4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.Kết quả lựa chọn mẫu nghiên cứu
để thực hiện ựề tài chúng tôi tiến hành thu thập mẫu bệnh phẩm của chó nghi mắc bệnh Care theo giống chó và ở các lứa tuổi khác nhau. Dựa trên cơ sở theo dõi kết hợp với ựặc ựiểm dịch tễ học của bệnh và các thông tin thu thập ựược từ các bác sỹ thú y ựiều trị cho bệnh súc, chúng tôi tiến hành xác ựịnh một số triệu chứng chủ yếu khi chó mắc bệnh Care làm cơ sở cho việc thu thập mẫu cho nghiên cứu. Kết quả ựược thể hiện qua bảng 4.1
Bảng 4.1. Mẫu chó nghi mắc Care thu thập ựược
STT địa ựiểm lấy mẫu
Số
lượng Triệu chứng lâm sàng
1 Hà Nội 8 Sốt, ho, tiêu chảy, ho, chảy nước mũi, có rử mắt 2 Hưng Yên 5 Ủ rũ, sốt, bỏ ăn, nôn, chảy nước mũi, có rử mắt 3 Hà Nam 3 Ủ rũ, bỏ ăn, chảy nước mũi, xuất hiện nốt sài
4 Thái Nguyên 6 Sốt, ủ rũ, ăn ắt, ho, chảy nước mũi, ho, sừng hóa gan bàn chân
5 Bắc Ninh 6 Bỏ ăn, ủ rũ, nôn, tiêu chảy, có rử mắt
6 Bắc Giang 4 Sốt, bỏ ăn, ủ rũ, nôn, chảy nước mũi, ho, có rử mắt
Tổng 32
Theo bảng 4.1 chúng tôi thấy khi theo dõi 32 ca bệnh thì triệu chứng sốt, ủ rũ, biếng ăn, viêm kết mạc mắt, phân lẫn máu màu cafe là triệu chứng ựiển hình khi con vật mắc bệnh. Nhiều chó có biểu hiện tiêu chảy phân nhão, có nhiều nước, có màu cafe, có lẫn máu tươi và niêm mạc ruột bong tróc làm phân có mùi mắm thối. Bên cạnh ựó, nhiều chó có biểu hiện rối loạn hô hấp, viêm phổi, ho: ho từng tiếng một, ho
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 38 nhiều, ho có ựờm, ho liên hồi, chảy cả nước mắt nước mũi.
Biểu hiện sừng hóa gan bàn chân, xuất hiện nốt sài cũng ắt gặp ở 32 chó theo dõi. Triệu chứng thần kinh thường ắt gặp nhất là do chó ựã chết trước khi có triệu chứng này. Triệu chứng thần kinh chủ yếu là khi chó ựã ựược ựiều trị qua giai ựoạn ựầu và chuyển sang thần kinh thể hiện ở các mức ựộ khác nhau con vật bị ựộng kinh, không tự chủ ựược, cắn bất kỳ vật gì gần miệng, miệng chảy nước bọt màu trắng (có khi có lẫn máu), tự ựộng ựại tiểu tiện, co giật liên hồi không nghỉ, kêu hú liên hồi. Cuối cùng toàn thân bất lực nằm một chỗ. Con có triệu chứng nhẹ hơn thì há miệng, ựầu và chân giật giật, vận ựộng không phương hướng.
