TRèNH CHNG VIấM 7.1 Cõy nh ni Thc vt l ngun vụ giỏ i vi nhng sn phm dc hc Trờn th gii, nhng thc vt cú tớnh dc hc c s dng truyn thng ó sn xut mt lot nhng hp cht cú rt nhiu tim nng cha bnh Vit Nam, lnh vc dc hc ó sn xut nhiu sn phm cú ngun gc t thc vt mang nhng dc tớnh mi Thc vt lm thuc ó gúp mt phn quan trng iu tr mt s bnh thụng qua nhng dc tớnh quớ giỏ [2] Cõy nh ni hay l cõy c mc, hn liờn tho (danh phỏp khoa hc: Eclipta alba Hassk, hoc Eclipta prostrata L.) l mt loi cõy thuc H Cỳc Cõy nh ni l cõy c, sng mt hay nhiu nm, mc ng hay mc bũ, cao 30-40cm Thõn mu lc hoc tớa, phỡnh lờn nhng mu, cú lụng cng Lỏ mc i, gn nh khụng cung, mep khớa rng rt nh; hai mt lỏ cú lụng Hoa hỡnh u, mu trng, mc k lỏ hoc ngn thõn, gm hoa cỏi ngoi v hoa lng tớnh gia Qu b di 3mm, cú 2-3 vy nh, cú cnh, hi dt Hỡnh 5: Cõy nh ni Theo ụng y cõy nh ni cú th cha can, thn õm h, cỏc chng huyt nhit, chng ho mỏu, nụn mỏu, i tin v tiu tin mỏu, chy mỏu cam, chy mỏu di da, bng huyt rong huyt, rõu túc sm bc, rng li sng au 7.2 Wedelolactone Cõy nh ni bao gm nhiu hp cht hu c ging nh wedelolactone (I) v demethylwedelolactone (II), polypeptide, polyacetylene, dn sut thiophene, steroid, triterpene and flavonoid [30] c bit, Wedelolactone c bit cú mt lot nhng hot tớnh sinh hc v c s dng iu tr bnh viờm gan, x gan, khỏng vi khun [30] Ngoi ra, Kobori v cng s ó chng minh c vai trũ ca Wedelolactone nh mt cht c ch IKK, mt kinase úng vai trũ quan trng hot ng ca yu t NF-B, bng cỏch tỏc ng n ng photphoryl húa IB [30] Bờn cnh ú, mt hp cht hu c t nhiờn bao gm Wedelolactone v mt s cht t cõy Wedelia canlendulacea ó c s dng y hc Nam M ging nh thuc khỏng li nc c ca rn [32] Trong y hc truyn thng ca Trung Quc, Wedelolactone c s dng iu tr nhng bnh v gan, cỏc bnh viờm nhim virut [30] Hn na, Wedelolactone cú kh nng gim s phỏt trin ca ung th Gn õy, mt s nghiờn cu ó cụng b Wedelolactone cú kh nng c ch s phỏt trin ca dũng t bo ung th tin lit tuyn, tuyn yờn, v hiu qu trờn dũng t bo MDA-MB-23 (t bo ung th vỳ) [30] Ngoi ra, mi õy, hot tớnh ca Wedelolactone tỏch chit t cõy nh ni ó c tin hnh ti Phũng Thớ nghim Trng im Cụng ngh Enzym v Proteini hc Khoa hc T nhiờn H Ni bc u ó cú nhng kt qu ỏng quan tõm v kh nng chng viờm õy l c s chỳng tụi tip tc nghiờn cu sõu hn na v kh nng phũng v cha bnh nhim trựng nng v choỏng nhim trựng ca hot cht tim nng trờn mụ hỡnh viờm in vitro thụng qua th th Dectin-1 v in vivo trờn chut b choỏng nhim khun tiờm zymosan mt cu t c hiu ca th th Dectin-1, gúp phn lm sỏng t vai trũ ca hot cht Wedelolactone vai trũ iu tr chng viờm Chng 2: I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 2.1 I TNG NGHIấN CU 2.1.1.ng vt thớ nghim Chut Swiss c mua t Vin v sinh dch t trung ng Trng lng chut t 1820gram 2.1.2 Húa cht Wedelolactone c cung cp t Phũng Thớ nghim Trng im Cụng ngh Enzym v Protein Cu t c hiu ca Dectin-1: zymosan (sigma, M), ELISA kit IL-6, IL-10, TNF, IL12p40 (BD Bioscience, M) Kit m t bo sng cht (CellTiter 