Phương pháp lựa chọn và xử lý vật liệu cấy đưa mẫu vào ống nghiệm
Chọn những khóm mía to khoẻ không bị sâu bệnh, lấy ngọn hoặc chặt những cây non có từ 2-4 lóng. Cây mía còn non sức nẩy mầm và khả năng tái sinh cao. Ngọn mía được cắt bỏ phiến lá, bóc bỏ tất cả phần bẹ lá già và các lá đã tiếp xúc với không khí và có màu lục, lau sạch bằng cồn etanol 700. Sau đó đưa ngọn vào buồng vô trùng, bóc bỏ lần lượt các lớp bẹ và lá non bên ngoài cho đến khi chỉ còn
lại phần ngọn với lá non trắng nằm sát chồi đỉnh. Sau đó tách lấy phần chồi nách, chồi đỉnh hoặc lá non trắng nằm sát đỉnh sinh trưởng làm vật liệu nuôi cấy. Đối với cây mía, mắt mía non (chồi ngủ) và chồi đỉnh thường được bao bọc trong nhiều lớp bẹ lá, do vậy rất sạch. Dựa vào những đặc tính cơ bản đó mà chúng tôi đưa mẫu vào
ống nghiệm mà không sử dụng hoá chất khử trùng. Kích thước mẫu nuôi cấy như sau:
- Chồi nách: Đường kính 1, 0 cm x 1, 0 cm.
- Chồi đỉnh: Bóc bỏ lá non, lấy chồi non đường kính 1, 5cm x 1, 5 cm.
Sau khi cấy, các đĩa peptri và bình nuôi được đặt trong phòng nuôi cây với
điều kiện nhiệt độ duy trì ở 25±20C và cường độ ánh sáng là 2.500lux, thời gian chiếu sáng 8 h/ngày.
Thí ngiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của vật liệu nuôi cấy chồi đỉnh và chồi nách đến khả năng tái sinh chồi của các giống mía Br7515, Br2 và QĐ93-159.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn. Mỗi giống được cấy vào 2 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần. Thí nghiệm được bố
trí như sau:
Công thức Loại chồi
CT1 Chồi đỉnh
CT2 Chồi nách
Chỉ tiêu theo dõi: Tiến hành theo dõi sau 3 tuần tỷ lệ mẫu tạo chồi. Môi trường sử dụng: MS + 3% đường sucrose + 0,6% agar.