V oT Hanh, Le Bich Phuong, Tran Thanh Phong, Le Tan Hung, Truong T Hong an
PHÂN LẬP VÀ THU NHẬN enzym phytase TỪ MỘT SỐ
NẤM MỐC Aspergillus TRÊN MƠI TRƯỜNG
NÊN MEN BỀ MẶT
Nguyễn Duy Long, Nguyễn Thị Mỹ Hạnh, Hoàng Quốc Khánh
Phịng Vi Sinhứng dụng, Viện Sinh học Nhiệt đới
MỞ ĐẦU
Photpho là nguyên tố thiết yếu cần thiết cho sự tăng trưởng, phát triển và sinh sản của động vật. Tuy nhiên, cĩ khoảng 60-75% photpho trong ngũ cốc và hạt dầu trong thức ăn
của động vật được tìm thấy ở dạng phytat (inositol hexaphosphat) hoặc axit phytic. Động
vật khơng thể hấp thụ photpho trong phytat vì chúng khơng cĩ enzym phytase trong đường
ruột. Vì thế phần lớn photpho được tìm thấy trong phân của động vật. Ngoài ra những chất dinh dưỡng khác như protein, Fe2+, Ca2+, Mg2+, Zn2+ cũng sẽ bị liên kết vào cấu trúc của axit phytic. Do đĩ cơ thể động vật khơng thể hấp thụ được các ion này. Photpho trong phân của động vật được hấp thụ vào đất, chúng cần thiết cho sự phát triển của thực vật. L ượng photpho dư thừa khơng được cây hấp thụ sẽ bị cuốn trơi ra ao, hồ, sơng, suối kích thích sự
phát triển của phiêu sinh thực vật (tảo) gây ra hiện tượng phú dưỡng hố. Ngoài ra, sự thiếu
hụt oxy sẽ làm cá chết và giảm sự đa dạng của hệ sinh vật cĩ lợi trong n ước.
Phytase là một trong số các enzym hiện đang rất đ ược quan tâm. Phytase thủy phân
liên kết giữa photphovà vịng phytat sẽ phĩng thích photpho vơ cơ. Việc bổ sung phytase
vào thức ăn gia súc giúp tận dụng tối đa nguồn photpho trong các loại nguyên liệu chế biến
vì hệ vi sinh vật đường ruột của động vật hầu như khơng cĩ khả năng sinh tổng hợp phytase, và đồng thời giúp giảm chi phí bổ sung l ượng photpho vơ cơ cần thiết vào thức ăn gia súc. Hơn thế nữa, phytase cịn giúp giảm thiểu ơ nhiễm photpho vào mơi trường do chất
thải động vật. Enzym phytase được nghiên cứu trên nhiều đối tượng khác nhau như nấm
men, nấm mốc và vi khuẩn nhưng nhiều nhất vẫn là trên các loại nấm mốc đặc biệt là Aspergillus sp. vì khả sinh tổng hợp enzym phytase cao và cĩ thể chịu được pH thấp.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Các chủng Aspergillus được phân lập từ các loại men r ượu (men cơm rượu, men rượu)
và một số chủng Aspergillus khác (A.aculeatus, A.awamori, A.carbonarius, A.ellipticus,
A.ficuum, A.flavus, A.niger NRRL -363, A.ochraceus A175, A.oryzae, A.phoenisis, A.tubingensis) từ bộ sưu tập giống của phịng Vi sinhứngdụng- Viện Sinh học Nhiệtđới trên mơi trường PGA .
Quá trình nuơi cấy và tách chiết enzyme phytase được thực hiện theo quy trình dưới
(Hình 1). Enzym phytase được phân tích hàm lượng protein theo phương pháp Bradford.
Hoạt tính enzym phytase được xác định trên cơ chất sodium phytate (một đơn vị hoạt tính phytase (U) được định nghĩa là lượng phytase giải phĩng được 1 µmol photphat vơ cơ trong
một phút từ sodium phytat ở 37oC, pH5,5). Quá trình khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ, pH đến hoạt tính enzym phytase đ ược thực hiện trong dải nhiệt độ từ 30-950C, trong đệm
Glycin: 2,5pH, trong Sodium acetat: 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 5,5, trong đệm Imidazol-HCl: 6,0; 6,5; 7,0, trong đệm Tris-HCl: 7,5; 8,0; 8,5; 9,0. Enzym phytase đư ợc phân tích trên gel
polyacrylamide theo phương pháp SDS-PAGE.
KẾT QUẢ