3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.4.1. Xác định hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược
46
Vị thuốc Bạch thược (hình 3.05) đã qua chế biến, được cung cấp bởi Phòng chẩn trị Phùng Gia Đường (số 4 ngõ 99 phố Trung Kính, Cầu Giấy, Hà Nội) được kiểm tra các đặc điểm vi phẫu [13] (hình 3.06), độẩm. Hình 3.05: Ảnh vị thuốc Bạch thược Hình 3.06: Ảnh đặc điểm vi học bột Bạch thược Nhận xét: Đặc điểm hình thái và đặc điểm bột của Bạch thược phù hợp với mô tả trong DĐVN IV.
Độẩm: 9,15% - Đạt yêu cầu trong DĐVN IV
Tiến hành định lượng paeoniflorin theo chuyên luận Bạch thược - Dược điển Trung quốc 2010 [24].
Dung dịch thử:
Cân chính xác khoảng 1 g dược liệu Bạch thược đã tán mịn vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml methanol, lắc siêu âm ở 60 oC trong 1h. Để nguội, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều. Lọc, lọc qua màng lọc 0,45 µm được dung dịch tiêm sắc ký.
Dung dịch chuẩn:
Chuẩn paeoniflorin:
Nguồn gốc: Sigma Hàm lượng: 98,0 %
- Cân 0,02227 g chất chuẩn paeoniflorin vào bình định mức 50 ml, hòa tan và pha loãng bằng methanol vừa đủ 50,0 ml (nồng độ chuẩn gốc 445,4 µg/ ml).
47
- Hút 2,0 ml dung dịch trên vào bình định mức 20 ml, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45 µm được dung dịch tiêm sắc ký.
Điều kiện sắc ký:
- Cột C18 (250 mm x 4,6 mm; 5 µm)
- Pha động: Acetonitril - dung dịch acid phosphoric 1 % (17 - 83) - Detector UV: 230 nm.
- Tốc độ: 1 ml/ phút. - Thể tích tiêm: 20 µl.
Tiêm lượt các dung dịch chuẩn, dung dịch thử vào hệ thống sắc ký, ghi lại sắc ký đồ. Hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược (theo dược liệu khô kiệt) được tính theo công thức sau:
(%) 100 (100 ) C C T T C C T am m HL S K X S K m HL × × = × × × × − Trong đó:
- X : Hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược (%). - SC: Diện tích pic paeoniflorin trên sắc ký đồ của dung dịch chuẩn. - KC: Hệ số pha loãng của dung dịch chuẩn.
- ST: Diện tích pic tương ứng paeoniflorin trên sắc ký đồ của dung dịch thử. - KT: Hệ số pha loãng của dung dịch mẫu thử.
- mC: Lượng cân chuẩn paeoniflorin (g). - HLc: Hàm lượng chuẩn paeoniflorin (%) - mT: Lượng cân mẫu thử (g)
- HLâm: Độẩm của dược liệu Bạch thược (%)
Kết quả xác định hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược dùng trong bào chế cao đặc Hoạt lạc vương được trình bày ở bảng 3.11. Sắc ký đồ của phép thửđược thể hiện ở hình 3.07 và hình 3.08.
48
Bảng 3.11: Kết quả xác định hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược
STT Lượng cân (g) Diện tích (uAU x phút) Hàm lượng paeoniflorin (%) Thử 1 1,2448 1007875 0,129 Thử 2 1,2018 925901 0,123 Thử 3 1,1568 987537 0,136 Chuẩn 0,02227 1510419 TB (%) 0,129
Hình 3.07 : Sắc ký đồ dung dịch chuẩn paeoniflorin (thử nghiệm định lượng paeoniflorin trong vị dược liệu Bạch thược)
49
Hình 3.08 : Sắc ký đồ dung dịch thử (thử nghiệm định lượng paeoniflorin trong vị
dược liệu Bạch thược)
Kết luận: Hàm lượng paeoniflorin trong dược liệu Bạch thược sử dụng trong nghiên cứu: 0,129 %