Acinetobacter baumannii là một trong những tác nhân gây nhiễm khuẩn bệnh viện nguy hiểm hàng đầu hiện nay. Đặc biệt, các chủng A. baumannii sở hữu một số nhóm gene blaOXA, có khả năng biểu hiện tính đa kháng kháng sinh, nhất là đối với carbapenem. Mục đích: Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình Taq-Man real-time PCR phát hiện một số nhóm gene blaOXA-23, blaOXA-51 và blaOXA-58 điển hình ở A. baumannii.
Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 77 XÂY DỰNG QUY TRÌNH TAQ-MAN REAL-TIME PCR PHÁT HIỆN MỘT SỐ NHĨM GENE blaOXA Ở ACINETOBACTER BAUMANNII Nguyễn Tuấn Anh1*, Huỳnh Minh Tuấn2, Nguyễn Kim Huyền2, Nguyễn Vũ Hoàng Yến2, Trịnh Thị Thoa2, Huỳnh Kim Ngân2, Võ Thị Tuyết Nga2, Nguyễn Văn Vĩnh Châu3, Hồ Huỳnh Thùy Dương14 Công ty TNHH Cơng nghệ Sinh học Khoa Thương Khoa Kiểm sốt Nhiễm khuẩn, Bệnh viện Đại học Y Dược Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Bộ môn Di truyền, Đại học Khoa học Tự nhiên TP Hồ Chí Minh * Nguyễn Tuấn Anh, Email: ntanhbio@gmail.com TÓM TẮT Tổng quan: Acinetobacter baumannii tác nhân gây nhiễm khuẩn bệnh viện nguy hiểm hàng đầu Đặc biệt, chủng A baumannii sở hữu số nhóm gene bla OXA, có khả biểu tính đa kháng kháng sinh, carbapenem Mục đích: Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình Taq-Man real-time PCR phát số nhóm gene blaOXA-23, blaOXA-51 blaOXA-58 điển hình A baumannii Phương pháp: Quy trình sử dụng mẫu dò Taq-Man thiết kế đặc trưng cho nhóm gene với kênh màu khác (Cy5, FAM, Texas Red, HEX) để phát nhóm gene bla OXA-23, blaOXA-51, blaOXA-58 gene 16S rRNA tương ứng phản ứng Phản ứng multiplex real-time PCR tối ưu để đạt hiệu suất nhân tốt cho tất gene đích cần phát Kết quả: Kết cho thấy quy trình có khả phát xác gene blaOXA-23, bla OXA-51 blaOXA-58 đặc trưng A baumannii với độ nhạy (4 sao/phản ứng) độ đặc hiệu cao, khơng cho tín hiệu dương tính với DNA nhiều loài vi khuẩn thường thấy bệnh viện Kết luận: Chúng tơi xây dựng thành cơng quy trình Taq-Man real-time PCR phát số nhóm gene blaOXA-23, blaOXA-51 blaOXA-58 A baumannii Quy trình sử dụng để đồng thời phát nhanh chủng A baumannii số nhóm gene kháng kháng sinh chúng Quy trình ứng dụng để nghiên cứu dịch tễ học phân tử diện số nhóm gene blaOXA phổ biến A baumannii Từ khóa: A baumannii, β-lactamase, carbapenemase, OXA, real-time PCR, Taq-Man ABSTRACT DEVELOPMENT OF A TAQ-MAN REAL-TIME PCR ASSAY FOR THE DETECTION OF SEVERAL blaOXA GENES IN ACINETOBACTER BAUMANNII Nguyen Tuan Anh*, Huynh Minh Tuan*, Nguyen Kim Huyen, Nguyen Vu Hoang Yen, Trinh Thi Thoa, Huynh Kim Ngan, Vo Thi Tuyet Nga, Nguyen Van Vinh Chau, Ho Huynh Thuy Duong Backgrounds: Acinetobacter baumannii currently is one of the most leading and dangerous factors causing nosocomial infections In addition, A baumannii harbouring several blaOXA genes could express the ability of multidrug resistance, especially with carbapenem Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 78 Objectives: To set up a Taq-Man real-time PCR protocol for the detection of several typical bla OXA genes in A baumannii, including blaOXA-23, blaOXA-51 and