Có nhiều phương pháp chẩn đoán Tiên mao trùng trong phòng thí nghiệm, mục đích là phát hiện Tiên mao trùng trong máu gia súc. Tùy từng trường hợp bệnh, tùy điều kiện mà có thể làm cùng lúc một số phương pháp hoặc lựa chọn một phương pháp phù hợp và có độ chính xác cao.
* Phương pháp phát hiện Tiên mao trùng trực tiếp
Để phát hiện Tiên mao trùng trực tiếp người ta có thể áp dụng những phương pháp sau:
- Phương pháp xem tươi (Direct smear)
Nguyên lý: Khi sốt, trong mao quản ngoại vi của gia súc mắc bệnh tiên mao trùng thường có T.evansi. Vì vậy, trường hợp này nên lấy máu vùng ngoại vi để xem tươi.
Tiến hành: Cho một giọt máu nhỏ lên phiến kính, đậy lamen lên giọt máu để giọt máu dàn theo lamen thành một lớp mỏng. Soi dưới kính hiển vi (độ phóng đại 10x20) để phát hiện tiêm mao trùng sống. Nếu có, thấy hồng cầu dạt từ bên nọ sang bên kia, chứng tỏT.evansi chuyển động trong huyết tương, làm xáo động các hồng cầu.
- Phương pháp nhuộm Giemsa tiêu bản máu khô (Romanovsky)
- Phương pháp giọt dày: đặt 1 giọt máu to vào giữa phiến kính, dùng một góc của đầu một phiến kính khác đặt lên giọt máu để nghiêng một góc 450 so với phiến kính kia, sau đó đưa phiến kính từđầu này sang đầu kia. Để tự nhiên trong khoảng 1 giờ, rồi cố định bằng cồn Methanol, nhuộm Giemsa (1 giọt Giemsa + 1ml dung dịch PBS pa = 7,2) trong 25 phút. Rửa tiêu bản dưới vời nước chảy nhẹ, để khô rồi soi dưới kính hiển vi (độ phóng đại 10x100 hoặc 10x90).
- Phương pháp giọt mỏng: Nhỏ một giọt máu cách đầu phiến kính 2cm, dùng lamen ria máu thành một lớp mỏng, để khô, cố định bằng cồn Methanol trong 2 phút. Nhuộm Giemsa trong 25 phút (1 giọt Giemsa + 1ml dung dịch PBS
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 17 pa = 7,2). Rửa tiêu bản đươi vòi nước chảy nhẹ, để khô, soi kính hiển vi (độ phóng đại 10x100 hoặc 10x90).
- Phương pháp tập trung Tiên mao trùng: Trong hầu hết các ký chủ, T.evansi
có thể gây ra nhiễm trùng nhẹ, các biểu hiện lâm sàng và phi lâm sàng thường không rõ rệt khi số lượng kí sinh trùng trong máu thấp, trong đó rất khó để chứng minh sự có mặt của ký sinh trùng. Phương pháp tập trung trở nên cần thiết.
Ly tâm tập trung bằng ống Haematocrit (WOO, 1971): Máu (70ml) được thu vào ống mao dẫn Haematocrit (75x1,5mm), sau đó một đầu ống được bịt kín bằng chất dẻo matit hoặc parafin, một đầu ống để hở. Ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút trong 10 phút. Lấy ống thủy tinh ra ngoài, bẻ phần tiếp giáp giữa huyết thanh và dung dịch vàng sẫm phía dưới, đổ dung dịch vào phiến kính. Sau đó kiểm tra dưới kính hiển vi (x100-200). Đơn giản hơn để kiểm tra các ống mao dẫn ly tâm bằng cách nhỏ một giọt dầu ngâm vào ống và đảm bảo rằng có sự tiếp xúc giữa vật kính và giọt dầu.
- Tiêm truyền động vật thí nghiệm: Tiên mao trùng có khả năng sống, nhân lên trong động vật thí nghiệm mẫn cảm như chuột nhắt trắng, chuột lang, thỏ.
Máu chống đông được tiêm vào phúc mạc của chuột (1-2ml) hoặc chuột (0,25 -0,5 ml). Tiêm tối thiểu 2 loài động vật; sau đó cắt đuôi 3 lần/tuần để phát hiện ký sinh trùng trong máu. Thời kỳ ủ bệnh và độc lực của chúng phụ thuộc vào chủng của Tiên mao trùng, nồng độ của chúng trong các nguồn bệnh và các yếu tố stress trong phòng thí nghiệm.