Nguyờn tắc: trong điều kiện dinh dưỡng thớch hợp và mụi trường nuụi cấy tĩnh cỏc chủng vi sinh vật hỡnh thành biofilm trờn bề mặt giỏ thể. Phỏt hiện, quan sỏt biofilm bằng cỏch nhuộm với tớm kết tinh – là chất cú khả năng bắt màu với tế bào. Tiến hành thớ nghiệm theo phương phỏp của O’Toole và cộng sự [46], [47]. Cỏc chủng vi khuẩn được lắc kớch hoạt trong bỡnh tam giỏc chứa mụi trường LB trong 24 giờ ở 37oC sao cho mật độ tế bào tại bước súng 620 nm (OD620) ở vào khoảng 0,2 đến 0,3. Hỳt 100 àl dịch nuụi cấy vi khuẩn bổ sung vào 700 àl LB lỏng trong cỏc ống eppendorf đó khử trựng và ủ trong điều kiện tĩnh ở 37oC.
Sau 24 giờ cỏc dịch nuụi cấy được loại bỏ khỏi cỏc ống eppendorf. Đỏnh giỏ mật độ tế bào sống trụi nổi trong mụi trường bằng phương phỏp so màu ở bước súng 620 nm dịch nuụi cấy vi khuẩn.
Ngụ Thị Kim Toỏn 26 K19 – Sinh học thực nghiệm
Quan sỏt khả năng hỡnh thành biofilm: Mỗi ống eppendorf được rửa sạch 2 lần bằng nước cất khử trựng. Bổ sung vào mỗi ống eppendorf 1 ml dung dịch tớm kết tinh 1% và giữ trong 25 phỳt ở nhiệt độ phũng. Loại bỏ dung dịch nhuộm và quan sỏt sự bắt màu của cỏc tế bào bỏm trờn trờn thành ống với tớm kết tinh.
Đỏnh giỏ mật độ tế bào trong biofilm: Sau khi rửa sạch 2 lần bằng nước cất khử trựng cỏc tinh thể tớm bỏm trờn thành eppenodorf đươc hũa tan trong 1 ml etanol 70%. Mật độ tế bào trong biofilm được xỏc định bằng cỏch đo độ hấp thụ tại bước súng 570 nm.