Faust E. C. và cs (1929) [32] đã lập nên một phân giống là Spirometra trong giống Diphyllobothrium.
Muller (1935) [34] đã mô tả loài Diphyllobothrium mansonoides trên mẫu vật tìm được từ chó và mèo ở vùng Syracus (New York). Đến năm 1937 Muller đề xuất giống Spirometra và thống nhất đổi tên loài Diphyllobothrium
mansonoides thành loài Spirometra mansonoides.
Kiểm tra ký sinh trùng ở chó tại 32 ngôi làng nhỏ xung quanh thành phố Brno ở phía Nam huyện Moravia – Séc, Borkovcova M. (2003) [29] cho biết: trong tổng số 699 mẫu phân chó (483 mẫu phân chó trưởng thành, 216 mẫu phân chó nhỏ), tỷ lệ nhiễm Dipylidium caninum ở chó trưởng thành là 2,3%, ở chó nhỏ là 1,9%.
Balicka Ramisz A. và cs (2004) [28] đã nghiên cứu về ký sinh trùng đường tiêu hóa chó từ tháng 3 năm 1999 đến tháng 4 năm 2002 ở các vùng thành phố, nông thôn và lân cận của Tây Bắc Ba Lan. Kết quả kiểm tra 216
mẫu phân chó từ khu vực Gorzow Wielkopolski cho thấy, chó nhiễm sán
Dipylidium caninum ở thành thị là 29,31% , khu vực nông thôn là 32,5%. Theo kết quả nghiên cứu của Dalimi A. và cs (2006) [30], kiểm tra 83 chó ở các tỉnh phía tây của Iran cho thấy: có 38,55% chó nhiễm Dipylidium caninum; 53,01% chó nhiễm Taenia hydatigena; 7,23% chó nhiễm Taenia ovis; 4,82% chó nhiễm Multiceps multiceps; 13,25% chó nhiễm Echinococcus granulosus.
Một kết quả nghiên cứu khác của Dubna S. và cs (2007) [31] cho thấy, tỷ lệ nhiễm sán dây Dipylidium caninum dao động từ 0,7% – 1,3%, thấy nhiều ở vùng nông thôn.
Một nghiên cứu khác của Xhaxhiu D. và cs (2010) [39] từ năm 2004 – 2009: mổ khám 111 chó từ các vùng ngoại ô Tirana của Albania để kiểm tra giun sán đường tiêu hóa, phát hiện được 3 loài sán dây là Dipylidium caninum
(65,8%); Taenia hydatigena (16,2%); Echinococcus granulosus (2,7%).
Tylkowska A. và cs (2010) [37] đã kiểm tra 763 mẫu phân chó thu thập ở phía tây của Pomerania (648 mẫu được thu từ khu vực thành phố, 115 mẫu được lấy từ các khu vực nông thôn) từ năm 2006 – 2007 cho thấy, 34,84% chó nhiễm các loài ký sinh trùng, trong đó nhiễm sán dây Dipylidium caninum là 4,07%.
Tuzer E. và cs (2010) [36] đã nghiên cứu hiệu quả của thuốc Praziquantel tiêm để điều trị sán dây ở chó. Tác giả đã tiến hành thí nghiệm trên 26 chó nhiễm sán dây, trong đó có 14 chó nhiễm Dipylidium caninum, 8 chó nhiễm Taenia spp., 2 chó nhiễm Echinococcus granulosus và 2 chó nhiễm cả hai loài Dipylidium caninum, Taenia spp. với liều 0,1 ml/ kg thể trọng. Thí nghiệm được theo dõi chặt chẽ, nhốt riêng từng chó để kiểm tra sự thải phân. Kết quả, sau 2 hoặc 3 ngày dùng thuốc không thấy mẫu phân nào dương tính, không có phản ứng phụ nào xảy ra, hiệu quả tẩy trừ là 100%.
Phần 3
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1. Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu
* Đối tượng nghiên cứu:
- Chó nuôi tại huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên - Bệnh sán dây ở chó.
* Thời gian nghiên cứu:
Từ ngày 18 tháng 06 năm 2014 đến ngày 18 tháng 11 năm 2014.
* Địa điểm nghiên cứu:
- Đề tài được thực hiện ở 4 xã, thị trấn của huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên. - Địa điểm xét nghiệm mẫu: Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
* Vật liệu nghiên cứu:
- Mẫu phân của chó.
- Chó ở các lứa tuổi (mổ khám tìm sán dây). - Kính hiển vi điện tử, kính lúp.
- Thuốc trị sán dây chó: bột hạt cau, Niclosamide, Praziquantel.