blaOXA-58 genes Methods: The process using Taq-Man probes was designed specifically to individual genes with distinguish flourophores (Cy5, FAM, Texas Red, HEX) to detect blaOXA-23, blaOXA-51, bla OXA-58 and 16S rRNA correspondingly in one reaction The multiplex Taq-Man real-time PCR was optimized to get the highest amplification efficiency for all targeted genes Results: The results showed that the protocol could detect precisely blaOXA-23, blaOXA-51 and bla OXA-58 genes specific to A baumannii with high sensitivity (4 copies/reaction) and specificity, not reacting with DNA of many common bacteria in hospital environment Conclusions: We built up a Taq-Man real-time PCR protocol successfully for the detection of bla OXA-23, blaOXA-51 and blaOXA-58 genes in A baumannii The protocol can also be used to identify A baumannii rapidly and their antimicrobial resistant blaOXA genes Potentially, the protocol might become a tool to study molecular epidemiology of blaOXA genes popularly in A baumannii Keywords: A baumannii, β-lactamase, carbapenemase, OXA, real-time PCR, Taq-Man TỔNG QUAN Acinetobacter baumannii (A baumannii) có cấu trúc cầu trực khuẩn Gram âm, nguồn gốc từ thiên nhiên (đất, nước), hiếu khí tuyệt đối dễ mọc môi trường thông thường Khuẩn lạc nhẵn, màu xám trắng, nhầy, đường kính khoảng từ 1,5 - mm A baumannii có khả thích ứng với điều kiện mơi trường sống đa dạng, tồn lâu môi trường bệnh viện, đặc biệt dụng cụ y tế Nhờ khả tạo màng sinh học (biofilm) với tính bám dính cao, vi khuẩn A baumannii gắn chặt vào bề mặt dụng cụ, môi trường, da người khỏe mạnh, đặc biệt nhân viên chăm sóc sức khỏe, tạo điều kiện cho vi khuẩn dễ dàng lây lan tồn lâu dài, thu nhận, tích lũy nhiều gene kháng kháng sinh từ trở thành tác nhân đa kháng, gây khó khăn điều trị kiễm sốt nhiễm khuẩn Có nhiều lồi Acinetobacter tất chúng có khả gây bệnh cho người, A baumannii chiếm 80% trường hợp bị nhiễm chủng thuộc Acinetobacter Sự nguy hiểm A baumannii chỗ có khả kháng lại tất loại kháng sinh Và thế, đặc biệt nguy hiểm cho bệnh nhân nằm viện lâu ngày, phải dùng biện pháp can thiệp ống thở hay kim truyền liên tục, dùng nhiều kháng sinh bị suy giảm miễn dịch A baumannii trở thành loại vi khuẩn siêu kháng thuốc, lên tác nhân hàng đầu gây nhiễm trùng bệnh viện giới [7] Carbapenem thường sử dụng để điều trị nhiễm khuẩn A baumannii, đặc biệt chủng kháng thuốc, thường khơng cịn hiệu trỗi dậy chủng đa kháng (multidrug resistance – MDR) đa kháng mở rộng (extensive drug resistance - XDR) [9] Nhiều chế kháng liên quan đến tính kháng carbapenem A baumannii sản xuất carbapenemase, bất hoạt kháng sinh, protein màng bị biến đổi, tăng biểu bơm màng hay kênh màng / thay đổi tính thấm màng Tính kháng với carbapenem A baumannii liên quan chủ yếu tới biểu β-lactamase / carbapenemase; chế khác đóng vai trị thứ yếu [8] Bên cạnh đó, carbapenemase phổ biến A baumannii β-lactamase mã hóa blaOXA [10] Nhóm gene oxacilinase (blaOXA) nhóm gene kháng kháng sinh β-lactam A baumannii có khả giúp vi khuẩn kháng với nhiều loại kháng sinh khác nhau, đặc biệt carbapenem [5] Nhóm gene thường