Có nhiều phương pháp nghiên cứu ựể xác ựịnh sudan (I, II, III và IV) trong trứng, trong ựó có Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) (He, L. và cộng sự., 2007), Sắc ký khắ khối phổ (GC-MS) (He, L. và cộng sự., 2007) và sắc ký lỏng khối phổ (đậu Ngọc Hào và cộng sự, 2008)
1.3.1.1. Phương pháp sắc ký khắ khối phổ GCMS (Gas Chromatography Mass Spectometry).
Là một trong những phương pháp sắc ký hiện ựại hiện nay với ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu cao và ựược sử dụng trong các nghiên cứu và phân tắch kết hợp. Thiết bị GCMS ựược cấu tạo thành 2 phần: phần sắc ký khắ (GC) dùng ựể phân tắch hỗn hợp các chất và tìm ra chất cần phân tắch, phần khối phổ (MS) mô tả các hợp phần riêng lẻ bằng cách mô tả số khối. Bằng sự kết hợp 2 kỹ thuật này GCMS, các nhà hoá học có thể ựánh giá, phân tắch ựịnh tắnh và ựịnh lượng và có cách giải quyết ựối với một số hóa chất. Ngày nay, người ta ứng dụng kỹ thuật
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 23 GCMS rất nhiều và sử dụng rộng rãi trong các nghành như y học, môi trường, nông sản, kiểm nghiệm thực phẩmẦ
1.3.1.2. Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (Liquid Chromatography Mass Spectometry)
Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ là một thiết bị lý tưởng cho các phòng thắ nghiệm, là phương pháp ựược dùng trong phân tắch vết và các hợp chất cần nhận danh chắnh xác vì trong những ựiều kiện vận hành nhất ựịnh ngoài thời gian lưu ựặc trưng, hóa chất còn ựược nhận danh bằng khối phổ của nó. độ nhạy của phương pháp này còn tùy thuộc vào hợp chất cần phân tắch và giao diện sử dụng. Trong sắc ký lỏng ghép khối phổ, hỗn hợp chất phân tắch sau khi tách ra khỏi cột sẽ ựi qua một ựường truyền ựến ựầu dò khối phổ. Cột sắc ký lỏng cho phép tách chất cần quan tâm, khối phổ cho phép tách ion cần quan tâm và cho biết phân tử lượng của chất cần phân tắch.
Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao năng HPLC (High Performance Liquid Chromatography
Sắc ký lỏng hiệu cao năng là một phương pháp chia tách trong ựó pha ựộng là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn ựã ựược phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang ựã ựược biến bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ. Trong phương pháp này, ựể tăng hiệu năng tách của cột sắc ký, người ta sử dụng chất nhồi cột với kắch thước rất nhỏ. Do kắch thước hạt rất nhỏ, ựể dung môi có thể chạy qua với tốc ựộ dòng tối ưu, người ta phải dùng bơm nén với áp suất cao ựể ựẩy dòng dung môi qua cột. Vì thế nên phương pháp ựược gọi là sắc ký lỏng cao áp (hay sắc ký lỏng hiệu năng cao).
Các loại cột HPLC phân tắch thông dụng hiện nay sử dụng các hạt nhồi có kắch thước 3,7ộm. Gần ựây, các hạt nhồi có kắch thước hạt 1,7 ộm ựã ựược sử dụng, nên cột sắc ký loại này có hiệu năng tách cao hơn loại cột 3,7 ộm rất nhiều ( tới 1000 atm) ựể bơm dung môi. Nên sắc ký sử dụng áp suất cao này ựược gọi là sắc ký lỏng siêu hiệu năng UPLC (Ultra performance liquid chromatography).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 24 Có nhiều loại Detector ựược sử dụng trong việc phát hiện các chất tách ra khỏi cột sắc ký lỏng siêu hiệu năng, trong ựó có detector khối phổ MS, ngoài việc cho biết các chất ra khỏi cột thời gian trên sắc ký ựồ truyền thống, còn cho biết thêm những thông tin quan trọng khác về chất ựược tách ra, ựó là phổ của các chất. Các thông tin này rất có ắch và tăng ựộ tin cậy của việc nhận ựịnh các chất, so sánh với chất chuẩn. Hệ thống này có thể ghép nối nhiều detector với nhau. Phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu năng 2 lần khối phổ ( UPLC-MS/MS)
UPLC-MS/MS là phương pháp sắc ký lỏng khối phổ trong ựó dùng sắc ký lỏng siêu hiệu nằng ghép 2 lần khối phổ.
→ Ưu ựiểm của phương pháp này là: có thể phân tắch ựược nhiều loại hợp chất khác nhau, với hiệu suất cao hơn, ựộ phân giải tốt hơn, và rút ngắn hơn thời gian tách. Hệ thống gồm cột sắc ký với kắch thước hạt 1,7 ộm, detector 3 tứ cực, với chế ựộ quét MRM (UPLC-MS/MS) cung cấp một kỹ thuật cao cho việc xác ựịnh thuốc nhuộm Sudan trong sản phẩm thực phẩm vì ựộ nhạy cao, thời gian phân tắch rất ngắn, và khả năng nhận dạng ựiển hình (DU, Z. and SUN, S., 2007).