3.2. Nội dung nghiên cứu
3.2.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh sán dây ở chó tại các xã của huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán dây ở chó theo thành phần loài (qua mổ khám) - Tỷ lệ nhiễm sán dây chó ở các địa phương (qua xét nghiệm phân) - Tỷ lệ nhiễm sán dây chó theo các tháng (qua xét nghiệm phân) - Tỷ lệ nhiễm sán dây theo lứa tuổi chó (qua xét nghiệm phân) - Tỷ lệ nhiễm sán dây theo giống chó (qua xét nghiệm phân)
3.2.2. Nghiên cứu bệnh lý và lâm sàng bệnh sán dây ở chó
- Tỷ lệ và những biểu hiện lâm sàng của chó bị bệnh sán dây - Bệnh tích đại thể ở cơ quan tiêu hoá của chó bị bệnh sán dây
3.2.3. Thử nghiệm thuốc tẩy sán dây cho chó và đề xuất biện pháp phòng bệnh
- Hiệu lực của một số thuốc tẩy sán dây cho chó - Độ an toàn của thuốc tẩy sán dây cho chó
- Đề xuất biện pháp phòng trị bệnh sán dây cho chó
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1. Phương pháp xác định tình hình nhiễm sán dây ở chó
Bố trí thu thập mẫu được thực hiện theo phương pháp lấy mẫu chùm nhiều bậc. Tiến hành mổ khám 89 con chó tại các cơ sở giết mổ chó của huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên. Đồng thời, thu thập và xét nghiệm 70 – 80 mẫu phân chó ở mỗi xã ở các giai đoạn tuổi khác nhau.
* Phương pháp mổ khám, thu thập và định loại sán dây ở chó
- Phương pháp mổ khám chó
Để tìm sán dây ký sinh ở hệ tiêu hoá, tiến hành mổ khám chó theo phương pháp mổ khám toàn diện cơ quan tiêu hoá, thu thập mẫu sán dây ký sinh ở ruột của chó (Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008) [11].
Cách mổ khám và thu thập sán dây: Dùng kéo nhọn, sắc cắt dọc theo chiều dài của ruột, nạo nhẹ niêm mạc ruột và gạt toàn bộ chất chứa vào cốc thuỷ tinh dung tích 300 ml có chứa nước sạch. Dùng phương pháp lắng cặn để thu thập sán dây. Đếm số lượng sán dây ở mỗi chó.
- Phương pháp thu thập và định loại sán dây ở chó
Sán dây sau khi thu thập được làm chết tự nhiên trong nước lã, sau đó làm sạch bằng nước cất, bảo quản trong cồn 700. Phân loại sơ bộ các loài sán dây đã thu thập được bằng kính lúp và kính hiển vi, căn cứ vào hình thái,
cấu tạo của sán dây trưởng thành theo khoá định loại của Phan Thế Việt và cs (1977) [26], Nguyễn Thị Kỳ (1994) [8]. Việc xác định chính xác thành phần loài sán dây ở đường tiêu hoá chó được thực hiện ở Viện sinh thái và Tài nguyên sinh vật.
* Phương pháp thu thập mẫu phân, xét nghiệm và đánh giá tỷ lệ nhiễm sán dây
- Phương pháp thu thập mẫu phân
Việc thu thập mẫu được tiến hành ngẫu nhiên tại hộ nuôi chó. Số mẫu phân được lấy ở các xã thuộc huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên.
Mẫu phân chó mới thải ra được thu thập ngẫu nhiên vào các buổi sáng, để trong túi nilon buộc kín. Những mẫu xác định được đúng các thông tin sau thì ghi vào nhãn: loại chó, tuổi, tính biệt, trạng thái phân và các biểu hiện lâm sàng của chó, thời gian, địa chỉ. Những mẫu không xác định được đúng các thông tin thì chỉ ghi nhãn: địa điểm, thời gian lấy mẫu.
Các loại mẫu được xét nghiệm ngay trong ngày hoặc xét nghiệm sau khi bảo quản theo quy trình bảo quản mẫu trong nghiên cứu ký sinh trùng học.
- Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm sán dây :
Xét nghiệm tìm đốt sán do chó thải ra trong phân theo phương pháp gạn rửa sa lắng: Cho từng mẫu phân vào cốc thuỷ tinh, thêm 5 - 10 lần nước lã sạch, khuấy tan rồi để yên 15 - 20 phút cho lắng xuống, gạn nước trên đi, lại cho nước vào, rửa đi rửa lại nhiều lần cho đến khi nước trong suốt, cho cặn vào đĩa petri, đặt trên tờ giấy màu đen để quan sát bằng mắt thường và kính lúp tìm các đoạn và các đốt sán dây. Nếu có đốt sán thì dùng bút lông hoặc lông gà khời ra. Những mẫu phân tìm thấy đốt sán dây được xác định là có nhiễm (+), ngược lại là không nhiễm (-).