mã hóa plasmid giúp tính kháng lan truyền chủng vi khuẩn Sản phẩm nhóm gene enzyme oxacilinase, có khả thủy phân Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 carbapenem [6] Nhóm gene chia thành nhóm phụ, có nhóm phát A baumaniii blaOXA-23, bla OXA-24, blaOXA-51 blaOXA-58 [2] Dịch tễ học phân tử cho thấy nhóm gene bla OXA phổ biến tùy khu vực khác giới [1, 8, 10] 79 Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình Taq-Man real-time PCR phát đồng thời gene blaOXA-23, -51, -58 phản ứng, giúp nhanh chóng dễ dàng cơng tác nghiên cứu dịch tễ học phân tử gene Từ đó, có sở xác định chủng nguy hiểm, nguy cao gây nhiễm trùng bệnh viện VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu Vi khuẩn A baumannii chuẩn (ATCC 19606) mang gene blaOXA-51 mẫu vi khuẩn A baumannii phân lập khoa Kiểm soát nhiễm khuẩn bệnh viện Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh thời gian từ tháng 01/2012 đến tháng 12/2013 Chọn lựa thiết kế mồi Các cặp mồi/mẫu dị đặc hiệu cho nhóm gene blaOXA-23, -51, -58 A baumannii cặp mồi/mẫu dò đặc hiệu cho gene 16S rRNA (Acinetobacter spp.) làm chứng nội phản ứng chọn từ số nghiên cứu trước [3, 4] thiết kế sau O23-P: Cy5 – TTGCGCGACGTATCGGTCTTGATC BHQ2; O58-P: Texas Red – TTTACTTTGGGCGAAGCCATGCAAG BHQ2 Mồi mẫu dị đặt tổng hợp cơng ty IDT (Integrated DNA Technologies, USA) Phương pháp tách chiết DNA A baumannii Khuẩn lạc đặc trưng A baumannii thu nhận tăng sinh môi trường LB điều kiện 370C 24 Sau kết thúc tăng sinh, DNA gene A baumannii tách chiết theo nguyên tắc hấp phụ đặc hiệu lên pha rắn (màng silica) kit tách chiết “DNA column-based extraction kit” (Khoa Thương) Tất thao tác thực theo hướng dẫn kit nhà sản xuất Thành phần phản ứng multiplex Taq-Man real-time PCR Hỗn hợp phản ứng multiplex Taq-Man real-time PCR tối ưu có thành phần gồm1X buffer, mM MgCl2, 400 nM dNTPs 2X hTaq DNA polymerase (Solgent), 200 nM cho cặp mồi O23-F/R, O51-F/R O58-F/R, 100 nM cho mẫu dò O23-P, O51-P O58-P, 400 nM cho cặp mồi 16S-F/R 200 nM cho mẫu dị 16S-P (IDT), với µl DNA tổng thể tích 25µl Chu trình nhiệt cho phản ứng multiplex Taq-Man real-time PCR: 15 phút – 95oC 30 chu kỳ lập lại gồm 10 giây - 95oC 15 giây - 60oC Tín hiệu thu nhận với bốn màu huỳnh quang đặc trưng FAM (510-530 nm), HEX (560-580 nm), Texas Red (597-616 nm) Cy5 (646-669 nm) Quy trình thực dịng máy luân nhiệt Stratagene Mx3000P Mx3005P (Agilent) Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 80 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Tối ưu điều kiện phản ứng monoplex real-time PCR Từng mồi/mẫu dò tối ưu hiệu nhân với phản ứng monoplex realtime PCR mẫu DNA tổng hợp nhân tạo đoạn gene tương ứng với nồng độ nhau: 2x102, 2x104, 2x106 2x108 sao/µl Các thơng số nhiệt độ lai (Ta) mồi/mẫu dò, thành phần phản ứng tối ưu Điều kiện để phản ứng realtime PCR tối ưu hiệu suất phản ứng (E) từ 90% - 105% hệ số tương quan (R2) > 0,980 Bảng Giá trị Ct tối ưu phản ứng monoplex real-time PCR [DNA]* 4x102 4x104 4x106 4x108 E R2 OXA-23 OXA-51 OXA-58 16S rRNA 31,8±0,4 32,6±0,9 33,8±0,5 34,8±0,3 24,9±0,1 26,6±0,0 27,2±0,2 28,6±0,4 18,1±0,2 18,7±0,2 20,4±0,1 20,7±0,4 10,3±0,1 11,3±0,1 12,2±0,1 13,7±0,0 90,8 90,2 90,3 90,0 0,998 0,995 0,997 0,997 * Nồng độ mẫu DNA: sao/phản ứng Kết (Bảng 1) cho thấy phản ứng monoplex real-time PCR đạt điều kiện tối ưu theo tiêu chí (E = 90% - 105% R2 ≥ 0,980) Đây điều kiện chuẩn để so sánh phản ứng multiplex real-time PCR tối ưu sau Tối ưu điều kiện phản ứng multiplex real-time PCR Để cho thuận tiện việc phát đồng thời gene blaOXA A baumannii vi khuẩn khác lồi Acinetobacter spp., chúng tơi kết hợp mồi/mẫu dò phát blaOXA-23, blaOXA-51, blaOXA-58 16S rRNA phản ứng Các thông số nồng độ enzyme, nồng độ MgCl2 nồng độ mồi/mẫu dò tối ưu mẫu DNA tổng hợp nhân tạo Bảng Giá trị Ct tối ưu phản ứng multiplex real-time PCR [DNA]* 4x102 4x104 4x106 4x108 E R2 OXA-23 OXA-51 OXA-58 16S rRNA 33,6±0,6 33,8±0,0 33,7±0,6 35,4±1,3 27,7±0,6 27,8±1,0 29,3±0,4 28,1±0,6 21,0±0,1 20,3±0,7 20,0±0,6 20,8±1,6 12,2±0,2 12,8±0,9 13,3±0,4 14,2±0,8 90,5 90,3 90,7 90,8 0,991 0,991 0,981 0,984 * Nồng độ mẫu DNA: sao/phản ứng Kết (Bảng 2) cho thấy phản ứng multiplexreal-time PCR đạt điều kiện tối ưu theo tiêu chí phản ứng real-time PCR Hơn nữa, giá trị Ct nồng độ mẫu phản ứng multiplex real-time PCR gần tương đương với phản ứng monoplex real- time PCR (Bảng 1) Vì thế, phản ứng multiplex real-time PCR cho tối ưu thành công để phát đồng thời gene bla OXA A baumannii vi khuẩn Acinetobacterspp khác phản ứng Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 81 Đánh giá quy trình multiplex real-time PCR Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu phản ứng multiplex real-time PCR phát A baumannii vừa tối ưu xác định cách thực phản ứng mẫu DNA có nguồn gốc từ chủng A baumannii (ATCC 19606) số chủng A baumannii lâm sàng, đồng thời với DNA từ chủng vi khuẩn khác như: Campylobacter coli, Campylobacter jejuni, Clostridium botulinum, E coli (ATCC 25922, 35218, 35401), Listeria monocytogenes (ATCC 19115), Salmonella typhimurium (ATCC 29946), Salmonella para typhimurium, Staphylococcus aureus (ATCC 12600), Shigella boydii (ATCC 8700), Shigella flexneri (ATCC 15391), Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus (ATCC 17802) Kết cho thấy có DNA chủng A baumannii cho tín hiệu dương tính, mẫu DNA vi khuẩn khác khơng cho tín hiệu dương tính với với màu huỳnh quang quy trình Chứng tỏ quy trình xây dựng đặc hiệu với gene blaOXA A baumannii Một số sản phẩm PCR gene blaOXA tương ứng giải trình tự Kết hồn tồn phù hợp với trình tự gene blaOXA khác công bố ngân hàng liệu NCBI Độ nhạy Để đánh giá độ nhạy phản ứng multiplex real-time PCR, DNA mẫu vi khuẩn A baumannii TN19 (1,78x106 sao/μl) mang gene blaOXA-51 blaOXA-58 mẫu A baumannii YD132 (2,76x106 sao/μl) TN19* 3,56x10-1 3,56x100 3,56x101 3,56x102 3,56x103 3,56x104 3,56x105 3,56x106 E R2 mang gene blaOXA-23 blaOXA-51 pha loãng bậc 10 thành nồng độ nhỏ Thành phần chương trình nhiệt tối ưu phản ứng multiplex real-time PCR sử dụng Bảng Giá trị Ct độ nhạy phản ứng multiplex real-time PCR blaOXAblaOXAblaOXA16S 16S YD132* 51 58 rRNA 23 51 rRNA 5,52x10N/A N/A N/A N/A N/A N/A blaOXA- 36,6±0,9 34,4±0,8 30,6±0,3 26,9±0,4 