KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 10 pdf

... trình) 101 1.6. Sequencing DNA với máy luân nhiệt và DNA-Sequencer tự động 103 2. Phương pháp Maxam-Gilbert 106 2.1. Đánh dấu hóa học 107 2.2. Phân giải bằng piperidine và điện di trong gel 108 3. ... X. Phân tích điều tiết phiên mã nhờ thử nghiệm CAT (CAT assay) 811. Thí nghiệm chính: di nạp gen vào tế bào eukaryota 812. CAT assay 82Chương 3. Kỹ thuật phân tích xác nhận phân tử 84I. Kỹ ... và RNA) 241. Phương pháp quang học 242. Phương pháp định lượng bằng điện di 243. Phương pháp nhỏ giọt định lượng acid nucleic 25Chương 2. Kỹ thuật cơ bản trong tái tổ hợp DNA 26I. Điều chế...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 6 pdf

... gel trong nước 5 phút, khi đó thay nước một số lần.6) Ngâm gel trong dịch chứa NaOH 50mM và NaCl 10mM trong 10 phút.7) Ngâm gel 10 phút trong Tris-HCl 0,1M pH 7,5.8) Ngâm gel 20 phút trong ... đủ (qs) (ml) qs 100 qs 100 qs 100 qs 100 qs 100 *Dịch polyacrylamide 40% được chế bằng cách trộn 190 g acrylamide với 10 g N,N'-methylene-bis-acrylamide (bis-acrylamide) trong 500 ml nước, ... dung dịch Denhardt 10 , 1ml SDS 10% , 0,5 ml DNA cá hồi đã biến tính 1 mg/ml và mẫu dò đánh dấu bằng 32P đã biến tính 1 - 3 10 7 cpm, tổng 10 ml.Dung dịch Denhardt 10 chứa 2% BSA fraction...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 1 pdf

... HỒNG SƠNGiáo trìnhKỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬNhà xuất bản Đại học Huế2006II. Điện di Phương pháp điện di trong gel (keo) thường được sử dụng để phân li (phân đoạn) DNA, RNA, ... thực hiện trong sinh học phân tử. Nhưng quan trọng hơn vẫn là thông qua các bước kỹ thuật cụ thể giúp người học nắm được những điểm cơ bản về nghiên cứu phát triển sinh học phân tử được các nhà ... quá trình sinh học vi mô đã trở thành cách thức chủ yếu để loài người nhận thức thế giới sinh học. Sinh học phân tử phát triển trên cơ sở kiến thức đa ngành. Có thể nói Sinh học phân tử là kết...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 9 potx

... biết.Có thể nói đây không chỉ là một kỹ thuật mà là một chiến lược tổng quát bao gồm việc vận dụng nhiều kỹ thuật cơ bản trong sinh học phân tử nhằm phân lập ra được đoạn DNA nằm kề đoạn DNA ... Phương pháp tạo thể đột biến nhân tạoĐể phân tích và xác định các miền cơ năng trong phân tử DNA như promoter, enhancer cũng như các miền cơ năng trong phân tử protein (trung tâm hoạt động của ... enzyme B; 7) Điện di phân tách; 8) Di nạp DNA đích vào plasmid mới.A BABA BXV. Phương pháp "vân tay DNA" (DNA finger print) Các kỹ thuật sinh vật học phân tử cũng ảnh hưởng nhiều...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 8 pptx

... cần thiết phải phân tích protein. Những công việc phải tiếp cận thường là kỹ thuật tinh chế protein, xác định phân tử lượng protein, phân tích sự thể hiện gen tổng hợp protein trong E. coli ... gel phân tách đã hóa rắn thì thực hiện đổ gel tập trung. Nồng độ của gel phân tách phụ thuộc vào độ lớn của protein cần phân tách. Nồng độ acrylamide càng cao thì phân tách được các phân tử ... dẻo, thêm vào đó 5 - 10 ml dung dịch kháng thể, ủ trong 1 - 3 giờ, lắc đảo nhẹ nhàng thường xuyên.3) Ngâm mỗi màng trong 10 ml T 10 N50-NP40 ba lần liên tiếp mỗi lần 10 phút trên máy lắc....

