Hình 1.14: Qui trình tinh sạch axid nucleic bằng hạt từ nano bọc silica
Huyết thanh Đệm ly giải
MagSi nano
Đệm rửa
Đệm chiết đẩy
Thu axit nucleic tinh sạch
LuËn v¨n th¹c sÜ Ph¹m ThÞ Trµ
Khoa Sinh häc 29 Khãa 2009 - 2011
1: Phá vỡ màng tế bào, giải phóng axit nucleic 2: Gắn axit nucleic với hạt từ nano
3: Rửa nhằm loại bỏ protein và tạp chất 4: Tách axit nucleic dƣới dạng tinh sạch
Phƣơng pháp này đƣợc tiến hành dựa trên nguyên lý giống với phƣơng pháp sử dụng màng xốp silica. Điều khác biệt là thay vì sử dụng màng xốp silica, thì phƣơng pháp này sử dụng hạt từ nano đƣợc chức năng hóa bề mặt bằng silica (hạt MagSi nano), đây là một cải tiến mang tính đột phá. Dùng nam châm từ thay cho máy ly tâm tức các bƣớc thí nghiệm không cần đến ly tâm và có thể thao tác cùng một lúc với nhiều mẫu bệnh phẩm. Các phân tử axít nucleic sau khi liên kết với hạt nano từ bọc silica sẽ đƣợc giữ lại và tách riêng ra khỏi protein. Axít nucleic sẽ thu đƣợc dƣới dạng tinh sạch khi đƣợc tách ra khỏi hạt nano từ bọc silica bằng dung dịch đệm có nồng độ muối thích hợp hoặc bằng nƣớc cất.
Ưu, nhược điểm của phương pháp
Hiệu quả tinh sạch axít nucleic cao, không bị lẫn các dung môi hữu cơ, hạt nano từ bọc silica làm tăng diện tích bề mặt tiếp xúc nên axít nucleic sẽ thu đƣợc nhiều hơn. Phƣơng pháp này cho phép tinh sạch trên một số lƣợng lớn mẫu bệnh phẩm một các nhanh chóng do có thể sử dụng pipet đa kênh và không cần dùng đến máy ly tâm, vì vậy rất tiết kiệm thời gian và chi phí đầu tƣ ít. Điều đặc biệt, việc sử dụng hạt nano từ cho phép tiến hành tinh sạch một các tự động nhờ robot.
Tuy nhiên, chỉ một số ít công ty công nghệ sinh học hàng đầu nhƣ Roche Diagnostic, Promega, Qiagen nắm giữ bí mật chế tạo hạt nano từ bọc silica, nên giá thành của bộ kít sử tách chiết axit nucleic sử dụng phƣơng pháp này, đặc biệt là máy tự động tách chiết axít nucleic đã thƣơng mại hóa là rất đắt.