23,0±0,2 19,3±0,2 16,0±0,0 90,8 0,995 36,1±0,4 37,1±0,2 5,52x100 34,4±0,3 34,5±0,5 35,1±0,1 5,52x101 31,4±0,5 30,6±0,6 31,4±0,3 5,52x102 27,6±0,4 26,9±0,2 28,1±0,2 5,52x103 23,7±0,3 22,9±0,6 24,6±0,2 5,52x104 20,0±0,6 19,4±0,3 19,7±0,0 5,52x105 16,6±0,2 15,8±0,2 16,5±0,0 5,52x106 13,3±0,5 90,4 90,0 E 0,997 0,992 0,992 R 90,2 * Đơn vị nồng độ mẫu: sao/phản ứng Kết (Bảng 3) cho thấy độ nhạy đạt quy trình multiplex real-time PCR phát gene OXA A Baumannii khoảng sao/phản ứng 34,2±0,2 31,6±0,3 28,3±1,1 25,8±0,8 21,8±0,2 18,2±0,2 15,4±0,7 0,99 104,2 35,4±0,1 34,4±0,4 31,3±0,1 26,8±0,8 22,7±1,0 19,2±0,8 15,2±1,3 0,997 91,0 Tổng hợp kết khảo sát mẫu DNA tổng hợp nhân tạo mẫu DNA gene số vi khuẩn A baumannii cho thấy khoảng động học phản ứng multiplex Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 82 real-time PCR ổn định từ 4x100 – 4x108 sao/phản ứng Độ ổn định Quy trình xác định tính ổn định cách thực lập lại ba lần nồng độ mẫu DNA tổng hợp nhân tạo, ba thời điểm khác nhau, cách tuần, có nồng độ 2x101 2x108 sao/µl Bảng 4.Giá trị Ct độ ổn định phản ứng multiplex real-time PCR Thời điểm [DNA]* blaOXA-23 blaOXA-51 blaOXA-58 16S rRNA 4x108 12,9±0,1 13,0±0,2 13,8±0,1 14,2±0,2 4x10 35,4±0,7 36,1±0,9 35,8±0,3 36,5±0,5 4x108 13,1±1,0 13,5±0,6 14,0±0,0 15,4±0,5 4x10 34,7±0,9 34,7±1,5 35,0±1,9 35,4±1,2 4x108 14,0±0,8 14,1±0,3 15,6±0,8 15,2±1,2 4x10 34,9±0,2 35,8±0,9 37,0±0,4 34,6±0,1 * Nồng độ mẫu DNA: sao/phản ứng Kết (Bảng 4) cho thấy quy trình ổn định qua lần lập lại thời điểm khác mẫu DNA tổng hợp nhân tạo có nồng độ cao nồng độ thấp Thử nghiệm quy trình multiplex real-time PCR Quy trình multiplex real-time PCR áp dụng thử nghiệm 117 mẫu vi khuẩn thu thập bệnh viện Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Sản phẩm PCR số mẫu DNA có tín hiệu dương tính gene blaOXA 16S rRNA giải trình tự để kiểm chứng Bảng Kết phát gene blaOXA 16S rRNA A baumannii Acinetobacter spp phương pháp multiplex real-time PCR Gen Kết Dương tính Âm tính Tổng blaOXA-23 n 39 26 65 % 60 40 100 blaOXA-51 blaOXA-58 n 46 19 65 n 62 65 Kết (Bảng 5) cho thấy mẫu vi khuẩn thu thập được, có 65 (55,6%) chủng xác định Acinetobacter spp qua diện gene 16S rRNA Trong chủng Acinetobacter spp này, có 46 (70,8%), 39 (60%) (4,6%) chủng mang gene blaOXA-51, blaOXA-23 % 70,8 29,2 100 % 4,6 95,4 100 16S rRNA n % 65 55,6 52 44,4 117 100 OXA-58 Các chủng mang gene blaOXA-51 cho chủng A baumannii mà nghiên cứu tìm kiếm Tất cả chủng A baumannii đồng thời mang thêm gene blaOXA-23 (39/46), không chủng mang blaOXA-58 (0/46) Số chủng mang gene bla OXA-58 thuộc vào nhóm khơng có bla Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 OXA-51, xếp vào nhóm Acinetobacter spp Kết giải trình tự xác nhận tính đặc hiệu sản phẩm nhân tương ứng xác cho gene phát quy trình multiplex real-time PCR bla Hiện nay, phương pháp phát A baumannii chủ yếu phương pháp ni cấy truyền thống, A baumannii dễ nuôi cấy Tuy nhiên, nhược điểm phương pháp thời gian để phân lập, định danh vi khuẩn Hình thái (que ngắn, nhầy) đặc tính khó tẩy màu làm dễ bị định danh nhầm với vi khuẩn Gram (-) (+) hình cầu khác