- Exfoliatine: là các enzim phá hủy lớp thượng bì Men này gây tổn thương da tạo các bọng nước Ví dụ điển hình là hội chứng Lyell do tụ cầu.
S treptococcus Proteus
2.3.2. Phƣơng pháp xác định chỉ tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí có trong thịt lơn tƣơ
lơn tƣơi
Xác định chỉ tiêu tổng số VKHK trong thịt tươi áp dụng theo TCVN 5667:1992 [16].
* Nguyên tắc
Sử dụng kỹ thuật nuôi cấy láng, đếm vi khuẩn trên môi trường Plate Count Agar (PCA) có pH = 7,0 ± 0,2; ủ hiếu khí ở 370C trong thời gian 24h. Số lượng vi khuẩn hiếu khí có trong 1gram mẫu theo số khuẩn lạc đếm được từ đĩa thạch nuôi cấy theo các nồng độ khác nhau.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
* Môi trường và hóa chất
- Môi trường sử dụng là Plate Count Agar có pH = 7,0 ± 0,2. Môi trường được pha chế theo tỷ lệ 225gram trong 1000ml nước cất. Cho môi trường vào trong bình thủy tinh vô trùng, hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút. Sau đó để môi trường nguội ở 450C, đổ ra các đĩa petri trong buồng nuôi cấy vô trùng bên cạnh ngọn lửa đèn cồn.
- Dung dịch muối sinh lý 0,9 ‰: Dùng để pha loãng mẫu. Dung dịch này được chứa trong các bình có thể tích 500ml hoặc 1000ml, hấp khử trùng và được phân phối thành các thể tích chính xác 9ml vào các ống nghiệm vô trùng.
* Cách tiến hành
- Chuẩn bị trước khi nuôi cấy: Trước khi tiến hành phân tích thực hiện đồng nhất các bước như sau: Lấy thịt lợn ngẫu nhiên ở các vị trí khác nhau, cho vào cối sứ vô trùng nghiền nhỏ. Cân chính xác trong điều kiện vô trùng 10gram mẫu rồi cho vào bình tam giác đã chứa sẵn 90ml dung dịch muối sinh lý 0,9 ‰ đã được hấp khử trùng. Lắc đều trong một thời gian nhất định đảm bảo cho mẫu thịt tan hoàn toàn trong dung dịch muối sinh lý.
Đối với mẫu dạng lỏng, hút 10ml dịch cho vào bình tam giác chứa sẵn 90ml nước muối sinh lý 0,9‰. Sau khi đồng nhất mẫu, dung dịch thu được có độ pha loãng 10-1 so với ban đầu.
Dung dịch đồng nhất tiếp tục được pha loãng theo dãy thập phân bằng cách dùng pipetman với đầu hút vô trùng chuyển 1ml dung dịch mẫu ở bình tam giác đậm độ 10-1
sang ống nghiệm chứa sẵn 9ml nước muối sinh lý 9‰; ta thu
được dung dịch có độ pha loãng 10-2. Sau đó sử dụng pipetman có đầu hút vô
trùng khác hút 1ml dung dịch mẫu ở ống nghiệm có đậm độ pha loãng 10-2 chuyển sang ống nghiệm có chứa sẵn 9ml nước muối sinh lý 9‰; ta thu được dung dịch có độ pha loãng 10-3. Thao tác tương tự như vậy để có được các dung
dịch mẫu có nồng độ pha loãng 10-3
, 10-4… cho đến khi có được dung dịch mẫu
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Nếu đầu hút của pipetman có nguy cơ bị nhiễm tạp khuẩn trong quá trình thao tác (chạm tay, chạm mặt ngoài ống nghiệm, mặt ngoài bình chứa,…) thì cần phải thay đầu hút vô trùng khác.
- Nuôi cấy: Mẫu kiểm nghiệm nuôi cấy ít nhất 2 đậm độ liên tiếp, mỗi đậm độ cấy vào 2 đĩa thạch và phải dùng que cấy riêng. Dùng pipetman với đầu hút vô trùng lấy 0,2ml dung dịch mẫu pha loãng ở các nồng độ khác nhau rồi nhỏ lên mặt thạch, láng đều sao cho dung dịch nuôi cấy phân bố đều trên mặt thạch. Sau đó cho vào tủ ấm ở nhiệt độ 370C trong thời gian 24h rồi đọc kết quả.
Chọn những đĩa có từ 15-300 khuẩn lạc ở các đĩa của 2 độ pha loãng liên tiếp. Sự phân bố các khuẩn lạc trên các đĩa nuôi cấy phải hợp lý: Độ pha loãng càng cao thì số khuẩn lạc càng ít. Nếu chênh lệch giữa các giá trị của 2 đậm độ nhỏ hơn hoặc bằng 2 thì tính (N – Số khuẩn lạc VKHK cho 1 gram thịt) bằng cách tính trung bình cộng tổng số khuẩn lạc của các đĩa trên theo công thức sau: