- Nhóm Suramine
2.4.2. Phương pháp chẩn đoán
Mẫu xét nghiệm được tiến hành chẩn đoán tại Phòng chẩn đoán xét nghiệm Chi cục Thú y Thanh Hóa, Thú y Vùng 3, bộ môn Nội Chẩn Học Viện Nông nghiệp Việt Nam bằng các phương pháp sau:
2.4.2.1. Phương pháp ngưng kết SAT
- Nguyên lý: trong máu trâu, bò bị bệnh Tiên mao trùng sinh ra ngưng kết tố, có thể là ngưng kết Tiên mao trùng thành cụm như hình hoa cúc.
- Các bước tiến hành phản ứng ngưng kết SAT (Sero agglutilation test): * Bước 1 Chuẩn bị:
+ Chuẩn bị kháng nguyên là Tiên mao trùng sống được lấy từ chuột gây nhiễm Tiên mao trùng chủng T.evansi. Lấy máu chuột có lượng Tiên mao trùng tối đa, máu chuột được xử lý bằng Natricitrat 10% (1 ml máu chuột + 0,1 ml Natricitrat).
- Pha loãng kháng nguyên với dung dịch đệm PSG thành nồng độ pha loãng 1/4-1/8.
- Kháng nguyên bảo quản ở 40C có thể làm phản ứng 8-10 giờ. + Huyết thanh chẩn đoán cũng pha loãng 1/8.
* Bước 2: Tiến hành phản ứng:
- Nhỏ một giọt huyết thanh cần chẩn đoán lên phiến kính với một giọt tương đương kháng nguyên. Trộn đều, đậy lá kính trong 5-10 phút, sau đó đọc phản ứng ngưng kết giữa kháng nguyên và kháng thể trên kính hiểm vi có độ phóng từ 200 - 400 lần. Đánh giá kết quả phản ứng.
- Phản ứng dương tính: nếu Tiên mao trùng chụm lại thành hình hoa cúc (hầu hết Tiên mao trùng bị chụm lại thành nhiều cụm hình hoa cúc khắp
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 29 vi trường kính hiển vi). Phản ứng âm tính: Tiên mao trùng tản mạn khắp nơi. Nếu một nửa phân tán, một nửa tập trung thì nghi ngờ. Theo quy trình của Đoàn Văn Phúc và cs., 1992
2.4.2.2. Phương pháp tiêm truyền T.evansi cho chuột nhắt trắng
Phương pháp xét nghiệm Tiên mao trùng bằng tiêm truyền chuột nhắt trắng dùng để chẩn đoán và phân lập Tiên mao trùng. Được coi là phương pháp chẩn đoán có độ chính xác đạt đến 100%
Sử dụng máu của gia súc có nhiễm Tiên mao trùng phân lập ở huyện Nông công tiêm vào cho động vật thí nghiệm. trong máu của động vật thí nghiệm Tiên mao trùng phát triển, sinh sản gấp nhiều lần, kiểm tra máu của động vật thí nghiệm có phát hiện Tiên mao trung trong đó. Lấy 0,4 - 0,6 ml máu tĩnh mạch tai trâu, bò có Tiên mao trung trong dung dịch có kháng đông (EDTA) tiêm vào xong phúc mạc, rồi định kỳ kiểm tra máu chuột trên kính hiển vi từ 3 - 30 (2 lần/tuần) ngay sau khi tiêm để tìm Trypanosoma evansi làm theo cách của (Đoàn Văn Phúc, 1985)
2.4.2.3. Phương pháp xem tươi
Lấy một giọt máu ở tĩnh mạch tai nhỏ vào một giọt dung dịch chống đông máu hoà lẫn, đậy lamen, kiểm tra dưới kính hiển vi có độ phóng đại (10x 40) tìm Tiêm mao trùng di chuyển giữa các hồng cầu.
2.4.2.4. Phương pháp nhuộn Giemsa
Chúng tôi lấy máu khi con vật sốt. Lấy máu ở tĩnh mạch tai (trâu, bò), mèo, chó lấy máu ở tĩnh mạch chân, riêng chuột nhắt trắng và chuột lang thì cắt đuôi lấy máu phết tiêu bản.