3. Nội dung của đề tài
3.3. Kết quả tách protein tổng số
Protein cry3 có hình thoi có trọng lƣợng 66-73 kDa, có tác dụng gây độc với ấu trùng thuộc Bộ Hai cánh [86]. Các dòng rễ tơ khoai lang có kết quả PCR dƣơng tính, sau 30-45 ngày nuôi cấy invitro trong môi trƣờng WPM lỏng, đƣợc sử dụng để tách protein tổng số theo phƣơng pháp trong mục 2.3. Hàm lƣợng protein tách chiết đƣợc xác định theo phƣơng pháp Bradford 1976.
Để xác định hàm lƣợng protein trong mẫu, trƣớc tiên chúng tôi tiến hành xây dựng phƣơng trình tuyến tính giữa nồng độ protein chuẩn và các giá trị OD595 tƣơng ứng đo đƣợc. Với hệ số tƣơng quan R2
= 0,98748. Chúng tôi thu đƣợc phƣơng trình tuyến tính nhƣ sau.
Y = 0,2748x + 0,022
Từ phƣơng trình tuyến tính trên và các giá trị OD595 đo đƣợc từ các mẫu chúng tôi xác định đƣợc hàm lƣợng protein có trong các mẫu đƣợc trình bày trong bảng sau. Bảng 3.5. Hàm lƣợng protein trong các dòng KB1 Mẫu OD595 Protein (mg/ml) 1 0,000 0,00 2 0,071 0,25 3 0,173 0,50 4 0,345 1,00 5 0,689 2,50 6 0,113 0,404 7 0,272 0,910
Trong đó: Từ mẫu 1 đến 5: protein chuẩn BSA
Mẫu 6: Dòng khoai lang có kết quả PCR âm tính Mẫu 7: Dòng khoai lang có kết quả PCR dƣơng tính
Qua bảng trên cho thấy protein trong mẫu có hàm lƣợng lần lƣợt là 0,404 và 0,910mg/ml. Hàm lƣợng chất dinh dƣỡng và protein tích lũy trong rễ phụ thuộc
49
nhiều vào điều kiện sinh trƣởng của khoai lang nhƣ thời gian, cƣờng độ chiếu sáng, biến động của nhiệt độ, môi trƣờng nuôi cấy … [12], [88]. Đồng thời các yếu tố nhiệt độ, các chất hòa tan… cũng ảnh hƣởng tới kết quả tách chiết protein trong các mẫu thực vật [4]. Các mẫu protein thu đƣợc từ trên đƣợc sử dụng trong đánh giá hoạt lực diệt côn trùng lên sâu non bọ hà.