- Phòng bệnh:
3.4.4.Phương pháp xác ựịnh serotype của các chủng vi khuẩn phân lập ựược
3. đỐI TƯỢNG Ờ NỘI DUN G NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.4.Phương pháp xác ựịnh serotype của các chủng vi khuẩn phân lập ựược
ựược
3.4.4.1. Phương pháp xác ựịnh serotype của vi khuẩn Ạ pleuropneumoniae bằng phương pháp ngưng kết với kháng huyết thanh chuẩn
- Chuẩn bị kháng huyết thanh: Kháng huyết thanh chuẩn
Ạ pleuropneumoniae ựược pha loãng theo cơ số 2 thành: 1/2, 1/4, 1/8. Sau ựó ủ với protein A chiết xuất từ Staphylococcus aureus theo tỷ lệ 1:5 trong thời gian 2 giờ ở 370C.
- Chuẩn bị kháng nguyên: Cấy vi khuẩn trên môi trường TSA trong thời gian 18 giờ, sau ựó thu hoạch với nước sinh lý.
- Tiến hành: Lấy 10 ộl kháng huyết thanh chuẩn hòa lẫn với 10 ộl kháng nguyên, trộn ựều trong vòng khoảng 5 giâỵ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 - Kết quả: xuất hiện phản ứng ngưng kết lên bông thì phản ứng dương tắnh, không xuất hiện ngưng kết thì phản ứng âm tắnh.
3.4.4.2. Phương pháp xác ựịnh serotype của vi khuẩn P. multocidabằng phản ứng PCR
Các typ giáp mô A, B, D của vi khuẩn P. multocida ựược xác ựịnh dựa trên phản ứng PCR phức hợp (Multiplex PCR), tức là sử dụng nhiều loại mồi khác nhau trong cùng một phản ứng, gồm các cặp mồi: CAPA-F và CAPA-R ựể xác ựịnh serotype A, CAPB-F và CAPB-R ựể xác ựịnh serotype B, CAPD- F và CAPD-R ựể xác ựịnh serotype D. Trình tự các cặp mồi và kắch cỡ sản phẩm ựược trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1: Trình tự các cặp mồi dùng ựể xác ựịnh serotyp A, B, D của vi khuẩn P. multocida
Serotyp Ký hiệu
mồi Trình tự mồi
Sản phẩm
(bp) CAPA-F 5Ỗ-TGC CAA AAT CGC AGT GAG-3Ỗ
A