NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5.3. Phương pháp xét nghiệm mẫu phân và thu noãn nang
+ Phương pháp Fulleborn:
Cho 5 Ờ 10 gram phân chim trĩ cần xét nghiệm vào cốc, cho lượng nước muối bão hòa gấp 10 Ờ 20 lần phân, khuấy ựều. Lọc bỏ phân qua rổ lọc có lưới thép, lọc vào một cốc khác. đổ dịch ựã lọc vào lọ thủy tinh (miệng nhỏ hơn ựáy), tiếp tục thêm lượng nước muối bão hòa sao cho ựến miệng lọ (tránh ựể tràn ra ngoài). để yên tĩnh khoảng 20 phút ựến 30 phút, dùng vòng vớt có kắch thước 0,3 mm vớt phần váng bên trên ựặt lên phiến kắnh rồi soi dưới kắnh hiển vi tìm noãn nang.
Cách tắnh số lượng oocyt/gam phân: Cân 3 gam phân cho vào lọ, cho nước muối bão hòa tới vạch 45ml rồi lắc ựều ựến khi phân tan hết sau ựó lọc qua lưới lọc bỏ phần cặn, hút phần dung dịch lên hai buồng ựếm ( sử dụng buồng ựếm Mc.Master ). đếm số noãn nang trong 2 buồng ựếm theo nguyên tắc ựếm 2 cạnh.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 40 Số noãn nang có trong 1 gam phân = 45 x A
0.3 x 3
(A là số noãn nang ựếm ựược)
+ Phương pháp Daugschies (lắng cặn và phù nổi noãn nang)
Cho phân vào cốc, thêm lượng nước vừa phải vào phân rồi khuấy ựều. Lọc bỏ phân qua rổ lọc có lưới thép, phần dịch lọc thu ựược ựem ly tâm với tốc ựộ 4000 vòng/phút trong 5 phút, sau ựó loại bỏ phần nước trong bên trên, cho nước muối bão hòa, khuấy ựều, ựể yên tĩnh 20 phút, sau ựó ựem ly tâm như trên, loại bỏ cặn lấy phần dịch trong bên trên rồi cho thêm nước vào ựó tiếp tục ựem ly tâm như trên. đổ loại bỏ nước trong bên trên, hút dung dịch K2Cr2O7 2,5% cho vào phần kết tủa thu ựược (noãn nang), rồi hút ra hộp lồng Petri. Dùng miếng nilon có ựục nhiều lỗ nhỏ, bịt vào miệng hộp lồng Petri, cố ựịnh chặt lại ựem ựể tủ ấm ở 29C/20-22h, thỉnh thoảng lắc nhẹ. Kiểm tra tình trạng phát triển của noãn nang, nếu noãn nang phát triển tốt thì chuyển toàn bộ dung dịch ở hộp lồng Petri vào lọ thủy tinh (lúc này noãn nang ở dạng sporulation Ờ dạng dùng ựể gây bệnh thực nghiệm), bảo quản ở nhiệt ựộ 4 Ờ 6C cho ựến khi dùng. Tuy nhiên trong 3 tháng nên gây bệnh thực nghiệm qua gà 1 lần ựể ựảm bảo sức gây bệnh.
+ Phương pháp ựánh giá tỷ lệ nhiễm cầu trùng:
Tỷ lệ nhiễm cầu trùng (%) = (Số mẫu dương tắnh/Số mẫu kiểm tra) 100 + Phương pháp xác ựịnh cường ựộ nhiễm cầu trùng:
Cường ựộ nhiễm ựược xác ựịnh bằng số lượng Oocyst/gam phân (ựếm trên buồng ựếm Mc.Master và quy ựịnh cường ựộ nhiễm như sau:
- Số lượng Oocyst/gam phân ≤ 4000: Quy ựịnh cường ựộ nhiễm nhẹ (+) - Số lượng Oocyst/gam phân ≤ 8000: Cường ựộ trung bình (++)
- Số lượng Oocyst/gam phân > 8000: Quy ựịnh cường ựộ nặng (+++)