Sau khi chạy điện di xong, cẩn thận lấy gel ra ngâm trong dung dịch nhuộm màu protein (Coomassive Brilliant Blue R250 (CBB) 0,2% hòa tan trong 45:45:10% methanol : nước : acetic acid), lay động nhẹ trong thời gian 2 - 3 giờ.
Chuyển gel sang dung dịch rửa mẫu (25:65:10% methanol : nước : acid acetic), thay dung dịch rửa mẫu khoảng vài lần cho đến khi thấy gel có màu trong suốt là được. Những vạch màu xanh trên nền trắng là những băng protein.
2.4.8. Phương pháp xác định trọng lượng phân tử protein sau điện di SDS PAGE PAGE
Nguyên tắc
Trong kĩ thuật điện di sử dụng gel polyacrylamide làm mạng rây phân tử và có SDS làm chất hoạt động bề mặt. Tốc độ di chuyển của phân tử protein tỉ lệ nghịch với trọng lượng phân tử. Dựa vào vận tốc di chuyển của các phân tử chuẩn đã biết phân tử lượng ta sẽ tính được trọng lượng của các phân tử protein có trong mẫu.
Trọng lượng của một phân tử protein cần nghiên cứu sẽ được xác định khi cho phân tử protein này tiến hành điện di đồng thời với một thang protein chuẩn (Marker) gồm những protein có trọng lượng phân tửđã biết [3].
Tiến hành
Sau khi tiến hành điện di, các protein chuẩn sẽ nằm tại vị trí xác định trên bảng gel.
Đo khoảng dịch chuyển của các protein chuẩn so với điểm xuất phát là điểm đầu ngay khi các protein tiến vào gel phân tách: X1, X2, X3,…Tính được các giá trị LgX1, LgX2, LgX3,…
Với trọng lượng của các protein chuẩn tương ứng (M1, M2, M3,…). Tính các LgM1, LgM2, LgM3,…
Xác định phương trình tuyến tính của đường chuẩn: phương trình tuyến tính của đường chuẩn biểu thị sự tương quan của các giá trị LogX thu được và các giá trị Log M của các protein chuẩn.
Sử dụng chương trình Excel với hàm nội suy Forecast suy ra trọng lượng phân tử protein đích.