Hơn nữa, hệ vi khuẩn A Calcoaceticus - A baumannii lại giống với Enterobacteriaceae Ngoài ra, để định danh xác A baumannii, phương pháp lai DNA-DNA phương pháp tiêu chuẩn Tuy nhiên, phương pháp tốn cơng lao động khó ứng dụng thường qui chẩn đoán lâm sàng Một số phương pháp sinh học phân tử phát triển sử dụng để định danh xác chủng Acinetobacter phân tích phân đoạn cắt giới hạn gen 16S rRNA (ARDRA), phương pháp phân tích đa hình phân đoạn gen nhân bản, ribotyping, phân tích trình tự vùng spacer gen 16S-23S rRNA Tất phương pháp thời gian, sử dụng chủ yếu phịng thí nghiệm Những nghiên cứu gần cho thấy khả phát nhanh A baumannii real-time PCR dựa nhóm gen blaOXA-51, gen thể vi khuẩn Ưu điểm phương pháp đỡ tốn thời gian thực quy trình kỹ thuật, khả thực nhiều mẫu lúc, hạn chế ngoại nhiễm độ nhạy độ đặc hiệu cao Hơn nữa, quan điểm lâm sàng kiểm soát nhiễm khuẩn, điều cần thiết phải phát phân biệt A baumannii lồi Acinetobacter khác, khơng phải A baumannii lồi Acinetobacter khác đối tượng quan tâm cơng tác kiểm sốt nhiễm khuẩn thường nhạy với nhiều loại kháng sinh việc nhiễm khuẩn gây loài vi khuẩn thường không đáng lo ngại Trên quan điểm nghiên cứu, việc xác định xác A baumannii giúp hiểu rõ dịch tễ học lâm 83 sàng chế sinh bệnh vi khuẩn gây Hệ enzyme β-lactamase tạo cách đặn tồn tự nhiên A baumannii thường bao gồm AmpC oxacillinase có hoạt tính carbapenemase Cùng với enzyme tự nhiên này, vài βlactamase thu nhận từ xác định có hoạt tính carbarpenemase, enzyme thuộc lớp B (Metallo β-lactamase) lớp D (OXA β-lactamase) theo hệ thống phân loại Ambler, yếu tố quan trọng giúp A baumannii có khả kháng lại carbapenem (imipenem, meropenem, ertapenem, doripenem) Mặc dù Metallo β-lactamse có hoạt tính carbapenemase mạnh cho khơng thường xun diện A.baumannii, cịn oxacillinase có khả phân giải carbapenem, lại diện A baumannii Carbapenemase phổ biến A.baumannii nhóm OXA β-lactamase Hiện nay, bốn nhóm OXA β-lactamase đươc xác định A baumannii là: blaOXA-23, blaOXA24, blaOXA-51 blaOXA-58 Trong đó, bla OXA-51 enzyme mã hóa nhiễm sắc thể đặc trưng cho A baumannii; bla OXA-23, blaOXA-24 blaOXA-58 enzyme mã hóa plasmid, nguyên nhân giúp chúng lan truyền mạnh cộng đồng Nghiên cứu dựa đặc tính sở hữu gene blaOXA-51 để định danh xác A baumannii đồng thời phát số gene blaOXA điển hình khác A baumannii blaOXA-23 blaOXA-58 nhằm đánh giá tính phổ biến gene blaOXA quần thể chủng vi khuẩn A baumannii thu thập Qui trình tạo nghiên cứu khơng bao gồm blaOXA-24 tác giả thực nghiên cứu khảo sát trước diện gene; kết cho thấy không phát gene 252 chủng vi khuẩn Acinetobacter spp khảo sát (kết đây) Kết khảo sát phổ biến gene blaOXA nghiên cứu cho thấy diện blaOXA-51 / A baumannnii nhóm vi khuẩn Acinetobacter spp / 16S rRNA+ chiếm 70,8% Kết phù hợp Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 tương nhận định “A baumannii chiếm 80% trường hợp bị nhiễm chủng thuộc Acinetobacter” Hơn nữa, tất chủng A baumannnii mang gene blaOXA23 Điều xác định tính phổ biến gene 84 quần thể vi khuẩn A baumannnii thu thập Các hướng nghiên cứu cần tiến hành để đánh giá vai trị