thành biofilm của vi khuẩn
Nguyên tắc: trong điều kiện dinh dưỡng thích hợp và môi trường nuôi cấy tĩnh trên
một bề mặt giá thể các chủng vi sinh vật hình thành biofilm trên bề mặt giá thể. Phát hiện, quan sát biofilm bằng cách nhuộm với tím kết tinh – là chất có khả năng bắt màu với tế bào vi khuẩn.
Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp của O’Toole và cộng sự [50].
Các chủng vi khuẩn được lắc kích hoạt trong bình tam giác chứa môi trường TYG trong 24 giờ ở 37oC sao cho mật độ tế bào đo ở bước sóng 620nm ở vào khoảng 0,2- 0,3. Hút 100µl dịch nuôi cấy vi khuẩn bổ sung vào 700µl TYG lỏng trong các ống effendorf đã khử trùng và ủ trong điều kiện tĩnh ở 37o
C trong 24 giờ. Ống đối chứng được bổ sung thêm H2O cùng lúc với dịch nuôi cấy vi khuẩn. Đối với các ống effendorf nghiên cứu tác dụng của dịch chiết thì dịch chiết được bổ sung cùng lúc với dịch nuôi cấy vi khuẩn.
Sau 48 giờ các màng nổi và dịch nuôi cấy được loại bỏ cẩn thận ra khỏi các ống effendorf. Quan sát khả năng hình thành biofilm: Mỗi ống effendorf được rửa sạch 2 lần bằng nước cất khử trùng. Bổ sung vào mỗi ống effendorf 1ml dung dịch tím tinh thể 1% và giữ trong 20 phút ở nhiệt độ phòng. Loại bỏ dung dịch nhuộm và quan sát sự bắt màu của các tế bào bám trên trên thành ống với tím kết tinh.
Định lượng mức độ tạo biofilm: Sau khi rửa sạch 2 lần bằng nước cất khử trùng các tinh thể tím bám trên thành effendorf được hòa tan trong 1ml etanol 70o. Mật độ tế bào trong biofilm được xác định bằng cách đo độ hấp thụ ở bước sóng 570nm.
Luận văn thạc sĩ 36