- Phân loại dựa vào khả năng gây bệnh cho người và các động vật: Vi khuẩn lao người, vi khuẩn lao bò, vi khuẩn lao chim, vi khuẩn lao chuột.
2.5.3. Kỹ thuật nuôi cấy vi khuẩn lao * Khử tạp:
* Khử tạp:
- Chắt 3-5 ml đờm vào tube ly tâm nhựa 50ml nắp xoáy.
- Thêm 1 thể tích dung dịch khử tạp tương đương với thể tích đờm, xoáy chặt nắp. - Lắc trên máy vortex cho đến khi đờm nhuyễn hóa hoàn toàn (5-20 giây), lộn ngược tube để toàn bộ bề mặt bên trong tube được tiếp xúc với dung dịch khử tạp. - Để đứng tube 15 phút ở nhiệt độ phòng thí nghiệm (thỉnh thoảng vortex nhẹ), tạo thành huyền dịch khử tạp.
- Mỗi lần khử tạp chỉ nên xử lý 6-8 mẫu để đảm bảo đúng thời gian.
Với mẫu dịch chọc dò màng phổi không cần tiến hành khử tạp mẫu bệnh phẩm.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Kiểm tra ống môi trường trước khi nuôi cấy, nếu nhiều nước đọng thì phải chắt bỏ.
- Mỗi mẫu cấy 2 ống môi trường Ogawa Mark, nhỏ vào mỗi ống môi trường 2-3 giọt (0,1ml) huyền dịch đã khử tạp.
- Láng đều huyền dịch trên mặt ống môi trường, xoáy nắp nhẹ.
- Đặt ống môi trường nghiêng trên khay, mặt vát quay lên trên, đảm bảo huyền dịch rải đều trên bề mặt môi trường.
- Làm một tiêu bản nhuộm Ziehl.
- Đặt môi trường đã cấy vào tủ ấm 35-370C, thường xuyên theo dõi nhiệt độ ủ ấm.
* Theo dõi và đánh giá kết quả nuôi cấy:
- Kiểm tra nhiễm trùng: sau 24-48 giờ
- Kiểm tra sau 72 giờ: mặt môi trường khô, xoáy nắp chặt vừa phải để tránh bay hơi làm khô môi trường.
- Sau 8 tuần không có khuẩn lạc mọc, đọc kết quả âm tính.
* Đọc và báo cáo kết quả nuôi cấy:
Bảng 2.2. Phân loại kết quả nuôi cấy
Đọc kết quả cấy Báo cáo kết quả cấy
Không thấy khuẩn lạc Âm tính
1-19 khuẩn lạc Dương tính: ghi số khuẩn lạc 20-100 khuẩn lạc Dương tính: 1 + >100-200 khuẩn lạc Dương tính: 2 + >200-500 khuẩn lạc Dương tính: 3 + >500 khuẩn lạc Dương tính: 4 +
Ngoại nhiễm Ngoại nhiễm
+ Trả kết quả ngoại nhiễm vào phiếu xét nghiệm khi ngoại nhiễm xảy ra trên cả 2 ống cấy [25, 27, 31, 32].