3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.4.5.4. đúng của phương pháp
Thêm chính xác một lượng dung dịch chuẩn gốc paeoniflorin vào mẫu placebo. Tiến hành phân tích xác định hàm lượng paeoniflorin, độđúng của phương pháp (bao gồm cả độ thu hồi của phương pháp chiết) được xác định bằng tỷ lệ giữa lượng paeoniflorin xác định được bằng quy trình phân tích so với lượng paeoniflorin thêm vào ban đầu.
Mẫu 1 (khoảng nồng độ 80 %)
Cân khoảng 0,5 g cao placebo vào cốc có mỏ 100 ml, thêm 2,4 ml dung dịch chuẩn gốc paeoniflorin trong methanol (nồng độ 445,4 µg/ ml), thêm 20 ml nước,
đun nóng trong cách thủy để hòa tan mẫu, chuyển dịch hòa tan vào bình gạn, chiết bằng n-butanol đã bão hòa nước, 3 lần, mỗi lần dùng 30 ml. Gộp các dịch chiết butanol, bốc hơi dịch chiết trên cách thủy đến cắn. Hòa cắn trong vừa đủ 25,0 ml methanol. Lọc, lọc qua màng lọc 0,45 µm được dung dịch tiêm sắc kí (nồng độ 80 % trong mẫu placebo). Làm lặp lại 3 lần.
Mẫu 2 (khoảng nồng độ 100 %)
Cân khoảng 0,5 g cao placebo vào cốc có mỏ 100 ml, thêm 3,0 ml dung dịch chuẩn gốc paeoniflorin trong methanol (nồng độ 445,4 µg/ ml), thêm 20 ml nước,
57
bằng n-butanol đã bão hòa nước, 3 lần, mỗi lần dùng 30 ml. Gộp các dịch chiết butanol, bốc hơi dịch chiết trên cách thủy đến cắn. Hòa cắn trong vừa đủ 25,0 ml methanol. Lọc, lọc qua màng lọc 0,45 µm được dung dịch tiêm sắc kí (nồng độ 100 % trong mẫu placebo). Làm lặp lại 3 lần.
Mẫu 3 (khoảng nồng độ 120 %)
Cân khoảng 0,5 g cao placebo vào cốc có mỏ 100 ml, thêm 3,6 ml dung dịch chuẩn gốc paeoniflorin trong methanol (nồng độ 445,4 µg/ ml), thêm 20 ml nước,
đun nóng trong cách thủy để hòa tan mẫu, chuyển dịch hòa tan vào bình gạn, chiết bằng n-butanol đã bão hòa nước, 3 lần, mỗi lần dùng 30 ml. Gộp các dịch chiết butanol, bốc hơi dịch chiết trên cách thủy đến cắn. Hòa cắn trong vừa đủ 25,0 ml methanol. Lọc, lọc qua màng lọc 0,45 µm được dung dịch tiêm sắc kí (nồng độ 120 % trong mẫu placebo). Làm lặp lại 3 lần.
Mẫu chuẩn: Dung dịch paeoniflorin trong methanol nồng độ 53,45 µg/ ml.
Tiến hành sắc ký
Sắc ký lần lượt các dung dịch chuẩn, dung dịch mẫu thử theo thứ tự (Mẫu 1, mẫu 2, mẫu 3), ghi lại sắc ký đồ, tính lượng paeoniflorin trong các mẫu.
Kết quả: Lượng paeoniflorin tìm lại được tính theo công thức: ( ) T 25 c C S X mcg C S = × × Trong đó:
- ST: Diện tích pic paeoniflorin trên sắc ký đồ của dung dịch thử. - SC: Diện tích pic paeoniflorin trên sắc ký đồ của dung dịch chuẩn. - CC: Nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ ml).
Yêu cầu:
Độ tìm lại: 98,0 % tới 102,0 %
RSD của độ tìm lại: Không được lớn hơn 2,0 %. Kết quả xác định độ đúng của phương pháp được trình bày ở bảng 3.15.
58 Bảng 3.15: Kết quả xác định độđúng của phương pháp TT Dung dịch (%) Lượng Paeoniflorin ban đầu (mcg) Lượng Paeoniflorin tìm lại (mcg) Độ tìm lại (%) 1 80 1068,96 1026,71 96,05 TB = 98,11 % 2 80 1068,96 1053,40 98,54 RSD = 1,91 % 3 80 1068,96 1066,07 99,73 4 100 1336,20 1326,31 99,26 TB = 99,92 % 5 100 1336,20 1361,34 101,88 RSD= 1,72 % 6 100 1336,20 1304,54 98,63 7 120 1603,44 1548,44 96,57 TB = 98,53 % 8 120 1603,44 1589,73 99,14 RSD = 1,76 % 9 120 1603,44 1601,32 99,87
Nhận xét: Kết quả cho thấy tỷ lệ thu hồi trung bình đạt > 98 % với RSD < 2 %. Như vậy khả năng tìm lại hoạt chất tương đối cao, tỷ lệ thu hồi thấp nhất là 96,05 %, tỷ lệ thu hồi cao nhất 101,88 %.