96đ AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, M) Laminarin (cht c ch Dectin-1), Galactan (cht i chng dng, Sigma), cỏc húa cht mua ca hóng Sigma Thuc chng viờm Desamethasone (mt loi thuc s dng chng nhim trựng nng v choỏng nhim trựng, Sigma, M) 2.1.3 Thit b nghiờn cu T m CO2, T cy vụ trựng Naure, Mỏy c ELISA(bio-rad, M), T lnh: Kớnh hin vi soi ngc (Olympus, Nht), Mỏy khuy t nhit (c), kớnh hin vi laze hi t (LSM 510) v cỏc dng c thớ nghim thụng thng khỏc nh: a nuụi cy 24, 48, 96 ging (Corning, M), kim ung, kim tiờm, dao, kộo 2.2 PHNG PHP NGHIấN CU 2.2.1.Tỏch chit macrophage t ty xng ca chut 2.2.2.ỏnh giỏ hot tớnh c t ca Wedelolactone ti kh nng sng ca BMDM bng kớt m t bo sng cht 2.2.3 ỏnh giỏ kh nng sn xut cytokine bng ELISA Kit 2.2.4 Phõn tớch c ch ca Wedelolactone quỏ trỡnh to phn ng oxy húa 2.2.5 Gõy nhim trựng nng v choỏng nhim trựng chut bng tiờm zymosan 2.2.6 ỏnh giỏ hiu qu sng xút ca chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng chut bng Wedelolactone 2.2.7 ỏnh giỏ hiu qu c ch quỏ trỡnh sinh cytokine huyt ca Chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng bng tiờm Wedelolactone 2.2.8 ỏnh giỏ hiu qu Wedelolactone v Dexamethason iu tr chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng 2.2.9.Phõn tớch thng kờ Chng 3: KT QU V THO LUN Kh nng sng ca t bo khụng b nh hng bi Wedelolactone khng nh Wedelolactone cú gõy c t i vi t bo BMDM hay khụng, BMDM c chia u vo cỏc ging khỏc trờn a nuụi t bo 96 ging vi mt 1x 105 Cỏc BMDM ny c s lý vi Wedelolactone cỏc nng khỏc nh trờn hỡnh Sau ú, BMDM c cựng vi 10 l kit m t bo Kt qu c ch trờn Hỡnh 1, t l phn trm ca cỏc BMDMs khụng cú s khỏc bit gia BMDMs c s lý vi cỏc nng khỏc ca Wedelolactone sau 48 gi Kt qu ny, cho thy Wedelolactone khụng cú kh nng gõy c vi BMDM T L T BO SNG (%) 100 75 50 25 C 10 20 30 (g/ml ) Hỡnh 8: Wedelolactone khụng gõy c i vi t bo BMDM BMDMs c nuụi vi mt 1ì105 t bo/ ging Sau 3-4 ngy, cỏc t bo ny c s lý cựng vi Wedelolactone cỏc nng ln lt l 10, 20, 30 g/ml Cỏc t bo sng ó c o bng kit m t bo D liu ch s sai s ca ba thớ nghim c lp ỏnh giỏ kh nng zymosan kớch thớch t bo BMDM sinh cytokine xỏc nh vic kớch thớch quỏ trỡnh sinh cỏc cytokine tin viờm v khỏng viờm ca BMDM bng zymosan, BMDM sau ó c nuụi a 48 ging vi mt l 1x105 s c vi zymosan (100 àg/ml) cỏc thi gian khỏc nh trờn hỡnh Nh vy, zymosan (100àg/ml) kớch thớch BMDM, sinh cytokine TNF , IL 6, IL 12p40, IL-10 tng dn t mc 0h , 4h ,8h , 18h sau ú bt u gim T kt qu ny, ch rng thi gian Zymosan sinh Cytokine nhiu nht l sau 18 gi nng cytokine (pg/ml) 15000 nng cytokine (pg/ml) 15000 IL-6 TNF- 10000 10000 5000 5000 0 12000 18 48 (h) 10000 IL12p40 18 48 (h) IL-10 8000 8000 4000 4000 2000 18 48 (h) 18 48 (h) Hỡnh 9: Zymosan kớch thớch t bo BMDM sn xut cytokine tin viờm v khỏng viờm BMDMs t chut c vi zymosan 100 (àg/ml) Dch t bo c vi zymosan cỏc thi gian khỏc ln lt l 0, 4, 8, 18, 48 gi s c ỏnh giỏ i vi quỏ trỡnh sn xut