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 7 docx

... III trong 10 - 12 giờ, ngoại dịch có thể khoảng 100 lần lớn hơn dịch trong túi thẩm tích, thay dịch giữa chừng thì tốt vì nồng độ muối trong sản phẩm là khá cao.13) Quay li tâm 10. 000 v/ph trong ... µg/ml RNase T1, 10 mM Tris-HCl và 10% glycerol).7) Cho phản ứng xảy ra ở 30 ºC trong 30 phút.8) Thêm 5 µl proteinase K 10 mg/ml, 20 µl SDS 10% , cho phản ứng xảy ra ở 37 ºC trong 15 phút.9) ... thực hiện phân tích được RNA. Trong S1 mapping mẫu dò DNA chỉ được đánh dấu ở đầu mút, nhưng trong trường hợp riboprobe mapping thì RNA mẫu dò được đánh dấu suốt chiều dài phân tử trong quá...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 5 potx

... khuẩn E. coli là một trong nhưng kỹ thuật trọng yếu và cơ bản của công nghệ DNA tái tổ hợp hay kỹ thuật di truyền học phân tử. Các loại vi khuẩn E. coli có năng lực tăng cao trong thu nhận DNA ... rộng kỹ, sau đó thêm mấy giọt chloroform.2) Ủ 1 đêm ở 4 °C.3) Dùng pipet hút SM trên mặt thạch, quay li tâm, lấy nước mặt, cho vào 72Chương 3KỸ THUẬT PHÂN TÍCH XÁC NHẬN PHÂN TỬI. Kỹ thuật ... diện của DNA tương đồng trong mẫu nghiệm, là một trong những phương pháp hữu ích áp dụng trong nghiên sinh học phân tử. DNA mẫu nghiệm có thể là nguyên vẹn. Thêm vào đó, trong nhiều trường hợp,...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 4 doc

... nước cất, xử lý trong 5 - 10 phút ở 100 ºC, quay li tâm 10. 000 v/ph thu lấy nước mặt. Trộn 1 ml dịch mặt này với 100 ml kháng thể, để 2 giờ ở 4 ºC, quay li tâm 10. 000 v/ph trong 15 phút, thu ... v/ph trong 24 giờ.6) Phân đoạn từng 1 ml.7) Từ mỗi phân đoạn lấy một lượng nhỏ mẫu để điện di kiểm tra: lấy 5 µl mẫu hòa vào 10 µl nước và 5 µl dung dịch màu tải mẫu 6× để 10 phút ở 68 °C trong ... trước khối lượng phân tử của cDNA. Làm phản ứng tổ hợp vào vector trong 3 ống. Trộn 1 µg DNA λgt 10 hoặc λgt 11 gắn đầu dính (arm-DNA λgt 10, arm-DNA λgt 11) với một lượng cDNA trong mỗi ống sao...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 3 ppsx

... tiệt trùng. Chờ nguội thì cho thêm blocking reagent 10 . Bảo quản ở 4 ºC.47IV. Phương pháp đánh dấu DNABan đầu, trong kỹ thuật sinh học phân tử việc đánh dấu DNA và RNA để có các mẫu dò (hay ... và bơm tiêm hút lớp này. 10) Thẩm tích đối 1 lít dung dịch Tris 10mM (pH 7,5) và MgSO4 10mM trong 3 giờ.11) Nếu tổng lượng là 1 ml thì cho vào đó 10 µl SDS 10% , 100 µl NaCl 5M, 500 µl phenol ... ethanol, để ở −20 °C trong 3 giờ.6) Quay li tâm 10. 000 v/ph trong 20 phút, đổ bỏ nước mặt. Hòa tan cặn trong 3 ml TE, lại quay li tâm 10. 000 v/ph trong 10 phút hút lấy nước mặt chuyển sang ống khác...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 2 docx

... với DNA đã biết nồng độ được pha loãng 26Chương 2KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG TÁI TỔ HỢP DNAI. Điều chế DNA plasmid Trong các thí nghiệm như phân tích gen thường cần lượng lớn plasmid nhưng với ... nước (v/v) thì phenol ở dạng nhũ tương gồm các phân tử phenol ở giữa với các phân tử nước vây quanh. Khi pha hỗn hợp này vào dịch tế bào, các phân tử phenol có tính kị thủy nên có khuynh hướng ... đứt DNA, để lạnh 10 phút. 3) Thêm 10, 5 ml potassium acetate, trộn đều, để 10 phút trong băng hay nước đá. 4) Quay li tâm 15.000 v/ph trong 20 phút ở 4 ºC, rồi chuyển dịch trong sang ống nghiệm...

Xem thêm