Từ các phân đoạn có hoạt độ endochitinase được xác định ở trên, chúng tôi tiến hành rửa giải băng protein có HđC endochitinase từ gel polyacrylamide sau điện di native-PAGE trong đệm Tris-HCl pH 6,8. Xác định trọng lượng phân tử các isozyme đó bằng phương pháp SDS-PAGE. Kết quả thể hiện ở hình 3.2.
A A A B Chi1 Chi2 SR1 SR2
Hình 3.2. Kết quả SDS-PAGE hai isozyme endochitinase. Cơ chất cảm ứng là chitin 1% (Chi1 và Chi2) và vách tế bào nấm S. rolfsii 0,5% (SR1 và SR2) cùng với
mẫu thô tương ứng (Chi và SR)
Đối chiếu kết quả với đường chuẩn thang protein ở bảng 6.8 và đồ thị 6.1 cho thấy khi cơ chất cảm ứng chitin 1,0% thì hai phân đoạn isozyme endochitinase có trọng lượng phân tử lần lượt 52 kDa (Chi1) và 42 kDa (Chi2); khi cơ chất cảm ứng vách tế bào nấm S. rolfsii 0,5% là 42 kDa (SR1) và 36 kDa (SR2). Endochitinase 42 kDa được cảm ứng sinh tổng hợp ở cả hai loại cơ chất. Theo những nghiên cứu của một số tác giả trước đây cũng đã chứng minh, endochitinase 42 kDa ở Trichoderma
được cảm ứng tổng hợp một cách thường xuyên, và trên một phổ rộng cơ chất khác nhau. Đặc biệt sự sinh tổng hợp chitinase được cảm ứng biểu hiện mạnh khi cơ chất cảm ứng là vách một số tế bào nấm gây bệnh thực vật [5], [33].
Từ những kết quả trên, chúng tôi chọn gene ech42, gene mã hóa cho endochitinase 42 kDa làm đối tượng cho việc định lượng tương đối sự biểu hiện gene sử dụng kỹ thuật real-time RT-PCR và phương pháp 2-∆∆Ct. Tuy nhiên để việc định lượng sự biểu hiện ech42 khi cảm ứng với cơ chất một cách chính xác, T. longibrachiatum TD16 cần được nuôi trong môi trường chứa cơ chất cảm ứng như nguồn carbon duy nhất.