cytokine bng ELISA Cỏc kt qu c biu hin sai s ý ngha bi thớ nghim c lp Wedelolactone c ch quỏ trỡnh sinh cytokine tin viờm BMDM c kớch thớch bi zymosan Wedelolactone cú kh nng lm gim st, chng ung th () Tuy nhiờn, vai trũ ca nú quỏ trỡnh truyn tớn hiu viờm gõy bi zymosan cha c chng minh ỏnh giỏ hiu qu Wedelolactone quỏ trỡnh ny, BMDM ó c vi cỏc nng khỏc ca Wedelolactone 45 phỳt Sau ú, BMDM c tip vi zymosan sau 18 gi T hỡnh 10 cho thy Wedelolactone ó c ch quỏ trỡnh sn xut cytokine tin viờm TNF, IL-6, IL12p40 Trỏi li, i vi protein khỏng viờm IL-10 thỡ Wedelolactone li khụng cú kh nng c ch T kt qu ny cho thy vi nng nng cytokine (pg/ml) nng cytokine (pg/ml) 15000 IL-6 12000 TNF- 10000 8000 5000 4000 Hỡnh 10: Wedelolactone c ch quỏ trỡnh sinh cytokine tin viờm BMDM DM 2.5 DM 2.5 10 20 àg/ml c kớch thớch bng zymosan W 10 20 àg/ml W zymosan zymosan 12000 IL-10 12000 IL-12p40 8000 8000 4000 4000 0 DM 2.5 W 10 20 àg/ml DM 2.5 10 20 àg/ml W zymosan zymosan zymosan Wedelolactone iu hũa quỏ trỡnh sinh cytokine tin viờm thụng qua th th Dectin-1 Th th Dectin-1 tham gia chớnh quỏ trỡnh nhn dng dch ban u ca nm thụng qua liờn kt glucan [59] Do ú, Wedelolactone ó c iu tra xem cú kh nng c ch quỏ trỡnh sn xut cytokine zymosan kớch thớch i vi mc ớch ny, BMDMs ó c cựng vi mt s nng tng dn ca laminarin, mt cht cú kh nng c ch quỏ trỡnh hot ng ca th th Dectin-1 [27], hoc polysaccharide galactan cỏc nng ging nh laminarin sau 45 phỳt Tip theo, cỏc t bo c cựng vi Wedelolactone (hỡnh 11A), Dex (hỡnh 11B) trc vi zymosan T bo cựng vi Laminarin xut hin quỏ trỡnh sinh cytokine ngc li vi t bo khụng s lý vi Laminarin hỡnh 11A Cỏc cytokine TNF-, and IL-6 in BMDMs ó tng dn theo nng ca Laminarin Trỏi li, cỏc t bo c s lý cựng vi polysaccharide galactan cho kt qu ging nh t bo c s lý vi Wedelolactone Ging nh kt qu Hinh 11A, cỏc kt qu trờn hỡnh 4B cng cho kt qu tng t Nhng kt qu ny gi ý rng th th Dectin-1 cú mt vai trũ c bn quỏ trỡnh Wedelolactone v Dex truyn i quỏ trỡnh c ch zymosan kớch thớch sinh cytokine tin viờm BMDMs A B 4800 4800 3600 3600 2400 2400 1200 1200 8000 8000 IL-6 6000 ** IL-6 6000 4000 4000 2000 2000 800 800 600 600 400 400 200 200 TNF- M C C IL-12p40 M C C lam gal W Dexa Hỡnh 11: Wedolactone hoc Dex iu hũa quỏ trinh ỏp ng viờm kớch thớch bng zymosan thụng qua th th dectin-1 Wedelolactone iu khin quỏ trỡnh sinh ROS zymosan kớch thớch thụng qua th th Dectin-1 Zymosan cú th kớch thớch quỏ trỡnh sn xut ROS i thc bo [16] Tuy nhiờn, vai trũ ca Wedelolactone quỏ trỡnh sinh ROS zymonsan kớch thớch BMDB cha ro iu tra quỏ trỡnh ny, BMDMs ó c cựng vi Laminarin hoc Galactan 60 phỳt trc vi Wedelolactone (20g/ml) hoc Dex (100nM) Sau ú, cỏc t bo ny c tip vi zymosan 30 phỳt Cỏc t bo ny tip tc c vi DHE theo nh phn phng phỏp Nh ch Hỡnh 12A, zymosan ó kớch thớch to ROS, nhiờn quỏ trỡnh sn xut ROS ó b c ch bi t bo c vi Wedelolactone nhng quỏ trỡnh ny b o ngc i vi t bo c vi Laminarin Tuy nhiờn, iu ny khụng