Một số hình ảnh triệu chứng lâm sàng
Hình 4.1. Chó nghi mắc bệnh Care có biểu hiện mệt mỏi, ủ rủ
Hình 4.2. Chó nghi mắc bệnh Care có nhiều rử mắt
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39 Sau khi xác ựịnh ựược các triệu chứng lâm sàng chủ yếu của các chó nghi mắc Care, chúng tôi tiến hành mổ khám quan sát, chụp ảnh bệnh tắch, có hồ sơ mổ khám và hồ sơ lưu mẫu. Qua quá trình mổ khám, quan sát những biến ựổi trên các cơ quan, tổ chức của chó bệnh, chúng tôi xác ựịnh một số bệnh tắch ựại thể chủ yếu của chó mắc Care như sau:
Phổi xẹp có nhiều ựám hoại tử, trong lòng các phế quản, phế nang chứa ựầy mủ. Khi virus Care vào phổi gây ra quá trình viêm, chất rỉ viêm nút chặt trong lòng phế quản và tơ huyết hình thành trong lòng phế quản bị viêm gây hiện tượng phổi xẹp. Mặt khác do bạch cầu ựa nhân trung tắnh xâm nhập nhiều, chứa ựầy trong các phế nang, phá vỡ các phế nang tạo nên các ổ mủ.
Hạch phổi, hạch ruột sưng to do khi virus qua niêm mạc ựều ựi tới hệ thống lympho rồi sẽ qua hạch lympho. Hạch lympho chắnh là tiền ựồn của cơ thể, tại ựây virus rất hay bị giữ lại nên hạch lympho thường bị viêm sưng.
Tắch nước trong xoang ngực do lượng O2 bị thiếu, con vật thở nhanh và sâu ựể bù ựắp lượng O2 bị thiếu nên tần số hô hấp tăng lên, nước từ trong xoang bụng tràn qua vách ngăn gây tắch nước xoang ngực. Bên cạnh ựó việc truyền quá nhanh và nhiều dung dịch Lactac Ringer, ựường glucoza 5% cũng gây hiện tượng tràn nước qua màng phổi.
Não xuất huyết do virus tấn công vào thần kinh. Nếu chó chết ở giai ựoạn ựầu và chưa có biểu hiện thần kinh thì virus có thể chưa tấn công vào não nên bệnh tắch ở trên ựó chưa xuất hiện nhưng nếu chó chết khi ựã có triệu chứng thần kinh thì tỷ lệ xuất huyết não có thể lên tới 100%. Trong khi ựó bệnh tắch ở gan, túi mật, thận xuất hiện ắt do có thể con vật bị kế phát các vi khuẩn khác gây nên các bệnh tắch ựặc trưng ở các cơ quan này.
Mức ựộ biểu hiện bệnh tắch trên các cơ quan của chó mắc bệnh Care là khác nhau vì các biến ựổi ựó phụ thuộc vào ựộc lực của virus, tuổi và trạng thái miễn dịch của cơ thể.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 41
Một số hình ảnh bệnh tắch chó mắc Care
Hình 4.5. Xoang ngực tắch nước Hình 4.6. Dạ dày, ruột chứa ựầy hơi
Hình 4.7. Phổi bị hoại tử, gan hóa Hình 4.8. Lách hoại tử ựen
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 42 Dựa trên các triệu chứng lâm sàng chủ yếu của các chó nghi mắc Care và kết quả mổ khám kiểm tra bệnh tắch ựại thể, chúng tôi thu thập mẫu bệnh phẩm và tiến hành chẩn ựoán bằng kỹ thuật RT-PCR ựể xác ựịnh chắnh xác sự xuất hiện virus Care. Kết quả chẩn ựoán RT-PCR các chó nghi mắc Care ựược trình bày ở bảng 4.2.
