Khi tiêm mao trùng ký sinh, cơ thể vật chủ sinh ra kháng thể đặc hiệu chống lại tiêm mao trùng. Những phương pháp sau cho phép phát hiện kháng thể kháng Tiên mao trùng trong máu vật chủ:
- Phương pháp ngưng kết trên phiến kính (SAT: Slice Agglutination Test): Hòa tan 1 giọt huyết thanh gia súc nghi mắc bệnh vào 1 giọt nước muối sinh lý trên phiến kính, sau đó cho 1 giọt máu chuột bạch có nhiều Tiên mao trùng vào, trộn đều, đậy lamen và soi dưới kính hiển vi (độ phóng đại 10x20 hoặc 10x40).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 18 Nếu thấy ngưng kết hình hoa cúc là dương tính (+) và ngược lại là âm tính (-). Phương pháp này đơn giản, dễ làm và có thể áp dụng trên diện rộng.
- Phương pháp LATEX (Latex Agglutination Test):
Theo Lương Tố Thu (1994)[36], LATEX là phương pháp ngưng kết giám tiếp, được dùng để phát hiện kháng thể lưu động có trong máu của gia súc mắc bệnh Tiên mao trùng.
- Phương pháp CATT (CAM Agglutination Test for Trypanosomiatis): Theo Lương Tố Thu và Lê Ngọc Mỹ (1995) cho biết: sử dụng kít và quy trình do đề án Bỉ - Việt Nam cung cấp. Phản ứng tiến hành theo quy trình của Magnus và cs (1978). Độ pha loãng sàng lọc là 1/4.
Nguyên lý: kháng nguyên Tiên mao trùng đã được nhuộm màu kết hợp với kháng thể tạo thành những đám kết tủa li ti màu xanh.
Phương pháp ELISA là một trong những phương pháp hiện đại nhất được ứng dụng để chẩn đoán bệnh tiên mao trùng.
Nguyên lý: dùng kháng thể hoặc kháng thể kháng Globulin (kháng kháng thể) có mang một enzym (phosphatase hoặc peroxydase) được gắn trên mảnh Fc, cho kết hợp trục tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên. Sau đó cho cơ chất sinh màu vào, cơ chất sẽ kết hợp với enzym và bị enzym phân hủy tạo nên màu. So sánh với màu của quang phổ kế sẽđịnh lượng được mức độ của phản ứng.
Phương pháp ELISA hiện đang được sử dụng rỗng rãi ở các nước trên thế giới, ở Việt Nam đã bước đầu chế kháng nguyên tiên mao trùng và ứng dụng để chấn đoán bệnh Tiên mao trùng ở nước ta.
1.9. Một số chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu trâu nhiễm T. evansi
Trypanosoma evansi ký sinh trong máu đã làm biến đổi sinh lý, sinh hóa của trâu, bò nói riêng, động vật nuôi và hoang dã nói chung.
Sự thay đổi của các chỉ tiêu sinh lý, huyết học, đặc biệt là các chỉ tiêu về số lượng và chất lượng hồng cầu, các chỉ tiêu protein huyết thanh là triệu chứng của suy dinh dưỡng, thiếu máu và tổn thương gan do các bệnh truyền nhiễm, ký sinh trùng gây ra cho động vật.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 19 Hồ Văn Nam (1963); Nguyễn ThịĐào Nguyên (1993) đã nghiên cứu hàm lượng các chất vô cơ: canxi, phốt pho, natri, kali, clo trong máu trâu, tỷ khối hồng biến động khi trâu, bò bị bệnh Tiên mao trùng, các chỉ tiêu về chất lượng hồng cầu đều thay đổi theo mức độ, sức kháng hồng cầu giảm, hàm lượng protein huyết thanh trâu bệnh rất thấp, lượng huyết đường thấp, albumin và tỷ lệ A/G giảm, α-globulin, γ-globulin tăng, hàm lượng bilirubin toàn phần trong huyết thanh tăng.
Theo Losos, G. J (1979) khi súc vật nhiễm T.evansi thường thiếu máu, làm xuất hiện hồng cầu non, hồng cầu lưới, đại hồng cầu, tủy xương bị to ra. Các tác giả Takarkhede, M. L., Patel, M. R. Và Pandey, S. K (1993) cũng cho biết: súc vật nhiễm T.evansi thì số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, lympho, bạch cầu kiềm tính giảm, nhưng lại tăng bạch cầu toan tính, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu trung tính.
Losos, G. J (1979) khi gây nhiễm 107 T. evansi/con cho 4 ngựa từ 4 – 10 tuổi và sau 35 ngày gây nhiễm thấy, tỷ lệ albumin, globulin giảm 14 – 49%. Không có sự thay đổi về axit lactic, protein toàn phần, kali trong huyết thanh. Tỷ lệ huyết trầm 35 – 54%. Giảm tỷ khối hồng cầu, tổng số hồng cầu, bạch cầu, bạch cầu trung tính giảm, nhưng tăng tế bào lympho so với trước khi gây nhiễm.
Raina, A. K. và Peskin, P. K (1987), đã gây nhiễm 80 – 100 x 106
T.evansi/con cho 18 trâu đực 1,5 tuổi và thấy: một lô sau khi gây nhiễm 7 ngày dùng thuốc Suramin, Puirapiramine 4,2 mg/kg điều trị, không thấy có sự thay đổi urê, nitơ giữa lô dùng thuốc với lô không dùng thuốc, Hemoglobin có sự thay đổi không đáng kể. Trong quá trình khỏi bệnh thì PO2, oxy tự do ở nhóm không dùng thuốc có sự thay đổi rõ.
Ở nước ta việc nghiên cứu sự biến đổi các chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu trên cơ thể động vật nhiễm T.evansi còn ít. Xét nghiệm trên đàn trâu, bò nhiễm
T.evansi tự nhiên hay thực nghiệm hầu hết các tác giả đều cho thấy: số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tốđều giảm. Số lượng bạch cầu của trâu, bò bệnh tăng dần trong quá trình bệnh, nhưng tăng cao nhất vào tháng thứ hai sau gây nhiễm. Thành phần các loại bạch cầu tăng không đều. Ở trâu, bò bệnh lympho
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 20 bào, bạch cầu ái toan đều tăng, bạch cầu đa nhân trung tính giảm. Khảo sát các tiểu phần protein trong huyết thanh thấy lượng protein tổng số, albumin giảm rõ rệt, ngược lại α, β, γ-globulin đều tăng, chỉ số A/G <0,5.
Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Quốc Doanh và cs. (1996), trâu, bò nhiễm bệnh tiên mao trùng số lượng hồng cầu giảm. Cụ thểở trâu: số lượng hồng cầu còn 4,12 triệu/mm3, hàm lượng huyết sắc tố giảm 8,24 g%, ở bò số lượng hồng cầu giảm còn 4,04 triệu/mm3, hàm lượng huyết sắc tố giảm 8,08 g%, mức độ giảm còn phụ thuộc vào chếđộ chăm sóc, nuôi dưỡng, quá trình tiến triển của bệnh, nhưng số lượng bạch cầu tăng cao.