xy vi t bo c vi galactan Trờn hỡnh 12B, kt qu tng t hỡnh 12A thay Wedelolactone bng Dex Nhng kt qu ny ch rng Wedelolactone ó iu hũa quỏ trỡnh sinh ROS zymosan kớch thớch BMDM thụng qua th th Dectin-1 A B Zym Zym Quỏ trỡnh sn xut ROS(O2-) Quỏ trỡnh sn xut ROS(O2) W Dexa *** lam+ gal+ lam+ gal+ W W Dexa Dexa Hỡnh 12: Wedelolactone hoc Dex c ch quỏ trỡnh sn sinh ROS c kớch thớch bi zymosan thụng qua Dectin-1 Wedelolactone bo v chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng gõy bi zymosan Zymosan kớch thớch quỏ trỡnh viờm cp tớnh v lm hng a c quan cỏc mụ hỡnh ng vt b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng [23,24] ỏnh giỏ hiu qu iu tr ca Wedelolactone chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng, chut ó c chia thnh nhúm khỏc (mi nhm 10 con) c tiờm vi Wedelolactone ln lt l 10 mg/kg, 20 mg/kg, 30 mg/kg trng lng c th v nhúm i chng khụng c tiờm Wedelolactone Sau 24 gi, cỏc nhúm chut ny s c tiờm zymosan (2 mg/g trng lng c th) Kh nng chut sng xút c tớnh sau ngy c tiờm vi zymosan Trờn hỡnh cho thy chut sau ngy nu khụng nhn c Wedelolactone ó cht 100% Tuy nhiờn, chut nhn c Wedelolactone cỏc nng khỏc thỡ kh nng sng xút ó tng dn nng Wedelolactone 20 mg/ml t l sng xút gn 40% cng gn ging nh t l chut sng xút vi Wedelolactone 30 mg/ml T kt qu ny, cho thy Wedelolactone cú th ci thin c quỏ trỡnh iu tr chut b nhim trựng nng v choỏng nhim khun ti nng 20 mg/ml C (n=10) Kh 100 nng sng 80 xút 60 (%) W= 10 mg/kg (n= 10) 40 P=0.0123* (%) C (n=10) W= 20 mg/ kg (n=10) Kh nng 100 sng 80 xút(%) 20 40 60 80 100 (h) C (n=10) W= 30 mg/ kg (n=10) 60 60 40 40 20 20 Kh nng 100 sng 80 xút 20 0 20 40 60 80 100 (h) 20 40 60 80 100 (h) Wedelolactone ó lm gim kh nng sn xut cytokine chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng IL-6 Nng 2000 TNF- Nng 4000 cytokine 1500 (pg/ml) cytokine 3000 (pg/ml) 2000 1000 1000 500 C C W C C W Zym Zym Hỡnh 14: Wedelolactone ó c ch quỏ trỡnh sinh cytokine tin viờm chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng Hiu qu ca Wedelolactone v Dexamethasone chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng A Kh nng sng xút 100 (%) C W(20mg/kg) Dex (1mg/kg) 80 60 40 20 0 20 B Nng 40 60 80 100 (h) Nng Cytokine 4000 TNF- cytokine (pg/ml)2000 (pg/ml) 3000 1500 2000 1000 1000 IL-6 500 C C Dex W Zym CC Dex W Zym Hỡnh 15: Hiu qu iu tr ca Wedelolactone cao hn so vi Dexamethasone KT LUN V KIN NGH KấT LUN Nghiờn cu ny ó chng minh c vai trũ ca Wedelolactone vi nng 20g/ml quỏ trỡnh khỏng viờm thụng qua th th Dectin-1: - c ch c quỏ trỡnh sinh cytokine tin viờm TNF, IL-6, IL12p40 - c ch quỏ trỡnh sinh gc oxy húa Quan trng hn, Wedelolactone vi nng l 20mg/kg trng lng c th cú th ci thin c s sng ca chut b nhim trựng nng v choỏng nhim trựng KIN NGH Tip tc nghiờn cu sõu hn c ch chng viờm bng th trờn cỏc i tng khỏc ngoi chut Xỏc nh thờm Wedelolactone cú phi l mt cu t ca th th Glucocorticoid hay khụng References TI LIU TING