* Phương pháp xác định cường độ nhiễm sán dây
- Cường độ nhiễm sán dây được xác định bằng số lượng sán dây ký sinh/chó bằng phương pháp mổ khám thu thập và đếm số lượng sán ký sinh ở mỗi chó, đồng thời đếm số lượng đốt sán dây/lần thải phân bằng phương pháp soi kính lúp, đếm tất cả những đốt sán phát hiện trong mẫu.
- Cường độ nhiễm sán dây qua xét nghiệm phân được xác định bằng cách đếm số lượng đốt sán dây/lần thải phân (soi kính lúp, đếm tất cả những đốt sán phát hiện trong mẫu phân).
3.3.2. Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm sán dây chó theo các tháng
Thu thập mẫu phân chó và xét nghiệm tìm đốt sán thải ra trong phân của các loại chó khác nhau tại các xã trong các tháng: 6, 7, 8, 9, 10.
3.3.3. Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm sán dây theo lứa tuổi chó
Thu thập mẫu phân chó và xét nghiệm tìm đốt sán thải ra trong phân của chó ở 4 lứa tuổi khác nhau tại các xã của huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên: ≤ 2 tháng tuổi, > 2 – 6 tháng tuổi, > 6 – 12 tháng tuổi, > 12 tháng tuổi.
3.3.4. Phương pháp xác định tỷ lệ nhiễm sán dây theo giống chó
Tiến hành thu thập mẫu, xét nghiệm tìm đốt sán thải ra trong phân của chó ở 3 giống chó: chó địa phương, chó lai, chó ngoại được nuôi ở huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên.
3.3.5. Phương pháp theo dõi triệu chứng lâm sàng của chó bị bệnh sán dây
Quan sát, theo dõi tất cả những chó có kết quả kiểm tra phân đã nhiễm sán dây.
Sử dụng phương pháp chẩn đoán cơ bản (Chu Đức Thắng và cs, 2007 [21]). Trực tiếp quan sát trạng thái cơ thể và các biểu hiện của những chó nhiễm sán dây, kết hợp hỏi chủ nuôi chó về một số thông tin cần thiết, từ đó xác định được các triệu chứng của chó bị bệnh sán dây.
3.3.6. Phương pháp bố trí xác định bệnh tích đại thểở cơ quan tiêu hóa do sán dây gây ra sán dây gây ra
- Thực hiện trên những chó mổ khám thấy nhiễm sán dây ở cường độ nặng. - Mổ khám những chó bị nhiễm sán dây đường tiêu hoá, quan sát bằng mắt thường và kính lúp để xác định bệnh tích ở ruột non, ruột già, chụp ảnh vùng có bệnh tích điển hình.
3.3.7. Phương pháp đánh giá hiệu lực tẩy sán dây, độ an toàn của thuốc thử nghiệm thử nghiệm
* Phương pháp đánh giá hiệu lực tẩy sán dây trên diện hẹp
Thử nghiệm thuốc tẩy sán dây cho chó trên diện hẹp được thực hiện ở 15 chó nhiễm sán dây nặng (qua xét nghiệm phân).
Bố trí 3 lô thí nghiệm, 1 lô đối chứng (mỗi lô gồm 5 chó): + Lô 1: dùng Niclosamid với liều lượng 100mg/kg TT + Lô 2: dùng Praziquantel với liều lượng 10mg/kg TT + Lô 3: bột hạt cau với liều lượng 2000mg/kg TT
Trước khi dùng thuốc, nhốt riêng mỗi chó ở một cũi, theo dõi, xác định cường độ nhiễm bằng cách đếm số lượng đốt sán/lần thải phân. Sau khi dùng thuốc, xét nghiệm phân chó bằng phương pháp gạn rửa sa lắng tìm đốt sán ở các ngày thứ 13, 14, 15. Từ đó đánh giá được hiệu lực tẩy của thuốc:
- Nếu thấy số lượng đốt sán dây/lần thải phân không giảm so với trước dùng thuốc, thì đánh giá thuốc không có hiệu lực đối với sán dây.
- Nếu vẫn thấy đốt sán dây nhưng số lượng bình quân/lần thải phân rất ít thì đánh giá thuốc có hiệu lực nhưng chưa triệt để.
- Nếu không thấy đốt sán dây trong phân thì đánh giá là thuốc có hiệu lực triệt để.
* Phương pháp xác định độ an toàn của thuốc
- Độ an toàn của thuốc được đánh giá bằng kết quả theo dõi trạng thái cơ thể, sự vận động, ăn uống và một số phản ứng khác của cơ thể chó trước và sau khi dùng thuốc một giờ.