Bảng 4.2. Kết quả chẩn ựoán bằng phương pháp RT-PCR các chó nghi mắc bệnh Care
STT địa ựiểm lấy mẫu Số lượng Kết quả RT-PCR Âm tắnh Dương tắnh 1 Hà Nội 8 3 5 2 Hưng Yên 5 1 4 3 Hà Nam 3 0 3 4 Thái Nguyên 6 1 5 5 Bắc Ninh 6 2 4 6 Bắc Giang 4 0 4 Tổng 32 7 25
Từ 25 chó ựược chẩn ựoán dương tắnh với virus Care bằng kỹ thuật RT- PCR, chúng tôi tiến hành phân lập virus Care trên môi trường tế bào Vero-DST. Bệnh phẩm là phổi và hạch phổi ựược lựa chọn ựể gây nhiễm vì ựây là cơ quan có bệnh tắch ựặc trưng và phổ biến nhất. Virus Care sau khi ựược gây nhiễm sẽ nhân lên và gây bệnh tắch tế bào CPE (CPE - Cyto pathogen effect) ựiển hình: bệnh tắch kiểu Syncytium hay thể hợp bào với biểu hiện là các tế bào co cụm lại, hòa màng, bao quanh các nhân tế bào bị phá hủy. Tuy nhiên thời gian xuất hiện bệnh tắch của các mẫu khác nhau và các chó khác nhau là không giống nhau.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 43 Bệnh tắch tế bào xuất hiện từ 24 giờ ựến 48 giờ sau khi gây nhiễm virus. Kết quả phân lập virus ựược thể hiện ở bảng 4.3 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bảng 4.3. Kết quả phân lập virus Care trên môi trường tế bào Vero-DST
STT địa ựiểm lấy mẫu Số lượng Số mẫu có CPE Tỷ lệ (%)
1 Hà Nội (n=5) 10 9 90 2 Hưng Yên (n=4) 8 6 75 3 Hà Nam (n=3) 6 3 50 4 Thái Nguyên (n=5) 10 8 80 5 Bắc Ninh (n=4) 8 5 62,5 6 Bắc Giang (n=4) 8 6 75 Tổng 50 37 74
(Ghi chú: mỗi chó dương tắnh với virus Care bằng phương pháp RT-PCR ựược lựa chọn 2 cơ quan là phổi và hạch phổi ựể tiến hành phân lập virus nên có tổng số 25x2=50 mẫu phân lập )
Bảng kết quả cho thấy trong tổng số 50 mẫu phân lập của 25 chó mắc Care có 37 mẫu phân lập ựược virus chiếm 74% tổng số mẫu ựiều này cho thấy mặc dù phổi và hạch phổi là hai cơ quan tập trung lượng lớn virus nhưng không phải khi nào cũng phân lập ựược virus từ các mẫu này vì còn phụ thuộc vào công tác thu thập và bảo quản mẫu trước khi phân lập ựể ựảm bảo virus Care vẫn còn sống khi ựưa vào phân lập trên môi trường tế bào.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 44
Một số hình ảnh bệnh tắch tế bào CPE
Hình 4.11. CPE do CDV gây ra sau 24 giờ gây nhiễm
Hình 4.12. CPE do CDV gây ra sau 36giờ gây nhiễm
Hình 4.13. CPE do CDVgây ra sau 48 giờ gây nhiễm
Hình 4.14. Tế bào Vero ỜDST bình thường
Trong 32 chó nghi mắc bệnh Care thu thập ựược ở vùng phụ cận Hà Nội có 25 con chó dương tắnh với virus Care bằng phản ứng RT-PCR và phân lập ựược 37 chủng virus từ các mẫu hạch phổi, phổi. Căn cứ vào bệnh tắch tế bào sau khi gây nhiễm, những chủng virus Care có bệnh tắch tế bào ựiển hình (Tế bào Vero-DST bị virus Care phá hủy sau 24 giờ gây nhiễm bắt ựầu co cụm lại và sau 60 giờ tế bào bị phá hủy hoàn toàn bong khỏi bề mặt nuôi cấy). Kết hợp với các nghiên cứu về triệu chứng lâm sàng, bệnh tắch ựại thể của các chủng virus này chúng tôi ựã lựa chọn ựược 3 chủng virus Care ựể nghiên cứu.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 45
Bảng 4.4. Hồ sơ chủng virus Care ựược lựa chọn nghiên cứu
STT Tên chủng Cơ quan phân lập địa ựiểm lấy mẫu
1 CDV1P Phổi Hà Nội
2 CDV2H Hạch Hưng Yên
3 CDV3P Phổi Bắc Giang