VIT ng Dim Hng, Hong Minh Hin, Nguyn Minh Thanh, Chõu Vn Minh, Nguyn Trng Thụng (2008) Nghiờn cu kh nng khỏng viờm t rong to bin Vit Nam Tp Hoỏ hc 46(5A): 81-90 Tt Li (2000) Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam NXB Y hc H Ni Th Oanh, Phm Thanh K, Nguyờn Thi Bich H ng , Nguyờn Tro ng Thụng , Phm Th Võn Anh (2010) Nghiờn cu tac du ng chụ ng viờm va bao vờ gan cua cao soi rng (Sapium sebiferum) trờn thc nghiờ m Tp Dc hc 50(411): 36-39 H Võn Oanh , Phm Xuõn Sinh , Nguyờn Thai An , Nguyờn Tro ng Thụng , Phm Th Võn Anh (2010) Nghiờn cu tac du ng chụ ng viờm cõ p cua cao long rờ ba ch ụ ng n (Clerodendrum Chinese var simplex (Mold) SL Chen) trờn thc nghiờ m Tp Dc hc 50(414): 20-23 Nguyờn Thi Bic h H ng , Phm Thanh K, Nguyờn Tro ng Thụng, Phm Th Võn Anh, Nguyờn Thi Hoa Hiờn (2009) Nghiờn cu tac du ng chụ ng viờm cua cao long la vng cỏch (Premna corymbosa Rotteneen) thc nghiờ m Tp Dc hc 48(389): 22-24 TI LIU TING ANH Ahn, J Y., Song, J Y., Yun, Y S., Jeong, G., Choi, I.S., et al (2006) Protection of Staphylococcus aureus infected septic mice by suppression of Early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan FEMS Immunology and Medical Microbiology 46: 187-197 Annane, D., Sebille, V., Bellissant, E., the Ger-Inf Study Group (2006) Effects of low dose corticosteroids in septic shock patients with or without early acute respiratory distress syndrome Crit Care Med 34: 22-30 Ariizumi, K., Shen, G.L., Shikano, S., Xu, S., Ritter, R., Kumamoto, T., Edelbaum, D., Morita, A., Bergstresser, P.R., Takashima, A (2000) Identification of a novel, dendritic cell-associated molecule, dectin-1, by subtractive cDNA cloning Journal of Biological Chemistry 275: 2015720167 Attele, A.S., Wu, J.A., Yuan, C.S (1999) Ginseng pharmacology: Multiple constituents and multiple actions Biochemical Pharmacology 58: 1685-1693 10 Babior, B.M (1999) NADPH oxidase: an update Blood 93:146476 11 Bailey, J.M (1991) New mechanisms for effects of anti-inflammatory glucocorticoids Biofactors 3: 97-102 12 Barnes, P.J., Karin, M (1997) Nuclear factor-kappaB: A pivotal transcription factor in chronic inflammatory disease The England new journal of medicine 336: 1066-1071 13 Bauer, S., Kirschning, C.J., Họcker, H., Redecke, V., Hausmann, S., Akira, S., Wagner, H., Lipford, G.B (2001) Human TLR9 confers responsiveness to bacterial DNA via species-specific CpG motif recognition Proc Natl Acad Sci 98: 92379242 14 Bedard, K., Krause, K-H (2007) The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology Physiol Rev 87: 245313 15 Blanquộ R, Meakin C, Millet S, Gardner CR (1998) Selective enhancement of LPS-induced serum TNF-alpha production by carrageenan pretreatment in mice General Pharmacology 31(2):301-6 16 Brown GD (2006) Dectin-1: a signaling non-TLR pattern-recognition receptor Nature 6: 33-43 17 Briegel, J., Kellermann, W., Forst, H., Haller, M., Bittl, M., Hoffmann, G.E., et