Kết quả phân tích RFLP đoạn gen chứa vị trí 3243 ADN ty thể

Để xác định đột biến điểm A3243G, chúng tôi sử dụng phƣơng pháp RFLP. Chúng tôi đã tiến hành xử lý sản phẩm PCR đoạn gen 3243 với enzyme giới hạn

39

Trong trƣờng hợp không có đô ̣t biến thì đoa ̣n gen 218 bp có chứa hai vị trí nhận biết của enzyme, và sẽ bi ̣ cắt thành ba đoa ̣n nhỏ hơn có kích thƣớc 22 bp, 27 bp và 169 bp. Trong trƣờng hợp đô ̣t biến A  G xảy ra thì đoa ̣n gen 218 bp sẽ có thêm một vị trí nhận biết nữa của enzyme giới hạn, kết quả là đoạn gen sẽ bị cắt thành các đoạn nhỏ có kích thƣớc là 22 bp, 27 bp, 72 bp và 97 bp. Sản phẩm của quá trình xử lý với enzyme cắt đƣợc điện di kiểm tra cùng với sản phẩm PCR trên polyacrylamide 6%, nhuộm ethidium bromide và quan sát dƣới tia UV bƣớc sóng 245 nm (hình 9).

Hình 9. Ảnh điện di sản phẩm cắt đoạn 3243 vớ i enzyme HaeIII.

(điện di trên gel polyacrylamide 6%, nhuộm ethidium bromide). Giếng 1: Thang chuẩn ADN 100bp

Giếng 3, 5: sản phẩm PCR từ mô u Giếng 7: sản phẩm PCR từ mô lân cận u

Giếng 2, 4: sản phẩm sau cắt bằng HaeIII từ mẫu mô u

Giếng 6: sản phẩm sau cắt bằng HaeIII từ mẫu mô lân cận u

Từ kết quả thu đƣợc trong hình chúng tôi nhận thấy sản phẩm PCR sau khi cắt bằng HaeIII trên bản điện di xuất hiện băng kích thƣớc 169 bp. Hai băng kích

40

thƣớc 22 bp, 27 bp không quan sát đƣợc do gel không phân tách đƣợc. Nhƣ vậy ở các giếng này không xuất hiện đột biến. Chúng tôi đã tiến hành cắt enzym với 61 cặp mẫu, kết quả thu đƣợc không có đột biến.

Đột biến A3243G trên gen MT -TL1 mã hóa cho tRNALeu (UUR)

đã đƣơ ̣c phát hiện ra đầu tiên nhƣ là mô ̣t nguyên nhân di truyề n của bệnh MELAS [31]. Cho đến nay các nghiên cứu về đột biến A3243G chỉ tập trung vào một số bệnh cơ thần kinh, tiểu đƣờng. Chỉ có một nghiên cứu duy nhất phát hiện đột biến A3243G trên bệnh nhân ung thƣ trực tràng. Lorenc và cs (năm 2003) khi nghiên cứu các đột biến ADN ty thể gồm đột biến tRNA, rRNA và một số gen ty thể trên một số mẫu ung thƣ, đã phát hiện một mẫu ung thƣ trực tràng có đột biến A3243G dạng đồng nhất (homoplasmic) [46]. Nhƣ vậy có thể thấy rằng đột biến A3243G là khá hiếm gặp ở bệnh ung thƣ.