gene tính đa kháng sinh A baumannii KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Quy trình multiplex real-time PCR xây dựng cho phép phát loài vi khuẩn Acinetobacter spp phát xác A baumannii dựa gene blaOXA-51, đồng thời xác định xem chủng vi khuẩn có mang thêm gene blaOXA khác, phổ biến A baumannii hay không, bla OXA-23 blaOXA-58 TÀI LIỆU THAM KHẢO HIGGINS, P.G., DAMMHAYN, C., HACKEL, M., SEIFERT, H., (2010) Global spread of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii J Antimicrob Chemother 65 (2) 233-238 MA, Z., ZHOU, L.Q., WANG, H., LUO, L.P., (2015) Investigation on the genomic diversity of OXA from isolated Acinetobacter baumannii International Journal of Clinical and Experimental Medicine (3) 4429-4432 NGUYỄN, T.A., HUỲNH, M.T., NGUYỄN, V.V.C., HỒ, H.T.D., (2014) Xây dựng qui trình EvaGreen real-time PCR phát gene blaOXA Acinetobacter baumannii Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh 18 (5) 197-201 NGUYỄN, T.A., ĐÀO, M.Y., HUỲNH, T.T.H., HỒ, H.T.D., (2015) Xây dựng đánh giá quy trình phát Acinetobacter baumannii real-time PCR Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh 19 (5) 194-199 NIGRO, S., HALL, R.M., (2015) Distribution of the blaOXA-23-containing transposons Tn2006 and Tn2008 in Autralian carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii isolates Journal of Antimicobial Chemotherapy Research letter NORDMANN, P., POIREL, L., (2002) Emerging carbapenemases in Gram-negative aerobes Clin Microbiol Infect (6) 321-31 OIKONOMOU, O., SARROU, S., PAPAGIANNITSIS, C.C, GEORGIADOU, S., MANTZARLIS, K., ZAKYNTHINOS, E., DALEKOS, G.N., PETINAKI, E., (2015) Rapid dissemination of colistin and carbapenem resistant Acinetobacter baumannii in central Greece: mechanisms of resistance, molecular identification and epidemiological data BMC infectious diseases 15 (1) 559 POIREL, L., NORDMANN, P., (2006) Carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii: mechanisms and epidemiology Clin Microbiol Infect 12 (9) 826-836 PEREZ, F., HUJER, A.M., HUJER, K.M., DECKER, B.K., RATHER, P.N., BONOMO, R.A., (2007) Global challenge of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Antimicrob Agents Chemother 51 (1) 3471-84 10 ZARRILLI, R., GIANNOULI, M., TOMASONE, F., TRIASSI, M., TSAKRIS, A., (2009) Carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii: the molecular epidemic features of an emerging problem in health care facilities J Infect Dev Ctries (5) 335341 ... vai trò gene tính đa kháng sinh A baumannii KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Quy trình multiplex real-time PCR xây dựng cho phép phát loài vi khuẩn Acinetobacter spp phát xác A baumannii dựa gene blaOXA- 51,... baumannii cho tín hiệu dương tính, mẫu DNA vi khuẩn khác khơng cho tín hiệu dương tính với với màu huỳnh quang quy trình Chứng tỏ quy trình xây dựng đặc hiệu với gene blaOXA A baumannii Một số. .. phẩm PCR số mẫu DNA có tín hiệu dương tính gene blaOXA 16S rRNA giải trình tự để kiểm chứng Bảng Kết phát gene blaOXA 16S rRNA A baumannii Acinetobacter spp phương pháp multiplex real-time PCR