* Phương pháp đánh giá hiệu lực tẩy sán dây trên diện rộng
Sau khi đánh giá hiệu lực, độ an toàn của thuốc trên diện hẹp, tiến hành dùng thuốc tẩy sán dây cho chó với số lượng gồm 40 con chó. Trước khi dùng thuốc, xác định tỷ lệ nhiễm sán dây. Sau khi dùng thuốc 15 ngày xét nghiệm lại phân, đánh giá hiệu lực tẩy của thuốc:
- Nếu số mẫu phân xét nghiệm có tỷ lệ nhiễm sán dây cao thì đánh giá thuốc không có hiệu lực đối với sán dây.
- Nếu số mẫu phân xét nghiệm có tỷ lệ nhiễm sán dây thấp thì đánh giá thuốc có hiệu lực nhưng chưa triệt để.
- Nếu không còn mẫu nào nhiễm sán dây thì đánh giá thuốc có hiệu lực triệt để.
* Sử dụng thuốc có hiệu lực để tẩy sán dây đại trà cho chó
Sau khi thử nghiệm thuốc trên diện hẹp, đánh giá hiệu lực và độ an toàn của thuốc tẩy trên diện rộng, đưa ra kết luận về loại thuốc tẩy sán dây cho chó có hiệu quả và an toàn. Tiến hành sử dụng thuốc có hiệu lực tẩy sán dây đại trà cho chó ở huyện Phú Bình.
Kết quả sau khi tẩy được xác định bằng việc kết luận số chó không nhiễm sán dây (-) thông qua việc xét nghiệm phân như đã trình bày ở trên.
3.4. Phương pháp xử lý số liệu.
Số liệu thu được được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học của (Nguyễn Văn Thiện, 2008 [22]), trên phần mềm Microsoft Excel.
* Đối với các tính trạng định tính như: tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm sán, hiệu lực của thuốc, độ an toàn của thuốc tẩy... được tính theo công thức
- Số trung bình cộng: P m n = Trong đó: m là số chó nhiễm sán dây n là tổng số mẫu xét nghiệm
- Sai số của số trung bình: p q p.q p(1 p) m m n n − = =± =±
Trong đó: mp và mq: Sai số của p và q.
p và q: Tỷ lệ % chó nhiễm và không nhiễm sán dây. n: Dung lượng mẫu
* Đối với các tính trạng định lượng như: Số lượng sán dây và số lượng
đốt sán dây… được tính theo công thức
- Số trung bình cộng: X = n xn x x1+ 2+...+ = n x ∑
Trong đó: ∑ x: là tổng các giá trị của x n: là dung lượng mẫu - Độ lệch tiêu chuẩn: 2 2 X ( X ) X n n 1 s − = ± − ∑ ∑
- Sai số của số trung bình:
+ Với n ≤ 30: x x S m n - 1 = ± + Với n > 30: x x S m n = ±
Trong đó: mx: Sai số của số trung bình
x
s : Độ lệch tiêu chuẩn n: Dung lượng mẫu
Phần 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh sán dây ở chó tại huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên Bình, tỉnh Thái Nguyên
4.1.1. Tình hình nhiễm sán dây ở chó tại các xã của huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên Thái Nguyên
4.1.1.1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán dây ở chó theo thành phần loài qua mổ khám.
Bằng phương pháp mổ khám không toàn diện cơ quan tiêu hóa của 89 chó ở các cơ sở giết mổ chó tại huyện Phú Bình, tỉnh Thái Nguyên, chúng tôi đã xác định được tỷ lệ, cường độ nhiễm sán dây của chó theo thành phần loài sán dây thu thập được được thực hiện ở Viện sinh thái và Tài nguyên sinh vật chúng tôi đã xác định được 2 loài sán dây ký sinh ở chó.
Kết quả được trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán dây ở chó theo thành phần loài (qua mổ khám)
Loài sán dây Số chó mổ khám (con) Số chó nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Cường độ nhiễm (số lượng sán/chó) Dipylidium caninum 89 27 30,34 1 - 40 Spirometra erinaceieuropaei 16 17,98 1-8 Kết quả bảng 4.1 cho thấy:
Đã phát hiện được 2 loài sán ký sinh ở chó Phú bình đó là: Spirometra erinaceieuropaei, Dipylidium caninum.
Việc mô tả và đo vẽ được thực hiện từ mẫu vật thu được. Hiện mẫu vật đang được lưu ở phòng Ký sinh trùng - Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật.
Trong đó loài sán dây Dipylidium caninum có tỷ lệ nhiễm là 30,34%, với cường độ nhiễm dao động từ 1- 40 sán dây/ chó. Loài sán dây Spirometra erinaceieuropaei có tỷ lệ nhiễm thấp hơn với 17,98% và cường độ nhiễm dao động từ 1 – 8 sán dây/chó.
Như vậy, sán dây loài Dipylidium caninum có số lượng ký sinh ở ruột