4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.6. Kết quả xây dựng cây sinh học phân tử
Qua việc so sánh trình tự nucleotide và trình tự axit amin của các chủng virus Care phân lập và chủng virus vacxin chúng tôi tiến hành xây dựng cây sinh học phân tử ựể xác ựịnh nguồn gốc phát sinh của các chủng virus Care nghiên cứu và mối quan hệ di truyền giữa các chủng virus Care phân lập ựược. Kết quả phân tắch nguồn gốc phát sinh của các chủng virus Care nghiên cứu ựược trình bày ở hình 4.19
Hình 4.19. Cây sinh học phân tử cho thấy mối quan hệ di truyền giữa các chủng virus Care nghiên cứu
Từ kết quả so sánh thành phần nucleotide và axit amin của ựoạn gen H giữa các chủng virus Care nghiên cứu và chạy trên chương trình ClustalW chúng tôi tiến hành xác ựịnh nguồn gốc phát sinh của các chủng virus Care
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 nghiên cứu. Kết quả phân tắch nguồn gốc phát sinh cho thấy:
Các chủng virus Care mà chúng tôi nghiên cứu nằm trong 2 nhánh phát sinh khác nhau, cụ thể:
+ 3 chủng virus Care phân lập ựược và nghiên cứu nằm trong cùng 1 nhánh và thuộc thuộc nhóm Asia 1
+ Chủng virus vacxin thuộc nhóm vacxin và classic
điều này hoàn toàn phù hợp vì 3 chủng virus Care phân lập ựược từ chó có tắnh tương ựồng cao về nucleotide và axit amin. Chủng virus vacxin thuộc nhánh khác vì có tắnh tương ựồng với 3 chủng virus Care phân lập ựược về nucleotide và axit amin thấp. điều ựó cũng cung cấp thêm cơ sở khoa học góp phần giải thắch cho việc ngày nay nhiều chó có tiền sử tiêm phòng vacxin mà vẫn mắc bệnh Care.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 61
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ 5.1. Kết luận
1. Lựa chọn ựược 3 chủng virus Care (CDV1P, CDV2H và CDV3P) ựại diện cho các mẫu thu thập ựược từ các chó mắc bệnh Care nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận ựể nghiên cứu các ựặc tắnh sinh học phân tử.
2. đã xác ựịnh ựược trình tự nucleotide và axit amin của ựoạn gen H của 3 chủng virus Care phân lập ựược từ chó nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận. đoạn gen H có kắch thước 1824bp mã hóa cho 584 axit amin của protein kháng nguyên H.
3. Mức ựộ tương ựồng nucleotide của gen H của các chủng virus Care phân lập ựược từ chó nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận với nhau là tương ựối cao từ 97.59% ựến 98.85% nhưng mức ựộ tương ựồng nucleotide giữa các chủng phân lập ựược và chủng vacxin thì tương ựối thấp từ 91.51% ựến 91.57%.
4. Mức ựộ tương ựồng axit amin của protein kháng nguyên H của các chủng virus Care phân lập ựược từ chó nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận với nhau là tương ựối cao từ 95.22% ựến 98.29% nhưng mức ựộ tương ựồng axit amin giữa các chủng phân lập ựược và chủng vacxin thì tương ựối thấp từ 82.28% ựến 84.13%.
5. Các chủng virus Care phân lập ựược từ chó nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận có cùng nguồn gốc phát sinh với nhau, không cùng nguồn gốc phát sinh với các chủng virus vacxin.
5.2. đề nghị
để ựề tài nghiên cứu trên ựược hoàn thiện hơn nữa chúng tôi mong muốn: 1. Tiến hành ựề tài trên phạm vi nghiên cứu rộng hơn ựể thu ựược kết quả toàn diện hơn.
2. Tiếp tục tiến hành giải trình tự gen các ựoạn gen còn lại của virus Care tiến tới giải trình tự toàn bộ hệ gen của virus.
3. Tiếp tục nghiên cứu sâu hơn ựể chế tạo vacxin phòng bệnh Care trên chó từ những chủng virus ựang lưu hành ở nước ta.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62
TÀI LIỆU THAM KHẢO
I. TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Vương đức Chất, Lê Thị Tài (2004), Bệnh chó mèo và cách phòng trị, NXB Nông Nghiệp.
2. Hồ đình Chúc (1993), Bệnh Care trên ựàn chó ở Việt Nam và kinh nghiệm ựiều trị, Công trình nghiên cứu, Hội thú y Việt Nam.
3. Tô Du, Xuân Giao (2006), Kỹ thuật nuôi chó mèo và phòng trị bệnh thường gặp, NXB Lao ựộng xã hội. Hà Nội.
4. Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2009), Giáo trình miễn dịch học thú y, NXB Nông nghiệp, tr: 79 Ờ 84.
5. Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2010), Giáo trình miễn dịch học ứng dụng, NXB Nông nghiệp, tr: 153 Ờ 156.
6. Nguyễn Hữu Nam, (2011), báo cáo tổng kết ựề tài khoa học và công nghệ cấp bộ, tr: 16, 30-34.
7. Nguyễn Vĩnh Phước (1978), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, NXB Nông nghiệp.
8. Trần Thanh Phong (1996), Một số bệnh truyền nhiễm chắnh trên chó, Tủ sách trường đại học Nông lâm thành phồ Hồ Chắ Minh, tr: 54-68.
9. Lê Thị Tài (2006), Một số bệnh mới do virus , NXB Nông nghiệp 10. Nguyễn Văn Thanh (2007), Bài giảng Bệnh chó mèo.
II. TÀI LIỆU TIẾNG ANH
1. Appel MJ, Yates RA, Foley GL, Bernstein JJ, Santinelli S, Spelman LH, Miller LD, Arp LH, Anderson M, Barr M, (1994), Canine distemper epizootic in lions, tigers, and leopards in North America, James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853, J Vet Diagn Invest, tr: 277-288.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 2. Appel, J. G. & Gillespie, J. H. (1972) Canine Distemper Monograph. In Handbook of Virus research, tr 34-63. Editesd by Gard S, Hallaver C & Meyer K. F. New York: Springer Ờ Verlag.
3. Appel, M. J. & Summer B.A (1995), Pathologenicity of mobillivirus forterresttrial carnivores, Veterinary Microbiol. 44, tr: 187-191
4. Assessment, M.E. (2005). Ecosystems and human well-being. World Resources Institute. Springer. New York 159 p.
5. Blixenkrone-Moller, M., Svansson, V., Have, P., Orvell, C., Appel, M., Rode Pedersen, I., Henriksen, P. (1993). Studies on manifestations of canine distemper virus infection in an urban dog population. Veterinary Microbiology 37, tr: 163-173.
6. Bolt, G., T. D. Jensen, E. Gottschalck, P. Arctander, M. J. Appel, R. Buckland, and M. Blixenkrone-Moller.1997. Genetic diversity of the attachment (H) protein gene of current field isolates of canine distemper virus. J. Gen. Virol.78:367Ờ372.
7. Carter SD, May C, Bell SC (1992), Canine distemper virus and rheuma toid arthritis in dogs.Veterinary Microbiology, p 123-145.
8. David T. Smith, Donald S. Martin (1979), ZinserỖs Text book of Bacteriology, p: 808-810
9. Diallo, A. (1990). Morbillivirus gruop: genome organisation and protiens. Veterinary Microbiology 23, p 155-163.
10. Frolich K, Czupalla O, Haas L, Hentschke J, Dedek J, Fickel J (2000) Epizootiological investigations of canine distemper virus in free-ranging carnivores from Germany, Veterinary Microbiol 74, tr: 283-292.
11. Greene, C. E. & Appel, M. J (1987), Canine distemper. In Clinical microbiology and infectious dissease of the dog and cat, tr: 386-405. Edited
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 by Greene C. E. Philadelphia: W B Saunders.
12. Greene, C. E. & Appel, M. J (2006). Canine Distemper. In Greene infectious diseases of the dog and cat, 3rd edn, tr: 25-41. Edited by Craig E Greene: Saunders, Elsevier.
13. Griffin, D. E. (2001). Measles virus. In Fields Virology, 4th edn, tr: 1401- 1441. Edited by Knipe, D. M. Philadelphia, PA: Lippincott Williams and Wilkins.
14. Grone A, Frisk AL, Baumgartner W (1998). Cytokine mRNA expression in whole blood samples from dogs with natural canine distemper virus infection. Veterinary Immunology and Immunopathology 65, tr: 11-27. 15. Haas, L., Liermann, H., Harder, T. C., Barrett, T., Lochelt, M., Von
Messling, V., Baumgarner, W. & Greiser-Wilke, I. (1999). Analysis of the H gene, the central untranslated region and the proximal coding part of the F gene of dild-type and vacxin canine distemper viruses. Veterinary Microbiology 69, tr: 15-18.
16. Haas, L., Marthens, W., Greiser-Wilke, I., Mamaev, L., Butina, T., Maack, D. & Barrett, T. (1997). Analysis of the haemagglutinin gene of current wild-type canine distemper virus isolates from Germany. Virus Research 48, tr: 165-171.
17. Hashimoto, M., Y. Une, and M. Mochizuki.2001. Hemagglutinin genotype profiles of canine distemper virus from domestic dogs in Japan. Arch. Virol. 146:149Ờ155.