al (1994) Low-dose hydrocortisone infusion attenuates the systemic inflammatory response syndrome The phospholipase A2 study group Clin Invest 72:/782-7 18 Boguski MS (2002) News and views comparative genomics: The mouse that roared Nature 420: 515-516 19 Brown, G.D., Gordon, S (2001) Immune recognition A new receptor for betaglucans Nature 413: 36-37 20 Brown, G.D (2006) Dectin-1: a signaling non-TLR pattern-recognition receptor Natrure 6: 33-43 21 Choi, K.T (2008) Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng C A Meyer Acta Pharmacol Sin 29: 11091118 22 Clark, A.R (2007) Anti-inflammatory functions of glucocorticoid-induced genes Molecular and Cellular Endocrinology 275: 79-97 23 Cuzzocrea, S., Di, Paola R., Mazzon, E., Patel, N.S., Genovese, T., Muia, C., Crisafulli, C., Caputi, A.P., et al Thiemermann, C., et al (2006) Erythropoietin reduces the development of nonseptic shock induced by zymosan in mice Critical Care Medicine 34: 1168-1177 24 Cuzzocrea, S., Filippelli, A., Zingarelli, B., Falciani, M., Caputi, A.P., Rossi, F., et al (1997) Role of nitric oxide in a nonseptic shock model induced by zymosan in the rat Shock 7: 351-357 25 Dang, P.M., Stensballe, A., Boussetta, T., Raad, H., Dewas, C., Kroviarski Y, Hayem G, Jensen ON, Gougerot-Pocidalo MA, El-Benna J (2006) A specific p47phox-serine phosphorylated by convergent MAPKs mediates neutrophil NADPH oxidase priming at inflammatory sites Journal of Clinical Investigation 116: 2033-2043 26 Donini, M., Zenaro, E., Tamassia, N., Dusi, S (2007) NADPH oxidase of human dendritic cells: role in Candida albicans killing and regulation by interferons, dectin-1 and CD206 European Journal of Immunology 37: 1194-203 27 Doyle, S., et al (2002) IRF3 mediates a TLR3/TLR4- specific antiviral gene program Immunity 17: 251263 28 El Benna, J., Faust, L.P., Babior, B.M (1994) The phosphorylation of the respiratory burst oxidase component p47phox during neutrophil activation Phosphorylation of sites recognized by protein kinase C and by prolinedirected kinases Journal of Biological Chemistry 269: 23431-6 29 Goldstein SA, Shemano I, Daweo R, Betler JM (1967) Cotton pellet granuloma pouch method for evaluation anti-inflammatory activity Arc International Pharmcodynamic Therapy 165: 294-301 30 Kobori M (2004) Wedelolactone suppresses LPS-induced caspase-11 expression by directly inhibiting the IKK complex Cell Death and Differentiation 11: 123130 31 Vane J and Botting R (1987) Inflammation and the mechanism of action of anti-inflammatory drugs The FASEB Journal, 1(2): 89-96 32 Wagner H., et al (1986) Coumestans as the Main Active Principles of the Liver Drugs Eclipta alba and Wedelia calendulacea Planta Med 5: 370-4 Winter CA, Risely EA, Nuss GW (1962) Carregeenan induced edema in hind 33 paw of the rat as assay for anti-inflammatory drugs Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine 111: 544547