Phương pháp

V oT Hanh, Le Bich Phuong, Tran Thanh Phong, Le Tan Hung, Truong T Hong an

2. Phương pháp

 Phương pháp phân lập và giữ giống: các mẫu thí nghiệm được phân lập bằng phương pháp Koch lần lượt trên cả ba mơi trường A, B và C, nuơi ở các nhiệt độ

cần thiết và tiếp tục làm thuần cũng trên mơi trường phân lập. Chọn các khuẩn lạc

to, trịn cĩ màu từ vàng, cam đến đỏ, quan sát dưới kinh hiển vi cĩ hình thái của

nấm men (cĩ nhân điển hình). Giữ giống trên mơi trường thạch malt ở nhiệt độ 50C. Cấy chuyền định kỳ sau 2 tuần.

 Các đặc điểm sinh lý, sinh hĩa v à định loại nấm men theo các khố phân loại của

Lodder et al. [4]

 Khảo sát khả năng sử dụng các nguồn carbohydrate, nguồn nitrate và một số các

phản ứng sinh hĩa: dùng các mẫu test ID 32 E của hãng BioMérieuxsa (Pháp) kết

hợp với các thí nghiệm kiểm chứng trên thạch đĩa và trongống nghiệm.

 Nuơi cấy bề mặt: theo quy mơ phịng thí nghiệm trong điều kiện vơ tr ùng, được tiến

hành trên hai mức, hoạt hĩa giống trên máy lắc và nuơi bề mặt trong các khay nhựa

PP chịu được nhiệt độ thanh trùng.

 Khi chọn nấm men cĩ khả năng phát triển tích lũy sinh khối nhanh tr ên mơi trường

nghiên cứu, chúng tơi xác định h àm lượng protein sau khi phát hiện màu bằng

thuốc thử Foling (O. H. Lowry et al., 1951) .

 Nguyên liệu sau lên men qua lọc thơthu dịch và ly tâm với tốc độ 6.000vịng/ phút trong 20 phút, tách sinh khối tế bào nấm men mang xác đị nh độ ẩm để quy về khối lượng sinh khối tế bào khơ thu được trong 1kg mơi trường.

 Khảo sát tỷ lệ giống theo ph ương pháp đếm khuẩn lạc CFU và đo mật độ quang

OD. Giống được hoạt hố trên mơi trường glucose 4% trên máy lắc ngang trong 24

giờ. Tỷ lệ giống cấy vào đạt 8.107- 10.107 CFU/ml/ 100g mơi trư ờng.

 Xác định hàm lượng protein tổng theo ph ương pháp Micro-Kjeldalh.

 Xác định hàm lượng chất béo theo phương pháp Soxlet.

 Các thí nghiệm được lặp lại 3 lần.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN1. Đặc điểm sinh học 1. Đặc điểm sinh học

Từ 64 mẫu phân lập, bước đầu chúng tơi tuyển chọn đ ược 17 chủng nấm men sinh

sắc tố từ kem, hồng cam đến đỏ cam , trong đĩ cĩ 8 chủng cĩ các đặc điểm nh ư: - Vết cấy màu hồng do sinh sắc tố carotenoid.

- Khơng lên men các loại đường.

- Khơng đồng hĩa Inositol.

- Sinh enzyme urease.

- Khơng tạo thành hợp chất loại tinh bột.

Theo khĩa phân loại của Lodder, chúng tơi đã chọn được 8 chủng thuộc chi

Rhodotorula và kết quả mơ tả hình thái tế bào, khuẩn lạc như sau:

Bảng1: Mơ tả đặc điểm tế b ào, khuẩn lạc của 8 chủng nấm men thuộc c hi Rhodotorula Đặc điểm Chủng Nguồn phân lập Hình dạng tế bào Mơ tả khuẩn lạc Kích thước khuẩn lạc (mm)

MN 1 Đất vườn Hình dài Màu hồng cam hay đỏ cam , bề mặt nhẵn, bĩng sáng, mép khơng cĩ răng cưa, tâm khu ẩn lạc nhơ lên.

7 - 10

MN 5 Vỏ táo Hình trịn Màu hồng hay cam, to, trịn bề mặt mịn, nhẵn bĩng, mép khơng răng cưa, dày .

10 - 20

MN 7 Nước

biển

Hình trịn cầu

Màu vàng kem hay hồng cam, trịn, bề mặt khơ mịn, mờ đục, mép khơng răng c ưa, khuẩn lạc dày ở tâm.

5 – 15

MN 8 Mía Hình trịn Màu cam đến đỏ cam, to trịn, bề mặt ghồ ghề, xếp mí,mép khơng cĩ răng cưa, tâm khu ẩn lạc dày đặc các nếp