18. Harder TC, Osterhaus AD (1997)Canine distemper virus--a morbillivirus in search of new hosts, Trends Microbiol, tr:120-124.
19. Hyoko Hirama, Yoko Goto, Masashi Uema, Yasuyuki Endo, Ryuichi Miura and Cheiko Kai. (2004). Phylogenetic analysis of the Hemagglutinin
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 (H) gene of Canine Distemper viruses isolated from wild masked palm civets (Paguma larvata). Virol. 66:1575-1578.
20. Kennedy S, Smyth JA, Cush PF, Duignan P, Platten M, McCullough SJ, Allan GM. (1989).Histopathologic and immunohistochemmical studies of distemper in seal, Veterinary Pathology, tr: 97-103
21. Lamb, R. A. & Kolakofsky D (2001). Paramyxoviridae: The viruses and their replication. In Fundamental Virology, 4th edn, tr: 689-724. Edited by Kinpe D. M. & Howley, P. M. Philadelphia: Lippincoot Williams and Wilkins.
22. Lan NT, Yamaguchi R, Furuya Y, Inomata A, Ngamkala S, Naganobu K, Kai K, Mochizuki M, Kobayashi Y, Uchida K, Tateyama S (2005), Pathogenesis and phylogenetic analyse of canine distemper virus strain 007Lm, a new isolate in dogs, Vet. Microbiol. 110, tr: 197-207
23. Lan NT, Yamaguchi R, Inomata A, Furuya Y, Uchida K, Sugano S, Tateyama S (2006), Comparative analyses of canine distemper viral isolates from clinical cases of canine distemper in vaccinated dogs Vet Microbiol, tr:32-42. Epub 2006 Feb 28.
24. Lednicky, J. A., J. Dubach, M. J. Kinsel, T. P. Meehan, M. Bocchetta, L. L. Hungerford, N. A. Sarich, K. E. Witecki, M. D. Braid, C. Pedrak, and C. M. Houde.2004. Genetically distant American canine distemper virus lineages have recently caused epizootics with somewhat different characteristics in raccoons living around a large suburban zoo in the USA. Virol. J.1:2.
25. Martella V, Cirone F, Elia G, Lorusso E, Decaro N, Campolo M, Desario C, Lucente MS, Bellacicco AL, Blixenkrone-Mụller M, Carmichael LE, Buonavoglia C (2006) Heterogeneity within the hemagglutinin genes
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 66 of canine distemper virus (CDV) strains detected in Italy. Vet Microbiol, tr:301-309.
26. Martella V, Elia G, Lucente MS, Decaro N, Lorusso E, Banyai K, Blixenkrone-Moler M, Lan NT, Yamaguchi R, Cirone F, Carmichael LE, Buonavoglia C (2007) Genotyping canine distemper virus (CDV) by a hemi-nested multiplex PCR provides a rapid approach for investigation of CDV outbreaks, Vet Microbiol, tr: 32-42.
27. Martella V, Pratelli A, Cirone F, Zizzo N, Decaro N, Tinelli A, Foti M, Buonavoglia C (2002), Detection and genetic characterization of canine distemper virus (CDV) from free-ranging red foxes in Italy, Mol Cell Probes, tr: 77-83.
28. Muhammad Munir, Siamak Zohari and Mikael Berg (2013). Molecular biology and pathogenesis of Peste des petits ruminants virus, Springer, London, 149p.
29. Nguyen Thi Lan, Ryoji YAMAGUCHI, Tran Trung KIEN, Takuya HIRAI, Yuichi HIDAKA and Nguyen Huu NAM (2008), First Isolation and Characterization of Canine Distemper Virus in Vietnam with the Immunohistochemical Examination of the Dog, J. Vet. Med. Sci, tr: 155-162. 30. Shell, L. G. (1990). Canine distemper. Compendium on continuing education
for the practicing Veterinarian Ờ Small animal 12, tr: 173-179.
31. Timothy Y. Woma, Moritz van Vuuren (2009), Isolation of canine distemper viruses from domestic dogs in South Africa using Vero.DogSLAM cells and its application to diagnosis, African Journal of Microbiology Research Vol. 3
32. Wei Qiu,1 Ying Zheng,1 Shoufeng Zhang,Quanshui Fan,1 Hua Liu, Fuqiang Zhang,Wei Wang, Guoyang Liao, and Rongliang Hu (2011), Canine Distemper Outbreak in Rhesus Monkeys,China, Center for Disease Control
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 and Prevention, Chengdu Military Region, Kunming, People's Republic of China.Emerg Infect Dis. tr 1541-1543.
33. Yoshida E, Iwatsuki K, Miyashita N, Gemma T, Kai C, Mikami T (1998) Molecular analysis of the nucleocapsid protein of recent isolates of canine distemper virus in Japan. Vet Microbiol, tr: 237-244.